鸡传染性法氏囊病超强毒感染后SPF鸡免疫器官病理学观察

IBDV超强毒株LX株接种 2周龄SPF雏鸡后 ,其致病性不同于经典强毒株CJ80 1株 ,它主要引起接种鸡全身性炎症反应 ,法氏囊、脾脏、盲肠扁桃体等免疫器官中大量异嗜性白细胞、巨噬细胞浸润 ,淋巴细胞严重坏死崩解 ,胸腺皮质严重萎缩、坏死 ,骨髓中造血细胞减少、巨噬细胞和脂肪细胞增生。在接种后 14d法氏囊淋巴滤泡严重萎缩、淋巴细胞排空形成囊腺样结构 ,未见恢复正常 ,其它免疫器官形态基本恢复正常。电镜观察 ,接种后 2和4d可见胸腺淋巴细胞胞浆浓集、染色质周边化形成新月形 ,表现细胞凋亡特征 ;在法氏囊坏死淋巴细胞胞浆中可见6 0nm大小呈晶格排列或散在的病毒粒子。研究初步探明了鸡传染性法氏囊病病毒超强毒的致病机理。

中药提取物对IBDV感染SPF鸡的防治效果

为了确定中药提取物对IBDV感染的防治效果,将150羽SPF雏鸡随机分为对照组、模型组和中药提取物高、中、低剂量组,中药提取物高、中、低剂量组分别在饮水中添加10.0、5.0、2.5 g/L的中药提取物,连续添加7 d,对照组和模型组不添加任何药物。给药后,除对照组外,其余组雏鸡分别通过滴鼻接种IBDV,攻毒后连续观察2周。统计雏鸡的成活率,荧光定量PCR检测IBDV在组织中的载量,分析病毒在脏器中的分布。结果显示:中药提取物能提高雏鸡成活率,高、中、低剂量组雏鸡成活率分别为86.67%、93.33%和70.00%,高剂量组雏鸡脾脏和法氏囊指数显著降低,中剂量组的胸腺和法氏囊指数显著降低。高、中剂量组脾脏、胸腺、法氏囊病毒载量极显著低于模型组,脾脏、胸腺病毒载量极显著低于低剂量组,法氏囊病毒载量显著低于低剂量组。表明中药提取物能提高雏鸡的成活率,促进IBDV核酸转阴,改善脾脏、胸腺、法氏囊等免疫器官状况,降低病毒在脾脏、法氏囊、胸腺的载量,且中剂量组效果优于其他剂量组。

中药复方提取物对IBDV感染SPF鸡抗氧化和抗炎能力的影响

将150羽SPF雏鸡随机分为5组,即对照组(CK)、病毒感染模型组(MC)、中药提取物高、中、低剂量组(T1、T2、T3),T1、T2、T3组试验鸡分别按照10.0、5.0、2.5g/L的剂量在饮水中添加中药提取物(由2∶2∶1∶1质量比的女贞子、黄芪、枸杞子、菟丝子组成),连续添加7d,CK和MC不添加任何药物,给药完成后,对照组滴鼻生理盐水,其他各组雏鸡分别通过滴鼻接种IBDV,攻毒后连续观察7 d,检测抗氧化指标(T-SOD、GSH-Px、T-AOC、MDA)和炎性因子(NO、TNF-ɑ、IL-1β、IL-6)的分泌量,检测脾淋巴细胞i NOS、NF-κB、MCP-1基因m RNA表达量。结果显示:T1和T2试验鸡抗氧化能力均提高,血清中GSH-Px活力和T-AOC极显著高于MC的(P<0.01),MDA含量显著低于MC的(P<0.05),T2试验鸡血清中T-SOD活力显著高于MC的(P<0.05);T1和T2试验鸡炎症反应明显减少,血清中NO、TNF-ɑ、IL-1β含量均极显著低于MC的(P<0.01),NO和TNF-ɑ含量显著低于T3的(P<0.05),IL-1β含量显著或极显著低于T3的,IL-6含量显著高于T3和MC的(P<0.05);T1和T2试验鸡脾淋巴细胞中i NOS m RNA表达量显著低于MC的(P<0.05),NF-κB和MCP-1 m RNA表达量极显著低于MC的(P<0.01)。表明中药提取物可能通过增强雏鸡的抗氧化能力,促进炎性相关因子的分泌和调节基因表达实现抗炎效果来抵抗IBDV。

