屎肠球菌细菌素Enterocin E9 SPE/HPLC分离纯化方法的建立

为了获得单一的细菌素Enterocin E9成分,使其发挥最大抑菌活性,建立在线SPE/HPLC分离Enterocin E9的方法。通过细菌培养,上清液收集、浓缩,获得细菌素粗提样品,采用Sepbox 2D-250全自动二维液相分离系统,确认流动相组成,流速和洗脱时间等因素。提取的单一成分其抑菌效果是浓缩样品的2.4倍。该方法省时、省力、精密度高,为细菌素结构与功能的研究提供一条有效途径和方法。

SPE-HPLC法检测畜禽养殖废水中四环素残留——基于植物净化系统多介质检测优化

通过对前处理条件进行优化,建立了一套固相萃取(SPE)-高效液相色谱(HPLC)检测多介质中四环素残留量的方法。底泥和植物组织经Na_(2)EDTA-Mcllvaine的甲醇溶液(1∶1,v∶v,pH=4)提取后,分别以HLB小柱(底泥)和SAX/PSA-HLB串联柱(植物组织)富集净化;水样经Na_(2)EDTA溶液(pH=3.4)提取后,以HLB小柱富集净化后再进行HPLC检测。四环素添加浓度为5 mg/L(低浓度)和50 mg/L(高浓度)时,水体、底泥以及植物根系等3种基质中的加标回收率分别达到106.5±1.0%、90.7±8.0%、92.8±1.0%(5 mg/L)和93.9±1.8%、78.5±0.4%、78.8±0.4%(50 mg/L),方法准确度和精密度均较高。四环素在水体、底泥以及植物根系中的检出限分别为3.83μg/L、0.15 mg/kg以及1.53 mg/kg,方法在0~50 mg/L范围内具有良好的定量线性关系。应用该方法检测人工模拟畜禽养殖废水系统各介质样品,检出四环素浓度为nd~655.94μg/L(水体)和0.59~78.45 mg/kg(底泥、植物组织),表明该方法有效可行。

SPE-HPLC测定复方羊角颗粒中苯甲酰新乌头原碱等3个单酯型生物碱的含量

目的:建立复方羊角颗粒中苯甲酰新乌头原碱等3个单酯型生物碱的含量测定方法。方法:采用强阳离子吸附树脂MCX固相萃取小柱对复方羊角颗粒进行净化,高效液相色谱法测定,色谱柱:SVEA^(TM)C_(18)Opal(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相A为乙腈-四氢呋喃(25∶12),流动相B为0.1 mol·L^(-1)醋酸铵溶液(含0.05%冰醋酸),梯度洗脱;检测波长:235 nm;柱温:25℃;流速:1.0mL·min^(-1);进样量:20μL。结果:苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱的线性范围分别为2.27~98.61(r=1.0000)、0.61~26.53(r=1.0000)、1.00~43.50μg·m L^(-1)(r=0.999 9);平均回收率及RSD分别为93.9%及2.4%、95.0%及2.6%、91.0%及3.0%。结论:本方法可为复方羊角颗粒的质量控制提供依据。

SPE-HPLC法测定行气坦尼卡尔胶囊中东莨菪碱与莨菪碱含量

目的:建立行气坦尼卡尔胶囊中东莨菪碱与莨菪碱的含量测定方法。方法:采用固相萃取-高效液相色谱(SPE-HPLC)法,色谱柱为Kromasil C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-0.1%乙酸钠(含0.3%四氢呋喃,冰醋酸调节pH为6.40)(20∶40∶460),检测波长210 nm,流速为1.0 mL/min,柱温为35℃。结果:氢溴酸东莨菪碱和硫酸阿托品的浓度分别在3.6256~45.3200μg/mL,9.9920~124.9000μg/mL范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为102.54%、95.20%。结论:该方法简便、快速、准确,可用于行气坦尼卡尔胶囊的质量控制。

