5-氮杂-2’-脱氧胞苷对肺癌SPC—A1细胞和非小细胞肺癌组织中抑癌基因甲基化的作用

目的观察分泌型卷曲相关篮白1（SFRP1）基凶在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的甲基化状态，研究抑甲基化制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza—CdR）对肺癌SPC—A1细胞中SFRP1、p16和O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）基因甲基化的影响。方法采用甲基化特异性PCR（MSP）法和免疫组化sP法，检测60例NSCLC组织中SFRPl基因甲基化的状态和蛋白的表达，以21例肺良性病变组织作为对照。以5-Aza—CdR处理肺癌SPC—A1细胞，采用MSP法和RT—PCR法检测处理前后细胞中SFRP1、p16和MGMT基因的甲基化状态及相应mRNA的表达。结果SFRP1基因在60例NSCLC组织中的甲基化率为58．3％，明显高于肺良性病变组织（14．3％；X2=12．118，P=0．001）；SFRP1基因的甲基化与NSCLC的分化程度和淋巴结转移情况有关（均P〈0．05）。SFRP1蛋白在35例SFRPI基因甲基化的NSCLC组织中的阴性表达率为68．6％，明显高于非甲基化的NSCLC组织（24．0％；x2=9．613，P=0．002）；SFRPl蛋白的阴性表达与NSCLC的分化程度、临床分期以及淋巴结转移情况有关（均P〈0．05）。末用5-Aza—CdR处理时，SPC—A1细胞中SFRPI、p16和MGMT基因甲基化和mRNA的表达甚很低；应用不同浓度的5-Aza—dCR处理后，SPC—A1细胞中SFRP1、p16和MGMT基凶甲基化和mRNA的表达均显著上调（均P〈0．05）。结论SFRPl基因的甲基化与NSCI．C的发生发展密切相关；5-Aza—CdR能逆转SFRPI、p16和MGMT基凶的甲基化状态，促进其重新表达。

2,3,7,8-四氯二苯并-p-二恶英诱导肺癌SPC-A1细胞凋亡的研究

目的研究2,3,7,8-四氯二苯并-p-二恶英(TCDD)在体外诱导肺癌细胞系SPC-A1细胞凋亡的作用。方法用MTT法测定TCDD对SPC-A1细胞的毒性,采用流式细胞仪对细胞凋亡进行分析,通过HE染色观察细胞形态变化。结果SPC-A1细胞生长曲线表明,随着TCDD浓度增高,SPC-A1细胞生长率明显下降;细胞凋亡可在TCDD浓度为10 nmol/L,0.1μmol/L,1μmol/L处理24 h后出现;TCDD诱导SPC-A1细胞的凋亡具有时间和浓度依赖性;凋亡细胞主要表现为细胞体积缩小,核染色质固缩,亚二倍体峰出现。结论TCDD在体外能有效诱导SPC-A1细胞发生凋亡。