SPARC基因过表达对卵巢癌淋巴结高转移细胞生物学特性的影响

该研究旨在探讨富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白基因(secreted protein acidic and rich in cysteine gene,SPARC)过表达对卵巢癌淋巴结高转移细胞(SKOV3-PM4)生物学特性的影响。构建SPARC基因的慢病毒表达载体并转染SKOV3-PM4细胞,Real-time PCR和Western blot验证转染后的表达效率,激光共聚焦免疫荧光进行蛋白的细胞定位,细胞计数法和集落形成实验测定细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期,Transwell小室实验测定细胞体外侵袭、迁移能力。实验结果显示,SPARC蛋白存在于核周及胞质;过表达SPARC基因后,SKOV3-PM4细胞增殖受到明显抑制(P<0.05);细胞周期检测结果显示,各期改变无明显差异;体外侵袭、迁移实验结果显示,SKOV3-PM4细胞侵袭、迁移能力显著降低(P<0.05)。实验结果表明,SPARC基因在卵巢癌淋巴结转移中可能发挥抑癌基因的生物学作用。

SPARC基因过表达对SKM-1细胞凋亡的影响

构建SPARC基因过表达载体,转染人骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)细胞系SKM-1细胞,探讨SPARC基因过表达对人MDS细胞系SKM-1细胞凋亡的影响。以pcDNA-SPARC为引物,PCR扩增SPARC基因;将靶基因克隆入慢病毒载体pGC-GV,构建含有SPARC基因的重组慢病毒载体pGC-GV-SPARC,测序检测正确性;将构建载体pGC-GV-SPARC转染人MDS细胞系SKM-1,流式细胞术检测转染效率,RT-PCR检测SKM-1细胞中SPARC mRNA表达,Western blot检测SPARC蛋白表达,MTS法测定小剂量阿糖胞苷(30 ng/mL)对实验组增殖抑制的影响,Annexin V检测SPARC基因转染后对人SKM-1细胞凋亡的影响。结果显示,构建含有SPARC基因的重组慢病毒载体pGC-GV-SPARC转染效率为(64.25±1.42)%;转染后,SPARC mRNA及蛋白表达在靶细胞中较对照组增多。小剂量阿糖胞苷对转染组的增殖抑制率明显高于其他组。SPARC基因转染后人SKM-1细胞凋亡率较未转染组明显增高,加入阿糖胞苷后人SKM-1细胞凋亡率较对照组明显增高。由此说明,作者成功构建了携带人SPARC基因的慢病毒载体,转染人SKM-1细胞系后稳定表达SPARC基因,SPARC过表达可抑制细胞增殖,且联合小剂量阿糖胞苷(30 ng/mL)更有效地抑制SKM-1细胞的增殖,并诱导其凋亡。

SPARC过表达通过调控CPBP/MLKL增强SKM-1细胞对Ara-C的敏感性

目的:探讨SPARC基因过表达对AML-MDS细胞株SKM-1阿糖胞苷(Ara-C)化疗敏感性的影响及调控机制。方法:该实验分为正常SKM-1细胞(对照)、空载(LV-NC)、SPARC过表达(LV-SPARC)、SKM-1细胞+30 ng/ml Ara-C(30ng/ml Ara-C)、LV-NC+30 ng/ml Ara-C和LV-SPARC+30 ng/ml Ara-C共6组。采用CCK-8法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡,RT-qPCR检测各组细胞SPARC、CPBP和MLKL的mRNA表达水平,Western blot检测相关蛋白表达水平。结果:SPARC过表达和Ara-C共处理后,细胞活性明显降低,细胞凋亡率明显增高,BCL-2蛋白表达水平显著降低,Bax蛋白表达水平显著增高(P<0.05)。与对照组相比,LV-SPARC+30 ng/ml Ara-C组的细胞周期明显阻滞于S期,CDK2表达水平显著降低,p27^(KIP1)表达水平明显增高(P<0.05)。与LV-SPARC组和30 ng/ml Ara-C组相比,LV-SPARC+30 ng/ml Ara-C组的CPBP和MLKL(p-MLKL)的m RNA和蛋白表达水平明显增高(P<0.05)。SPARC过表达和Ara-C共处理后,p-AKT蛋白表达水平降低,p53蛋白表达水平增高(P<0.05)。结论:SPARC过表达增强了SKM-1细胞对Ara-C的敏感性,促进了细胞周期阻滞和细胞凋亡能力,其机制可能与调控CPBP/MLKL途径相关。