Flk-1^+间充质干细胞和SP细胞参与肠道损伤修复的比较

目的比较骨髓来源Flk-1+间充质干细胞和肠道上皮来源的SP细胞生物学特征及参与肠道放射性损伤修复的潜能及机制。方法流式细胞仪分析免疫表型;在肠道放射性损伤小鼠模型中,观察移植细胞的分布、分化及各组受体鼠照射后组织病理学改变及长期纤维化情况。结果这两个干细胞亚群的免疫学表型存在很大的差异;在肠道放射性损伤模型中均能够快速归巢到损伤的肠道局部,参与肠道上皮细胞的损伤修复,减轻照射后引起的纤维化胶原沉积。SP细胞移植后主要分布在肠道上皮,而Flk-1+间充质干细胞除了分布在肠道上皮外,还参与肠道间质的修复。结论骨髓来源Flk-1+间充质干细胞和肠道上皮来源的SP细胞都能有效的参与肠道放射性损伤修复,但修复机制上有差异。

二乙基亚硝胺诱导转化的肝癌肝组织小鼠中SP细胞的观察

目的:研究小鼠肝癌组织中的SP细胞,从而推测肝癌干细胞(CSC)存在的可能性。方法:首先用致癌剂二乙基亚硝胺(DEN)诱导B6C3F1雄性小鼠发生肝癌,在无菌条件下,将肝癌组织消化成单细胞悬液,然后用荧光染料Hoechst 33342对细胞悬液进行染色分析。结果:在原代分离的小鼠肝癌细胞群中观察到SP细胞的存在。结论:实验结果推测,在药物诱导转化的小鼠肝癌组织中很可能存在CSC。

人口腔上皮样癌KB细胞及其SP细胞在NOD/SCID小鼠皮下成瘤性的研究

目的:研究KB细胞及其SP细胞在NOD/SCID小鼠中的生长。方法:用流式细胞仪分离SP细胞,分别用KB细胞和分离出的SP细胞种植NOD/SCID小鼠皮下,观察移植瘤的生长。结果:注射1×106、1×107个KB细胞的鼠产生移植瘤,注射1×104、1×105个KB细胞的鼠均未产生移植瘤。注射1×105个SP细胞的鼠产生移植瘤,注射1×102、1×103、1×104个SP细胞的鼠均未产生移植瘤。结论:SP细胞产生移植瘤的能力比KB细胞强。移植瘤组织病理特点与人口腔粘膜癌基本一致。

人胆囊癌SP细胞的分离及其干细胞标记物的表达

目的:探索在人胆囊癌GBC-SD细胞系中是否存在具有干细胞特性的SP细胞(side population cells),以及SP细胞、非SP细胞和GBC-SD细胞系表达常见干细胞标记物ABCG2、Oct-4、CD34的情况。方法:采用荧光激活细胞分选技术(FACS)分选出人胆囊癌SP细胞和非SP细胞,通过RT-PCR、Western blot、流式细胞术以及免疫荧光化学技术检测SP细胞、非SP细胞以及GBC-SD细胞系表达ABCG2、Oct-4和CD34的情况。结果:人胆囊癌GBC-SD细胞系中存在着少量的具有干细胞潜能的SP细胞,其所占的比例为(0.64±0.08)%,SP细胞相对于非SP细胞和GBC-SD细胞,具有更强的体外侵袭力(P<0.05);并且ABCG2在胆囊癌SP细胞中呈现出高表达的状态(89.56±3.86)%,在非SP细胞中几乎不表达(1.32±0.49)%,在未分选胆囊癌细胞系中ABCG2呈弱表达(12.37±1.61)%,P=0.001;Oct-4在三种细胞中的表达分别为:(94.87±1.40)%、(88.16±2.34)%、(90.17±1.61)%,P>0.05;CD34在mRNA水平高表达于非SP细胞和GBC-SD细胞,不表达于SP细胞;在蛋白水平几乎均不表达于这三种细胞,其含量依次为:(1.78±0.51)%、(0.63±0.21)%、(0.96±0_38)%,P>0.05。结论:人胆囊癌GBC-SD细胞系中存在具有干细胞特性的SP细胞,并且具有ABCG2^+Oct-4^+CD34^-的表型特征。