鸡空肠弯曲菌对SPF雏鸡致病性研究

用鸡空肠弯曲菌（Ｃａｍｐｙｔｏｂａｃｅｃｒｉｅｊｕｎ：）对１日龄ＳＰＦ（Ｓｐｃｉｉｃ－ｐａｔｈｏｇｅｎｆｒｃｅ）雏鸡进行感染实验。随机将６０只１日龄ＳＰＦ雏鸡分为４组，那和对照组，每组１５只。分别用含菌７．５Ｘ１０８ＣＦＵ／ｍｌ、７．５ｘ１０４ＣＦＵ／ｍｌ，７．５×１０２ＣＦＵ／ｍｌ布氏肉汤菌液经口时ｔ、Ｊ、Ｉ组接种。接种后分别于２、４、６，８、１０日踏踏机取３只／组、经剖构观察病理变化；从心血、肝、胆汁、脾、肠内容物分离病原菌，测量肠道内物空肠弯曲菌菌数。得出以下结论；经口接种３．７５ｘ１０２ＣＦＵ空场弯曲菌即可造成１日龄ＳＰＦ雏鸡感染发病；感染鸡的主要病理变化为肝脏表面有点状，条索状或片状出血，同时伴有形状不规则大小不等的黄白色坏死灶，盲肠膨大充满气泡，十二指肠、空肠、直肠粘膜有散在的小出血点，首选检苗材料为胆汁、其次是脾、肝等器宫。

鸭源鸡杆菌对SPF雏鸡的感染特性研究

为研究鸭源鸡杆菌的流行病学特性,本研究采用从自然病例分离得到的鸭源鸡杆菌人工感染4日龄SPF雏鸡,通过形态学、PCR、荧光定量PCR和组织学等方法分别对感染后SPF雏鸡的组织脏器进行了细菌分离、检测和鉴定,用ELISA对其血清抗体水平进行检测。结果表明,人工感染鸡无临床症状,组织学检查感染鸡的肝脏、气管和肺脏组织均有损伤。人工感染后第3 d和同居感染第2 d鸡体内可分离出鸭源鸡杆菌,人工感染后第96 d仍能够分离到鸡杆菌。ELISA方法证实人工感染后47 d和同居后32 d出现抗体高峰,持续2～3周,人工感染组和同居组抗体水平均高于对照组(p<0.05);荧光定量PCR检测病料结果显示人工感染组和同居组的气管组织中细菌含量最高。本研究表明雏鸡在4日龄即可感染鸭源鸡杆菌,并能通过同居传播,长期带菌、排菌;感染后抗体产生缓慢、持续期短。本研究为鸭源鸡杆菌的流行病学、致病机理研究及防治措施的制定等提供了参考依据。

SPF雏鸡感染网状内皮组织增殖病病毒后白细胞介素2和干扰素诱生活性的变化

对 1日龄SPF雏鸡人工感染网状内皮组织增殖病病毒 (REV)后 ,胸腺T淋巴细胞白细胞介素 2 (IL 2 )诱生活性于 14 4 9d极显著低于对照组 (P <0 .0 1) ;脾T淋巴细胞IL 2诱生活性于 14d明显低于对照组 (P <0 .0 5 ) ,感染后 2 14 9d极显著降低 (P <0 .0 1) ;脾淋巴细胞干扰素 (IFN )的诱生活性于感染后 749d极显著降低 (P <0 .0 1)。提示SPF雏鸡受REV感染后机体免疫器官的分子免疫调节机能明显降低或发生障碍。

SPF鸡在禽病防控中的应用

SPF鸡即无特定病原鸡,其来源清晰并对其携带微生物进行严格控制。我国SPF鸡通过品种选育、净化设施饲养、微生物监测,经过近50年的发展,SPF鸡不仅在生命科学研究等众多领域,而且在禽类等动物疫病预防与控制中发挥了无可替代的作用,尤其是禽类疫病研究、疫苗生产和评价、疫病监测和诊断试剂制备,以及禽病治疗用制品的生产等方面。

