异型双功能交联剂SPDP对C-藻蓝蛋白的光谱影响

一步阴离子交换层析法由钝顶螺旋藻中高效制备高纯度的C-藻蓝蛋白,纯化的C-藻蓝蛋白最大吸收峰位于620 nm,室温最大荧光发射峰位于640 nm。用异型双功能交联剂SPDP对C-藻蓝蛋白进行蛋白质交联,不同摩尔比的SPDP对C-藻蓝蛋白溶液的吸收光谱和室温荧光发射光谱有显著影响。随着SPDP/C-藻蓝蛋白摩尔比的增加,C-藻蓝蛋白的吸光度和相对荧光强度均不同程度降低,且室温荧光发射峰由640nm蓝移至630 nm。光谱研究结果表明用SPDP对C-藻蓝蛋白进行蛋白质交联时SPDP/C-藻蓝蛋白的摩尔比应小于100,否则荧光强度和荧光特性将发生显著改变。

蓖麻毒素及其SPDP修饰物对小鼠肝脏GSH含量的影响

目的： 观察蓖麻毒素（ＲＴ）修饰前后对小鼠肝脏毒性的影响． 方法： ＲＴ用３－（２－吡啶二巯基）丙酸Ｎ－羟基琥珀酰亚胺酯（ＳＰＤＰ） 一种异型双功能交联剂，进行化学修饰；生成ＲＴ的ＳＰＤＰ衍生物（ＰＤＰ－Ｒ），测定两者在不同剂量和时间对小鼠肝脏还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）含量的影响，以比较两者的毒性差别． 结果： 随着中毒剂量的增加和时间的延长，两者均可使小鼠肝脏ＧＳＨ含量下降（Ｐ＜ ０．０１），但ＲＴ组下降程度较ＰＤＰ－Ｒ组更加明显（Ｐ＜ ０．０１），表明ＰＤＰ－Ｒ对小鼠毒性弱于ＲＴ． 结论： 用ＳＰＤＰ修饰ＲＴ可降低其对小鼠的毒性，这对改进ＲＴ抗癌作用可能是一种有意义的尝试．

SPDP蛋白偶联技术在抗原构建中的应用

为了制备多功能复合避孕疫苗，利用异型双功能试剂N-琥珀酰胺-3-（2-吡啶二硫）-丙酸酯（SPDP）对复合抗原的构建进行了试验。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）结果表明抗原的偶联是成功的。葡萄球菌A蛋白（SPA）和牛血清白蛋白（BSA）被偶联到同一载体破伤风类毒素（TT）上，复合抗原的平均表观相对分子质量为3.4×105。该法有可能用于制备多功能复合抗原。

蓖麻毒素修饰物脂质体的研制及其抗肿瘤作用

目的：为了降低蓖麻毒素（ＲＴ）的毒性，保留其抗肿瘤活性。方法：采用３－（２－吡啶二硫基）Ｎ－羟基丙酸琥珀酰亚胺酯（ＳＰＤＰ）修饰ＲＴ，用改良逆相蒸发法制备脂质体包裹ＲＴ修饰物，实验观察脂质体包裹前后ＲＴ修饰物急性毒性及体内外抗肿瘤活性。结果：脂质体包裹ＲＴ修饰物小鼠腹腔ＬＤ５０比原毒素大３．２３倍，体外对胃癌细胞（ＳＧＣ－７９０１）有较强的杀伤性，体内对Ｓ１８０实体癌的抑癌率５４．５％（Ｐ＜０．０１），能显著延长荷癌小鼠的存活期，（Ｐ＜０．０１）。结论：脂质体包裹ＲＴ修饰物的毒性较原毒素低，有较强的抗肿瘤活性，有进一步研究价值。

穿膜肽-抗体-微球偶联物的制备方法研究

目的:探讨制备穿膜肽-抗体-微球新型药物传送系统的可行性。方法:采用N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫)-丙酸酯(SPDP)交联法将穿膜肽-增强型绿色荧光蛋白融合蛋白(CPPs-EGFP)、牛血清白蛋白微球(BSA-NS)、乙肝高效价免疫球蛋白(HBIg)分别采用一次偶联法和二次偶联法两种交联方案进行共价交联,采用还原和非还原SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫荧光法评价穿膜肽、抗体、微球间的交联。结果:两种交联方案制备的穿膜肽-抗体-微球偶联物,SDS-PAGE还原电泳均可见在低分子量端形成三条蛋白条带,非还原电泳均未见条带;在不同激发波长的荧光显微镜下,均可见微球表面分别发出绿色荧光和红色荧光。结论:应用SP-DP交联剂,无论是一次偶联法还是二次偶联法均能够将穿膜肽、抗体、微球有效地进行偶联,为进一步研究穿膜肽-抗体-微球新型药物传送系统的特性奠定了基础。