A549/DDP耐药肺癌细胞系的建立及其与SP细胞的关系

目的:建立耐顺铂(DDP)人肺癌耐药细胞系A549/DDP,初步探讨耐药细胞与肿瘤SP(sidepopulationcell)细胞的关系。方法:以DDP为诱导剂,采用高浓度反复间歇诱导法诱导建立人肺癌耐药细胞系A549/DDP,用MTT法测定药物敏感性,最后将耐药细胞和亲本细胞分别行Hoechst33342染色,用流式细胞仪检测SP细胞含量。结果:成功建立DDP耐药细胞系A549/DDP,对DDP的耐药指数为5.957;耐药谱分析表明其是一个多药耐药细胞系;Hoechst33342染色分析显示:A549和A549/DDP中SP细胞含量分别为1.09%和0.31%。结论:建立了稳定的人肺癌多药耐药耐药细胞系A549/DDP,耐药细胞中SP细胞含量无明显变化。

SP细胞分选与肿瘤干细胞关系的研究进展

肿瘤干细胞已成为肿瘤研究的热点之一,但是由于缺乏特异的表面标记,肿瘤干细胞的分离纯化一直是亟待解决的难题.由于SP(side population)细胞富含干细胞样细胞,并且SP细胞具有较明确的表型标记和分离方法,近年来,通过流式细胞仪分选SP细胞的方法越来越多地应用在肿瘤干细胞的研究中.

CD55高表达在分离乳腺癌SP细胞中的作用研究

目的探讨应用细胞CD55高表达的特性替代Hoechst33342染色来分离乳腺癌SP细胞的可行性。方法应用Hoechst 33342及抗CD55抗体对两种乳腺癌细胞株进行荧光染色,应用FACS-Vantage和FACSVantageSE分选SP和MP细胞、CD55高表达(CD55hi)和CD55低表达(CD55lo)细胞,对比2组细胞对血清缺失诱导的凋亡的耐受性及CD55hi和CD55lo细胞的克隆形成能力。结果对分选的CD55hi和CD55lo细胞行Hoechst 33342染色,2组细胞分别位于SP和MP区域中。在血清缺失情况下,SP细胞和CD55hi细胞分别比MP细胞和CD55lo细胞对凋亡刺激具有更高的耐受性。CD55hi细胞较CD55lo细胞具有更强的克隆形成能力。结论细胞CD55高表达的特性可以替代Hoechst33342染色用于分离乳腺癌SP细胞。

人肺腺癌A549细胞系SP细胞亚群的分选及初步探讨

目的:探讨一种简单有效的分离肺癌干细胞的方法。方法:用免疫组化方法检测人肺腺癌A549细胞系中ABCG2蛋白的表达情况;用流式细胞学方法分选A549细胞系中sidepo pulationcells(SP细胞)及非SP细胞亚群,并对该两亚群细胞的分化功能进行检测;用RT-PCR方法检测两亚群细胞ABCG2的表达。结果:免疫组化方法检测A549细胞系中ABCG2蛋白的阳性表达率为2%。流式方法成功分选得到SP细胞及非SP细胞亚群,其中SP细胞含量约为A549活细胞总量的1.09%,经拮抗剂Verapamil处理后下降为0.20%,两亚群细胞经培养后重新上机检测,发现SP细胞亚群可产生SP细胞及非SP两种细胞,而非SP细胞只能产生非SP细胞。SP细胞表达ABCG2,非SP细胞则不表达。结论:人肺腺癌A549细胞系SP亚群细胞富集了肺癌干细胞。通过流式细胞仪分选肺腺癌SP细胞亚群是分离肺腺癌干细胞的有效方法。