SPF鸡新引种群的饲养与保种研究

随着中国养禽业的发展和疫苗生产的不断扩大，无特定病原（ＳＰＦ）鸡蛋的需求量也随着增加。为了提高生产力和市场竞争力，１９９５年初北京实验动物研究中心从美国引入了ＳＰＦ种蛋。其中母系１８００枚，父系２００枚。引入种蛋在一个完全独立的屏障系统中孵化和饲养，经两次微生物监测完全符合引种标准后解除隔离。新种群按照预先设计的保种方案，经几个世代的保种繁育，各项生产性能表现出高于或等于引入种群的生产性能。特别是产蛋率和受精率从引入种群的８３％和９３％提高到８５％和９８％。与中心原有种群（澳大利亚）相比，各项生产性能有了大幅度提高，经济效益明显提高。

禽网状内皮组织增生病病毒感染SPF雏鸡血液淋巴细胞增殖功能及其细胞周期相关因子变化

为探索禽网状内皮组织增生病病毒(REV)感染对SPF雏鸡外周血液的淋巴细胞增殖功能及其细胞周期素D1、p27表达的影响。将80只1日龄SPF雏鸡随机分为REV感染组和对照组,应用CCK-8、RT-qPCR、Western Blot等方法对雏鸡外周血液上述被检指标的动态变化进行检测。结果表明,REV感染SPF雏鸡后,其外周血液中T、B淋巴细胞增殖能力明显低于对照组雏鸡,且p27mRNA水平显著(P<0.05)高于对照组雏鸡;病毒感染后期Cyclin D1mRNA表达及其蛋白质含量均显著高于(P<0.05)对照组雏鸡,然而p27转录显著低于对照组雏鸡(P<0.05)。REV感染SPF雏鸡导致的血液T、B细胞增殖能力下降、Cyclin D1mRNA转录及其蛋白质含量的增加而p27mRNA转录下降与REV感染所致的雏鸡免疫机能下降密切相关。

传染性法氏囊病毒感染SPF雏鸡哈德尔腺和盲肠扁桃体TGF-β1 mRNA表达变化

为探索鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染对SPF雏鸡消化道和呼吸道局部黏膜免疫组织转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA表达的影响,以21日龄SPF雏鸡为研究对象,应用荧光定量PCR方法,对SPF雏鸡感染IBDV后,其哈德尔腺和盲肠扁桃体中TGF-β1 mRNA表达的动态变化进行检测。结果发现,21日龄SPF雏鸡感染IBDV强毒后1～28d,其上述局部黏膜免疫组织中TGF-β1mRNA表达均不同程度的高于对照雏鸡,其中哈德尔腺TGF-β1 mRNA表达于病毒感染后3～28d极显著高于对照雏鸡(P<0.01);而盲肠扁桃体的上述被检指标于病毒感染后3～14d极显著高于对照雏鸡(P<0.01)。表明IBDV感染所致的雏鸡免疫抑制与雏鸡消化道和呼吸道局部黏膜免疫组织TGF-β1 mRNA表达增加密切相关。本研究为进一步阐明IBDV的免疫致病机制提供了重要的参考依据。

不同品系SPF鸡胚细胞对S191株麻疹病毒的适应性和敏感性比较

目的 了解我国现有SPF鸡蛋对我国S191株麻疹病毒的可利用性。方法 比较S191株麻疹病毒 ,在我国 3个SPF种蛋供应厂商的 5个品系、6种SPF鸡蛋成纤维细胞上的细胞生长、病变特征和病毒效价方面的差异。结果 LOHMAN F、LOHMAN M、SPAFAS品系SPF鸡蛋的细胞生长发育形态和细胞病变较好 ,其中以SPAFAS为最佳 ;病毒效价 ,SPAFAS和LOHMAN M系在大于 5 .0 0LogCCID50 /ml的高滴度区间的样本数分别达 70 %和 71.96 % ,其中LOHMAN M系的样本都在 4.38LogCCID50 /ml以上的较高水平。结论 我国SPF鸡蛋的SPAFAS和LOHMAN