加压液体提取-自动SPE-UPLC-MS/MS法检测农业土壤中6种吡啶类农药微量残留

以农业土壤为研究对象,建立采用加压液体提取法将样品中啶氧菌酯、氟啶草酮、吡虫啉、啶酰菌胺、氟啶酰菌胺、啶虫脒6种吡啶类农药提取出来,全自动固相萃取法富集、净化,超高效液相色谱-质谱联用仪定量检测的分析方法。取农业土壤样品,风干、粉碎后,过120目筛,准确称取过筛网后的样品10 g,置萃取池中,加硅藻土20 g,用甲醇:丙酮溶剂(V∶V=1∶1)提取,另取规格为500 mg/12 mL HLB固相萃取小柱,置全自动固相萃取仪中,活化完毕后,设定程序,将上述提取液以20 mL/min的流量,过固相萃取柱,最后用20 mL甲醇-乙腈(V∶V=1∶1)洗脱,收集洗脱液,洗脱液氮吹至近干,加甲醇定容至1 mL,涡旋混匀,上液相色谱-质谱仪定性、定量检测。啶氧菌酯、氟啶草酮、吡虫啉、啶酰菌胺、氟啶酰菌胺、啶虫脒6种吡啶类农药在0.001~5.0μg/mL范围内具有良好的线性,相关系数均大于0.995;检测限分别为0.012、0.009、0.024、0.007、0.013、0.005μg/L。三水平加标回收率均在84.4%~105.2%之间;重复性RSD(n=6)分别为2.0%、3.1%、2.3%、2.2%、1.9%和2.3%。实验结果表明,实验建立的方法具有准确、灵敏等优点,适用于农业土壤中微量吡啶类农药残留的检测。

SPE-HPLC同时测定水产品中己烯雌酚、甲基睾酮的研究

目的:固相萃取高效液相色谱法同时测定水产品中己烯雌酚(DES)、甲基睾酮(MET)的残留量。方法:固相萃取小柱为AlltechExtract cleancolumnsC18,2 0 0mg/ 4.0ml,洗脱液为甲醇;色谱柱为SUPELCODiscoveryC185 μm2 5 0×4.6mm ,流动相为:甲醇∶水=75∶2 5 (V/V) ,流速为1 0ml/min ,二极管阵列检测器,检测波长为2 4 5nm。结果:该方法的线性范围为:0.5～10.0 μg/ml;标准曲线线性良好,其回归方程及相关系数r分别为己烯雌酚:y =6 1 3 10 4 2x+ 2 3 86 15 ,r =0 99994 ;甲基睾酮:y =6 6.5 5 4 2 7x + 2.3 2 4 91 ,r =0.99994。最低检出限分别为:己烯雌酚9 5 μg/kg ;甲基睾酮5 4μg/kg ;回收率在95 %～10 2 %之间,相对标准偏差小于1.3 %。结论:该方法操作简便、快捷。

SPE-HPLC用于蔬菜中甲基对硫磷和对硫磷同时测定

采用乙腈提取，ENVI-18固相萃取，丙酮洗脱，C18高效液相色谱分离柱，甲醇-水（体积比85：15）流动相，紫外检测波长275nm，建立了同时测定蔬菜中甲基对硫磷和对硫磷残留量的固相萃取-高效液相色谱法。结果表明：测定甲基对硫磷和对硫磷农药残留量的线性范围为0．05～5．00mg／L，相关系数0.9998～0．9999，检出限0．025～0．031mg／L，加标回收率81．60-93．60％，相对标准偏差5．3％～2．9％。

SPE-HPLC-MS/MS法测定人参及土壤中氟硅唑的残留及风险评估

【目的】明确人参和土壤中氟硅唑的残留量，并对可能产生的膳食风险进行评估，以确保人参产品的质量安全．【方法】在集安市和抚松县进行2年试验，采用固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法测定了400 g· L-1氟硅唑乳油在人参根及土壤中的残留消解及最终残留量，并采用风险商值法对人参中氟硅唑可能产生的膳食风险进行了评估．【结果和结论】施药剂量为90 g· hm-2（以有效成分计）时，氟硅唑在人参根和土壤中的降解半衰期分别为7.85～9.94和5.59～7.13 d．施药剂量为60～90 g· hm-2时，施药后35 d氟硅唑在人参根和土壤中的残留量分别小于0.0433和0.0375 mg· kg-1．风险商值为4.59＆#215;10-5，风险较低，处于安全水平．建议我国在人参中氟硅唑的最大残留限量值可暂定为0.05 mg· kg-1，安全间隔期为35 d．

SPE-HPLC法测定水产品中4种雌激素残留量

目的:建立固相萃取-高效液相色谱法测定水产品中β-雌己醇、己烯雌酚、双烯雌酚、己雌酚4种雌激素残留量的方法。方法:用pH=9.5碱性缓冲液提取样品中4种雌激素,经C18小柱净化浓缩后,以二极管阵列高效液相色谱法测定其含量。结果:方法分离效果好,线性范围为0.50ng^100ng,相关系数r>0.999;最低检出浓度:β-雌己醇0.084mg/kg、己烯雌酚0.038mg/kg、双烯雌酚0.050mg/kg、己雌酚0.072mg/kg;回收率范围为82.6%~94.8%,相对标准偏差最大范围1.9%~5.0%。结论:方法灵敏、准确、干扰少。