TSG101和ABCG2基因在结肠癌SP细胞增殖及耐药发生和发展中的作用

目的探讨TSG101基因和ABCG2基因在结肠癌SP细胞的表达及对耐药性的影响。方法用流式细胞仪从结肠癌组织标本中分离结肠癌SP细胞,并用裸鼠鉴定,将结肠癌SP细胞置于体外含长春新碱抗癌药物的培养液中进行细胞培养,观察SP细胞对常规抗癌药物的多药耐药现象,应用RT-PCR检测结肠癌SP细胞TSG101基因和ABCG2基因的表达。结果从结肠癌组织中成功分选出结肠癌SP细胞,种植裸鼠皮下长出移植瘤;用MTT法检测发现,0.5μg/mL浓度长春新碱对SP细胞的生长抑制作用不明显,其存活率约为81%,而对非SP细胞的抑制作用明显,其存活率仅为37%,差异有统计学意义;RT-PCR检测SP和非SP细胞TSG101、ABCG2基因表达差异均有显著性(P<0.05)。结论TSG101和ABCG2在结肠癌增殖和耐药的发生和发展中有重要作用。

成体干细胞中的SP细胞群

成体干细胞研究中,SP细胞是近年来在多种不同种属的哺乳动物组织中被发现的细胞群体,是另一类主要在骨髓和肌肉中发现的多潜能干细胞,具有向不同于本身起源组织的多种细胞类型分化的能力。它们数目较少,且分布、分化、表面标志和功能等都不是十分清楚。综述了SP细胞的命名,分离获取方法,多种组织细胞中SP细胞群的表面标志、分化特征。此外,SP细胞表型的基因调控,SP细胞在干细胞移植尤其是在未来临床治疗方面的应用。最后,对SP细胞的研究进行了展望。

人口腔上皮样癌KB细胞系SP细胞及肿瘤球生长的研究

目的:研究不同条件下口腔上皮样癌KB细胞及肿瘤球的生长特点。方法:用荧光染料Hoechst33342染色培养在有血清和无血清培养基中的KB细胞,用荧光显微镜观察SP细胞的形态。MTT法绘制KB细胞生长曲线。显微镜观察肿瘤球的生长。结果:用荧光显微镜在有血清和无血清培养基中均观察到KB细胞系中存在浅染和拒染的SP细胞,部分细胞出现偏染现象。酶标仪检测结果显示在有血清和无血清培养液培养的KB细胞,繁殖能力不同。在无血清培养液中可以培育出肿瘤球。结论:有血清和无血清培养液培养的KB细胞生长存在差异,肿瘤细胞可能存在不对称分裂,无血清培养液可培育出繁殖能力强的肿瘤球。

干细胞样SP细胞研究进展

干细胞样SP细胞是近年来在很多正常组织和恶性肿瘤组织及细胞系中发现的一种具有不同程度分化潜能和自我更新能力的细胞群体。虽然SP细胞在总体细胞中所占比例很低,但这部分具有干细胞特性的细胞在干细胞以及肿瘤干细胞研究方面起着越来越重要的作用。本文综述了SP细胞的发现、生物学特性、与肿瘤干细胞之间的关系以及SP细胞的未来临床应用等。最后对SP细胞的发展进行了展望。

SP细胞研究进展

SP(side population)细胞是细胞群体中极少的一部分,它们可将进入细胞核的荧光染料排出胞外,在荧光显微镜下观察或流式细胞检测时表现为不着色,故称为SP细胞。已发现SP细胞和干细胞具有很多共性,且与肿瘤干细胞很相似。对SP细胞及其性质、分离方法、用途,以及SP细胞与肿瘤干细胞的关系等进行了简要阐述。

SP细胞的研究现状

在干细胞研究中,侧群(side population,SP)表型是指用来表示某些细胞具有的将进入细胞的荧光染料Hoechst33342或诺丹明123排出的特性,将利用该特性分离的细胞称为侧群细胞(side population cell,SP细胞)。众多实验提示SP表型可能是干细胞或前体细胞的筛选标志。然而也有实验指出SP细胞与干细胞存在差异,因此对SP细胞的研究日益深入。本文就SP表型的形成及影响因素,SP细胞与干细胞的一致性及差异性等研究现状作一综述。

