小鼠受精卵、卵裂球和桑椹胚细胞无SP表型

SP(side population)表型的概念在干细胞研究中用来表示某些细胞具有的将进入细胞的荧光染料如Hoechst 33342排出细胞的特性,这种表型的形成与ABCG2蛋白有关.近年研究报告某些干细胞及某些前体细胞具有SP表型,并提出SP表型可能是干细胞或前体细胞的筛选标志.在本研究中通过分离了小鼠受精卵、2细胞期及8细胞期卵裂球、桑椹胚和囊胚并直接进行Hoechst 33342染色,结果发现小鼠受精卵、卵裂球、桑椹胚细胞都不具有SP表型,但是处于其分化下游的囊胚中的内细胞团细胞却具有明显的SP表型,而同一囊胚中的滋养层细胞却不具有SP表型.该结果表明来源于内细胞团的胚胎干细胞具有的SP表型是内在的,与体外培养条件无关;另一方面该结果也提示SP表型至少是多能干细胞所具有的独特表型之一,但并不存在于更早期的全能干细胞.当在培养液中加入ABCG2蛋白抑制剂后直接导致囊胚中的内细胞团细胞SP表型消失,提示囊胚内细胞团细胞SP表型的形成与ABCG2蛋白具有密切相关性.以上结果表明并不是所有的干细胞都具有SP表型,SP表型可能可以作为某些种类的干细胞,如胚胎干细胞及某些成体组织干细胞的分选标志,但并不具有普遍性.

高表达ABCG2基因对人原发性肝癌细胞SP表型的影响

目的研究高表达ABCG2基因对人原发性肝癌细胞SP表型的影响。方法构建pMSCVpuro-ABCG2逆转录病毒质粒,并转染至病毒包装细胞PT67中,将获得的病毒上清液感染人原发性肝癌non-SP(Side population)细胞,筛选稳定感染的细胞系non-SP-ABCG2和non-SP-puro,RT-PCR法检测细胞中ABCG2基因的转录水平,Western blot法检测细胞中ABCG2蛋白的表达水平,显微镜观察细胞形态的变化,Hoechst33342染色分析细胞的SP表型。结果逆转录病毒质粒pMSCVpuro-ABCG2经双酶切及测序证实构建正确;non-SP-ABCG2细胞中ABCG2基因的转录和蛋白表达水平均较空载体pMSCVpuro转染的细胞non-SP-puro明显提高;non-SP-ABCG2细胞的形态发生改变,成梭形生长,偶见小三角样细胞,细胞生长缓慢,细胞间排列不紧密,并出现了SP表型。结论 ABCG2基因的高表达与细胞SP表型的形成具有一定的相关性,并能影响细胞的基本形态。

SP细胞的研究现状

在干细胞研究中,侧群(side population,SP)表型是指用来表示某些细胞具有的将进入细胞的荧光染料Hoechst33342或诺丹明123排出的特性,将利用该特性分离的细胞称为侧群细胞(side population cell,SP细胞)。众多实验提示SP表型可能是干细胞或前体细胞的筛选标志。然而也有实验指出SP细胞与干细胞存在差异,因此对SP细胞的研究日益深入。本文就SP表型的形成及影响因素,SP细胞与干细胞的一致性及差异性等研究现状作一综述。

ABCG2蛋白的研究现状

ABCG2作为一种转运蛋白,在维持细胞自身稳定及机体正常生理功能等方面起着重要作用,其功能发挥受内外环境因素的影响。随着干细胞研究的不断深入,发现它直接参与了干细胞特性——SP表型的形成,并且与肿瘤干细胞的多药抗性及肿瘤的发生和临床治疗密切相关,所以ABCG2应用于肿瘤治疗的可能性也日益受到关注。