SPE-HPLC法测定鸡蛋中灭蝇胺—环丙氨嗪

本试验研究建立了用NH2柱和97%乙腈水溶液做流动相洗脱测定鸡蛋中灭蝇胺-环丙氨嗪残留量的高效液相色谱法,鸡蛋均质后经20%氨水乙腈溶液重复提取2次、浓缩、过C18固相萃取小柱净化等处理后上机检测,环丙氨嗪在0.02～1.0 μg/ml浓度范围内呈线性相关,标准曲线的相关系数(r)为0.9998,在0.02,0.05,0.10 mg/kg添加浓度,回收率为84.5%～95.2%,变异系数为3.9%～6.8%.检测限为0.02 mg/kg,定量限低于0.05 mg/kg.

蛇胆川贝液和蛇胆汁中牛磺胆酸的SPE-HPLC法测定

目的 :建立蛇胆川贝液和蛇胆汁中牛磺胆酸含量的测定方法。方法 :含磷酸二氢钾的样品与甲醇的混合溶液流过Sep PakC18固相萃取微柱。固相萃取微柱吸附溶液中强保留物质以保护分析柱 ,牛磺胆酸被固相萃取微柱饱和吸附后的流出液作反相高效液相色谱法测定用的供试液。色谱条件 :SupelcosilLC 8色谱柱 (15 0mm× 4 .6nm ,5 μm)为分析柱 ,甲醇 0 .4 %磷酸二氢钾溶液 (5 6∶4 4 ,V/V)为流动相 ,检测波长 2 0 3nm ,进样体积为 5 0 μL。 结果 :在 0 .0 2 5 3～0 .2 5 3mg·mL-1浓度范围内 ,牛磺胆酸钠进样浓度与峰面积响应值呈良好的线性关系 ,r =0 .9999;平均回收率为10 1.3% ,RSD为 0 .4 0 % (n =6 )。结论 :本法简便实用 ,分析结果准确可靠 。

SPE-HPLC-MS/MS测定粮食中玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇

建立了以乙腈-水（84：16，v／v）为提取溶剂、正己烷萃取和HLB固相萃取（SPE）净化、水和乙腈C18反相色谱梯度洗脱、电喷雾负离子多反应监测模式（MRM）同时测定粮食中玉米赤霉烯酮（ZEN）和脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）2种物质含量的HPLC-MS／MS检测方法。结果表明，ZEN和DON检出限（以信噪比S／N：3计）依次为0．1μg/kg和2μg/kg，定量限（以信噪比S／N=10计）依次为0．3μg/kg和6μg／kg；两者线性范围分别为0．20～25μg／L（相关系数r=1．0000）和4．0～500μg／L（相关系数r=0．9999）；不同样品2种目标物3个水平的加标回收率在88．7％～102．3％之间，相对标准偏差（RSD）在2．4％～7．3％之间。应用该方法对所检小麦样品进行分析，结果均发现严重污染样品的2种目标毒素。

SPE-HPLC法同时测定汉麻提取物中3种大麻酚含量

建立了SPE-HPLC法同时测定3种大麻酚的方法。液相检测条件：Venusil XBP C18（L）：4.6×150 mm,5μm;流动相为V（甲醇）∶V（0.1%甲酸）=80∶20;柱温为40℃;检测波长为220 nm;流速为1 m L/min。3种大麻酚的线性回归方程R2均大于0.999,精密度实验、重复性实验RSD均在1.05%以内,回收率范围为99.6%-112.7%。此方法操作简便、准确度高,可作为3种大麻酚的质量控制标准。

SPE-HPLC测定断血流胶囊中醉鱼草皂苷Ⅳb的含量

目的:建立固相萃取-高效液相色谱法测定断血流胶囊中醉鱼草皂苷Ⅳb的含量。方法:色谱柱:Dikma Kromasil C_(18)柱(5 μm,250 mm×4.6 mm);流动相:甲醇-水(80:20);流速:0.8 mL·min^(-1);检测波长:250 nm;柱温:40℃。结果:醉鱼草皂苷Ⅳb在0.15～1.2μg范围内具有良好的线性关系(r=0.9999),总平均加样回收率为98.8%(n=9)。结论:该方法简便、快速、有效、灵敏、准确,具有良好的重复性和回收率,可作为该制剂的定量分析方法。