小分子靶向肽与力达霉素辅基蛋白偶联方法研究

目的:建立小分子靶向肽(RGD)_2C肽同时与力达霉素辅基蛋白氨基和羧基联接的方法。方法:先用交联剂SPDP与力达霉素辅基蛋白氨基端氨基反应,再用交联剂HPDP与力达霉素羧基在交联剂EDC存在时反应,最后将联接有SPDP与HPDP的力达霉素辅基蛋白与(RGD)_2C肽反应。上述三个过程分别用Sephadex G15葡聚糖凝胶柱纯化以除去小分子物质。以基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱检测联接结果。结果:在本实验条件下,小分子靶向肽(RGD)_2C肽同时与力达霉素辅基蛋白氨基与羧基成功联接,总的联接比为1:1和2:1。结论:采用交联剂SPDP和HPDP,可使小分子靶向肽同时与力达霉素氨基和羧基成功联接。

小分子物质抗体制备方法的研究

目的 :研究小分子物质 ( HCV C33核心肽、促红细胞生成素、青霉素 )抗体的制备。 方法 :用两种不同的连接剂 (戊二醛、异型双功能交联剂 SPDP与载体蛋白连接后免疫动物 ,制备多克隆及单克隆抗体。 结果 :用 SPDP作为连接剂 ,免疫效果优于戊二醛。 结论 :本法较易制备出青霉素抗体 (多克隆 )、HCV C33肽抗体 (单克隆 )和促红细胞生成素抗体

报废火药水解产物在冬小麦上应用的生物效应

我国每年有大量报废火药产生。报废火药的肥料化利用是一条重要途径。笔者通过种子萌发试验和盆栽试验,分别研究了报废火药水解产物对小麦萌发和灌浆期关键生理生化指标的影响;通过田间试验研究了含报废火药水解产物的叶面肥对冬小麦产量及其构成因子、经济效益、营养品质的影响。结果表明:报废火药水解产物,在浓度范围为0.01%~0.1%时能促进小麦种子萌发和幼苗生长,增加根冠比;当浓度为0.1%时,叶面喷施能显著提高冬小麦灌浆期旗叶叶绿素含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性,降低丙二醛含量,提高根系活力。含报废火药水解产物的叶面肥能提高冬小麦公顷穗数和穗粒数;大幅增加冬小麦产量和经济效益,分别较对照增加19.4%和2 395.3元/hm^2;明显提高小麦籽粒粗蛋白和淀粉含量,分别较对照提高11.11%和10.74%。

氨甲喋呤-人血清白蛋白-单抗79结合物的制备及其体外细胞毒作用

本研究采用间接连接法,应用异型双功能连接剂SPDP,形成以酰胺键和二硫键连接的氮甲喋吟-人血清白蛋白-单抗79(MTX-HSA-McAb79)结合物。其中McAb79与HSA克分子比有效地控制在1:1～2,且结合物的纯度及产率均较高,有一定的制备价值。 对靶细胞Nalm-6的体外细胞毒试验结果表明:MTX-HSA-McAb 79的杀伤活性显著强于MTX-HSA-nIgG,但较游离MTX的杀伤活性为弱。且MTX-HSA-McAb 79的杀伤作用依赖于McAb 79与靶抗原CALLA的抗原抗体反应。

穿膜肽与蛋白微球偶联物的制备及鉴定

目的:制备穿膜肽TAT-EGFP与白蛋白微球(BSA-NP)偶联物,并检测其对膀胱癌EJ细胞的穿膜活性。方法:通过异型双功能交联剂N-羟基琥珀酰亚胺基-3-(2-吡基二硫)-丙酸酯(SPDP)交联的方法制备穿膜肽TAT-EGFP与白蛋白微球偶联物。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、电镜、荧光显微镜及共聚焦显微镜检测其共价连接及活性。结果:SDS-PAGE电泳鉴定TAT-EGFP与白蛋白微球是通过共价键连接;电镜显示二联偶联物(TAT-EGFP-BSA-NP)的构象;荧光显微镜及电镜显示了二联偶联物的穿膜活性。结论:成功的制备穿膜肽TAT-EGFP与白蛋白微球偶联物-TAT-EGFP-BSA-NP,且偶联物对膀胱癌细胞有穿膜活性。