化放疗对宫颈癌组织SP细胞和非SP细胞影响的初步研究

目的 探讨化放疗前后宫颈癌组织中SP细胞和非SP的水平及其生物学特性的变化.方法 选取确诊宫颈癌患者60例（IB2-IIIB期）,30例给予静脉化疗2程PTX＋DDP,PTX 175 mg/m2,静脉注射,第1天;DDP 80 mg/m2,静脉注射,第1～3天;21d为1周期.化疗组患者在化疗前和2程化疗后各取材1次.30例患者行根治性放疗,放疗患者在放疗前和放疗2周后（即大野照射DT20 Gy/10次）各取材1次.采用流式细胞技术检测和比较治疗前后宫颈癌组织原代培养细胞中SP细胞和非SP细胞的水平及其生物学标记的变化.结果 宫颈癌组织SP细胞水平在治疗后比例明显增加[化疗前后（1.63±0.50）％vs（7.96±1.39）％]; [放疗前后（1.63±0.46） ％vs （4.51±0.72）％],差异有统计学意义（P＜0.05）.SP细胞生物学标记（ABCG2、CD133、CD43、P63）的表达率治疗前后无统计学差异,而Ki-67和MDR在治疗后比例明显增加[Ki-67化疗前后（14.77± 1.97） ％vs （23.49±2.23）％], [放疗前后（14.61±1.40％） vs （23.10±1.82）％]; [MDR化疗前后（59.31±11.13） ％vs （68.91±9.94）％], [放疗前后57.42±11.22％ vs 59.37±10.73）％],差异有统计学意义（P＜0.05）.SP细胞周期和细胞增殖状况在治疗前后无明显变化,差异无统计学意义（P＞0.05）.非SP细胞生物学标记Ki-67和MDR在治疗后比例明显增加[Ki-67化疗前后（40.48±3.35）％vs （46.29±3.71）％], [放疗前后（40.22±4.70）％vs （45.82±4.55）％]; [MDR化疗前后（17.76±1.61）％vs （34.36±3.15）％], [放疗前后（17.66±1.71）％vs （19.21±1.98）％],差异有统计学意义（P＜0.05）.治疗后的非SP细胞在G0/1期和S期的比例明显下降,在G2/M期、凋亡和坏死比例明显增加,差异均有统计学差异（P＜0.05）.结论 化放疗主要杀伤非SP细胞,化放疗后的SP细胞保持肿瘤干细胞生物学特性,对化放疗具有抗拒性,这为进一步研究宫颈癌干细胞的靶向治疗奠定基础.

乳腺癌组织和MCF-7细胞株中SP细胞水平和生物学特性的比较

目的比较乳腺癌组织和MCF-7细胞株中SP细胞的含量和生物学特性.方法采用Altra流式细胞仪分选出乳腺癌组织原代培养6代细胞和MCF-7细胞株中SP细胞,检测2种来源SP细胞的表面标记和细胞周期增殖状况.结果乳腺癌组织和MCF-7细胞株中SP水平分别为4.68%和12.43%,MCF-7细胞株中SP水平显著高于乳腺癌组织.2种来源的SP细胞的生物学标记(ABCG2、CD133、CD43、CD24、Ki-67、MDR表达率)及细胞周期时相分布(G0/G1期、S期、G2/M期、凋亡率、坏死率),细胞生物学特性差异均无统计学意义(P>0.05).结论乳腺癌实体组织中存在SP细胞,但低于MCF-7细胞株中SP细胞水平,不论是乳腺癌实体组织或MCF-7,其SP细胞都具有肿瘤干细胞的生物学特性.为乳腺癌组织干细胞的分选提供了一定的实验基础和理论依据.

胎儿胰腺来源的单克隆SP细胞具有间充质的表型特征

目的:探索一种新的人胰腺干细胞分离纯化体系,并对经这一体系所获细胞的特性进行研究.方法:首先从胎儿胰腺中分离得到胰岛样细胞簇(ICCs),进而从ICCs中得到单层上皮样细胞,并传代培养,第6代细胞通过荧光激活细胞分选(FACS)技术分选出sidepopulation(SP)细胞和非SP细胞后进行单克隆细胞培养.应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和FACS分析,研究单克隆SP细胞的体外增殖特性和表面标志.结果:SP细胞占全部细胞的0.22%。SP细胞的克隆形成率为2.7%,而非SP细胞没有克隆形成.SP克隆能够在体外传15代以上.RT-PCR显示单克隆SP细胞可表达ATP结合盒转运子G2(ABCG2)和转录因子OCT4.FACS分析显示CD44,CDl47均为阳性,而CD34,CD38,CD45,CD71,CD133及HLA-DR均为阴性.结论:胎儿胰腺来源的单克隆SP细胞在体外具有高度的增殖潜能,并具有与骨髓间充质干细胞相同的表型特征.