SPE-HPLC法测定菊延保康颗粒中蒙花苷的含量

目的:建立测定菊延保康颗粒中蒙花苷含量的方法。方法:选用Oasis HLB固相萃取小柱对样品进行纯化。采用C_(18)色谱柱(4.6mm×250 mm,5μm),以甲醇-0.8%磷酸(1:1)为流动相,流速为1 mL·min^(-1),检测波长为326 nm。结果:蒙花苷进样量在0.0432—2.16μg的范围内与峰面积呈良好的线性关系,r为0.9999,平均回收率为100.4%。结论:本方法操作简便快速,结果准确可靠。

SPE-HPLC法测定菊延保康颗粒中延胡索乙素的含量

目的 :测定菊延保康颗粒 (延胡索 ,附子 ,萝芙木等 )中延胡索乙素的含量。方法 :选用C18固相萃取小柱对样品进行纯化。色谱柱为DikmaDiamonsilC18柱 (2 5 0mm× 4 .6mm ,5 μm) ,流动相为 0 .0 5M磷酸二氢钾— 0 .0 0 5M庚烷磺酸钠—乙腈 (1.2∶1.2∶1) ,流速为 1.2mL·min-1,检测波长为 2 30nm。结果 :延胡索乙素进样量在 0 .0 6 7～ 0 .4 0 2 μg的范围内与峰面积呈良好的线性关系 ,相关系数为 0 .9997,平均回收率为 98.6 6 %。结论 :本方法简便快速 ,分离度好 ,结果准确可靠。

SPE-HPLC法测定土壤中咪唑乙烟酸的残留量

建立了SPE净化和HPLC法测定土壤中常用除草剂咪唑乙烟酸的残留。土壤样品用0．1mol／L的醋酸铵与氨水缓冲液（pH10）超声波提取，提取液经酸化后用200mg／3mL C18 SPE柱净化，浓缩，乙腈定容后，供反相高效液相色谱检测，外标法定量。添加回收率为77．2％～94．9％，咪唑乙烟酸的最小检出量为5．2×10^-5μg，经计算可知，咪唑乙烟酸在土壤中的最小检出质量分数为0．2μg／kg。该方法大大减少了有机溶剂的使用，方便快速，结果准确可靠，适合一般实验室操作。

SPE-HPLC法测定菊延保康颗粒剂中3种丹参酮的含量

目的:建立同时测定菊延保康颗粒剂中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA含量的方法。方法:选用酸性氧化铝固相萃取小柱对样品进行纯化。采用c18色谱柱(4.6 mm×250mm,5 μm),以甲醇-水(72:28)为流动相,流速为1.2 mL·min-1,检测波长为254 nm。结果:隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA进样量依次在0.011-2.70,0.011-2.75,0.015-3.80μg的范围内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数依次为0.9996,0.9999,0.9999;平均回收率分别为100.6%,98.4%,99.4%(n=6)。结论:本方法操作简便,结果准确可靠。

SPE-HPLC法检测早胜牛肉中土霉素、四环素和金霉素的残留

目的建立同时测定早胜牛肉中残留的土霉素、四环素和金霉素固相萃取-高效液相色谱方法。方法以Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液（p H4.0）为样品提取液,15%三氯乙酸为蛋白沉淀剂,固相萃取柱净化富集目标物,草酸0.01mol/L/乙腈/甲醇溶液为流动相,紫外检测器350 nm处检测,外标法进行定量。结果在优化前处理和分析条件下,3种抗生素在质量浓度范围内线性关系良好,相关系数r2〉0.998,土霉素、四环素、金霉素的检出限分别为18、15和30μg/kg,样品加标平均回收率为76.10%~95.22%,相对标准偏差〈10%。结论方法的灵敏度和精密度较高,且重复性好,适用于牛肉样品中土霉素、四环素和金霉素残留的检测。

SPE-HPLC法同时测定猪肉中常见抗生素和克伦特罗的研究

建立了同时测定猪肉中四环素族、氯霉素和克伦特罗的固相萃取-高效液相色谱（SPE-HPLC）测定方法，采用Oasis HLB固相萃取柱净化萃取，Diamonsil TM C18色谱柱分离，磷酸盐缓冲液（pH至2．5）-乙腈梯度洗脱，检测波长245nm。结果表明：该测定方法对土霉素、四环索、金霉素、氯霉素和克伦特罗测定的线性范围均为2～12μg／ml，基底加标回收率为93．6％～96．1％，检出限符合国标要求，分离度和重现性良好，可用于肉类食品安全与质量监控，方法简便、可靠、实用、覆盖面广。