电离辐射和紫杉醇诱导的KB细胞中SPATA5L1和Cyclin B2表达的变化

电离辐射与紫杉醇协同作用,可以诱导体外培养的人口腔上皮癌KB细胞出现G2/M阻滞,形成多核细胞,并最终造成死亡。先前通过基因芯片筛选研究发现,在经过电离辐射和/或紫杉醇作用后,有10条与细胞分裂有关的基因存在差异表达。本研究旨在通过Real-time PCR和Western Blot定量分析其中两条基因SPATA5L1和CyclinB2的表达变化,来揭示G2/M阻滞及多核细胞形成的分子机制。结果表明,在受到6 Gy以下不同剂量的电离辐射或电离辐射与40 nmol/L紫杉醇协同作用后,SPATA5L1的表达量明显增加,但同时Cyclin B2的表达量则下降。推测SPATA5L1上调表达和CyclinB2适度的下调表达,使受处理细胞在胞核分裂后阻止胞浆分裂而无法形成正常子代细胞,导致G2/M阻滞及多核细胞形成。

SPATA5L1真核表达载体的构建及其对KB细胞增殖和迁移的影响

目的通过构建过表达质粒并筛选稳定细胞株，研究SPATA5L1基因对KB细胞增殖和迁移的影响。方法PCR扩增SPATA5L1基因全长，用载体pEX．1构建重组质粒，测序成功后转染人口腔癌KB细胞，并设空载体作对照，经过G418压力筛选后获得单克隆细胞株，Real．timePCR、Westernblot验证SPATA5L1基因的表达，光镜观察SPATA5L1对KB细胞形态的影响，CCK．8法检测细胞增殖情况，划痕实验观察细胞迁移能力。结果测序结果显示质粒构建成功，经过G418压力筛选所得到的稳定表达细胞株，在转录水平和蛋白水平均检测到目的基因的高表达，且细胞由正常状态下的多边形变为梭形，细胞增殖能力和体外迁移能力明显提高（P〈0．05）。结论成功构建pEX-1-SPATA5L1表达载体并获得稳定细胞株，过表达SPATA5L1蛋白能使KB细胞形态变长，增殖和迁移加快。