二甲双胍对MCF-7肿瘤细胞系SP细胞的抑制作用

目的研究二甲双胍、紫杉醇脂质体、他莫昔芬对人乳腺癌MCF-7肿瘤细胞系SP细胞的杀伤作用及相互的协同效应。方法将二甲双胍(0.3 mmol/L)、紫杉醇脂质体(60.0μg/L)、他莫昔芬(10.0μmol/L)分别对MCF-7肿瘤细胞进行单一或联合干预,并应用流式细胞仪分析SP细胞比例。结果空白对照组、二甲双胍组、紫杉醇脂质体组、他莫昔芬组、二甲双胍联合紫杉醇脂质体组、二甲双胍联合他莫昔芬组MCF-7肿瘤细胞系SP细胞比例各不相同,二甲双胍干预各组MCF-7肿瘤细胞系SP细胞比例分别较其余各组下降,差异均有统计学意义(P<0.01);二甲双胍干预各组MCF-7肿瘤细胞系SP细胞比例两两比较及非二甲双胍干预各组MCF-7肿瘤细胞系SP细胞比例两两比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 0.3 mmol/L二甲双胍可有效杀灭人乳腺癌MCF-7肿瘤细胞系SP细胞;二甲双胍与紫杉醇脂质体或他莫昔芬联用未表现出协同效应。

口腔鳞癌细胞系KB和Tca8113中的SP细胞含量分析

目的探讨两种口腔鳞状细胞癌细胞系KB和Tca8113中的侧群细胞的含量,寻找口腔鳞癌肿瘤干细胞存在的依据。方法采用有限稀释法对口腔鳞癌细胞系KB和Tca8113细胞株经Hoechst 33342/碘化丙啶(propidium iodide,PI)双染色后,采用流式细胞仪测定,分析两细胞株中侧群细胞的含量。结果口腔鳞癌细胞系KB和Tca8113中具有不同的表型,即侧群细胞和非侧群细胞。在体外培养中,KB和Tca8113细胞株中侧群细胞含量分别为0.6%和2.3%。经维拉帕米阻断后,侧群细胞含量均明显降低,分别降为0和0.1%。结论 KB和Tca8113细胞株中均存在侧群细胞,但含量较少。

低氧对人胃癌SGC7901细胞株SP细胞比例的影响与HIF-2α、OCT-4表达变化的关系

目的:通过观察低氧对人胃癌SGC7901细胞株侧群(side population,SP)细胞比例的影响及其与HIF-2α和OCT-4表达变化的关系,初步研究低氧对肿瘤干细胞的影响及机制。方法:Hoechst33342染色检测人胃癌SGC7901细胞系SP细胞比例,免疫荧光化学法检测OCT-4在SP和非SP细胞中的表达,免疫细胞化学法检测HIF-2α和OCT-4蛋白的表达。结果:常氧下人胃癌SGC7901细胞系中SP细胞的比例为2.36%,低氧诱导24、48、72h后其比例逐渐增加,分别为3.01%、3.23%、3.45%(P<0.05);常氧下OCT-4在SP和非SP细胞中的表达差异无统计学意义(P>0.05),低氧诱导24、48、72h后,OCT-4在SP细胞和非SP细胞中的表达逐渐增强(P<0.05),在SP细胞中的表达要高于非SP细胞。常氧下HIF-2α和OCT-4蛋白呈低水平表达,低氧诱导24、48、72h后,二者的表达逐渐增加(P<0.05),且HIF-2α和OCT-4蛋白呈高度正相关(P<0.05)。结论:低氧可使人胃癌SGC7901细胞系中的SP细胞增多,其机制可能与低氧诱导HIF-2α-OCT4通路的表达,促进肿瘤细胞的干细胞化及维持干细胞的未分化状态有关。