肺炎链球菌假想蛋白SPD0414的表达纯化及保守性分析

目的:获得纯化的肺炎链球菌(S.pn)重组假想蛋白SPD0414,并分析其在常见S.pn菌株中的保守性。方法:利用PCR方法扩增SPD0414蛋白胞外区核酸序列,将其克隆到原核表达载体ppSUMO内,转化到E.coliBL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后Ni-NTA树脂纯化重组蛋白。用SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白特异性及纯度。通过纯化蛋白免疫BALB/c小鼠制备其多克隆抗体,并用间接ELISA检测多克隆抗体的效价,Western blot方法分析多克隆抗体的特异性,同时,鉴定该蛋白在6种常见肺炎链球菌分离株的保守性。结果:克隆的SPD0414序列与Gene Bank中的数据相符,并实现了重组SPD0414蛋白高水平的可溶表达纯化蛋白免疫BALB/c小鼠获得高滴度、高特异性的的多克隆抗体,Western blot验证SPD0414蛋白在6株常见肺炎链球菌菌株中均有表达。结论:成功制备了高滴度、高特异性的SPD0414多克隆抗体,证实了SPD0414在肺炎链球菌不同菌株间保守性较高,为肺炎链球菌多肽联合疫苗的研制奠定了基础。

肺炎链球菌假想蛋白SPD0873的表达纯化及保守性分析

目的通过构建原核表达载体，获得纯化的肺炎链球菌S．pn重组假想蛋白SPD0873，并制备多克隆抗体，进一步分析其在常见S．pn菌株中的保守性。方法分离培养D39型肺炎链球菌，获取其基因组DNA。利用PCR方法扩增去除信号肽的spd0873序列，采用基因体外重组法将spd0873序列克隆到原核表达载体pET-32（a）内，测序鉴定。将重组质粒转化到E．coli Rossetta（DE3）中，经IPTG诱导大量表达融合6个组氨酸标签的SPD0873重组蛋白，经Ni—NTA树脂纯化后，获得的重组蛋白用SDS—PAGE和Western印迹鉴定；将鉴定后纯化的蛋白免疫BALB／C小鼠制备多克隆抗体，并用间接ELISA检测多克隆抗体的效价，Western印迹方法分析多克隆抗体的特异性，同时，鉴定该蛋白在5种常见肺炎链球菌分离株的保守性。结果克隆的spd0873序列与GenBank中的数据相符，并实现了SPD0873蛋白高水平的可溶表达。纯化蛋白免疫BALB／C小鼠获得高滴度、高特异性的的多克隆抗体，Western印迹验证SPD0873蛋白在5株常见肺炎链球菌菌株中均有表达。结论成功制备了高滴度、高特异性的SPD0873蛋白多克隆抗体，同时，检测到SPD0873蛋白在5种常见的肺炎链球菌菌株中非常保守，为研究该蛋白的生物学功能及肺炎链球菌多肽联合疫苗的研制奠定了基础。