鹅源H5N1亚型禽流感病毒感染SPF雏鸡免疫球蛋白含量的变化研究

以7日龄SPF雏鸡为试验动物,采用常规间接酶联免疫吸附试验(IELISA)法,对鹅源H5N1亚型禽流感病毒(AIV)感染SPF雏鸡后,其泪液、气管液、肠液、胆汁的IgA、IgG、IgM含量的动态变化进行了检测。结果发现,鹅源H5N1亚型中强毒AIV感染SPF雏鸡后,其泪液、气管液、肠液、胆汁的免疫球蛋白IgA、IgM含量均在1～3d或1～4d显著低于相应对照雏鸡(P<0.05),而感染后第5天,上述被检指标开始升高,并于5～8d或5～14d,病毒感染雏鸡的IgA和IgM显著高于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01)。表明7日龄SPF雏鸡感染AIV后的早期,其消化道和呼吸道的体液免疫功能降低。

SPF雏鸡感染REV引起脾脏氧化-抗氧化的平衡紊乱

为探究氧化-抗氧化平衡紊乱在禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)致病机制中的作用,对感染REV后3、7、14、21、28和35 d的SPF雏鸡脾脏进行过氧化氢(H2O2)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、总抗氧化能力(total-antioxidante capacity,T-AOC)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力、过氧化氢酶(catalase,CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶1(glutathione peroxidase 1,GPx1)蛋白含量及mRNA表达、脾脏器官指数的检测。结果显示,SPF雏鸡感染REV后,脾脏H2O2、MDA含量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),T-AOC、抗氧化酶等抗氧化指标及器官指数分别于不同时间不同程度显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),表明SPF雏鸡感染REV后,脾脏发生氧化应激,抗氧化功能和免疫功能下降,氧化-抗氧化平衡紊乱可在REV致病机制中发挥作用。

肠炎沙门氏菌攻毒对SPF雏鸡粪便微生物区系的影响

试验旨在探究肠炎沙门氏菌攻毒对SPF雏鸡粪便微生物区系的影响。选择1日龄SPF雏鸡24只,随机分为2组,每组12只。在4日龄处理组口服107 CFU肠炎沙门氏菌(ATCC13076)攻毒,对照组口服等量PBS溶液。试验期22 d。结果显示:①处理组SPF鸡的存活率为75%,对照组全部存活,期间两组鸡的体重无显著性差异;②OTU水平上,相同日龄两组鸡粪便菌群的丰富度相近,中期处理组粪便菌群多样性更高(P<0.05),后期对照组菌群稳定性更高,而且攻毒对SPF鸡粪便菌群的影响随日龄增加而减弱;③在属水平上,与对照组相比,处理组Bacteroides(拟杆菌门)、Enterococcus(肠球菌属)和Aeriscardovia(卡多维亚氏菌属)的相对丰度明显升高(P<0.05);Lactobacillus(乳杆菌属)、Alistipes(另枝菌属)、Faecalibacterium(粪杆菌属)、Romboutsia(罗姆布茨菌属)和Ruminococcaceae_UCG_005(瘤胃球菌UCG_005)的相对丰度明显降低(P<0.05);④KEGG分析显示攻毒影响了菌群参与的多个代谢通路。综上,肠炎沙门氏菌感染影响了SPF雏鸡粪便菌群的结构组成、稳定性及菌群参与的代谢通路。Bacteroides(拟杆菌门)、Lactobacillus(乳杆菌属)等差异菌属可能对SPF雏鸡抵抗沙门氏菌入侵起到积极作用。

4株Ⅰ亚群禽腺病毒分离株对SPF雏鸡的致病性研究

【目的】探究Ⅰ亚群禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)分离株GDDL-4(FAdV-4)、GDB3-8a(FAdV-8a)、GDT08-8b(FAdV-8b)、GDWYT-11(FAdV-11)对SPF雏鸡的致病性,进而制定更加有效的防控措施。【方法】设立4个攻毒组(GDDL-4、GDB3-8a、GDT08-8b、GDWYT-11)及对照组,攻毒组选择腿部肌内注射接种0.2 mL 105 TCID50病毒液,对照组接种等体积PBS。接种后观察SPF雏鸡的临床症状、剖检病变及组织病理学变化,同时检测其排毒量和病毒载量。【结果】所有攻毒组鸡均表现为精神沉郁、消瘦、扎堆等,病理剖检以严重心包积液-包涵体肝炎综合征病变为主,其中GDDL-4组症状最为严重,死亡率最高达85%,总体死亡率在0~85%之间。排毒分析结果发现,GDDL-4和GDB3-8a组出现高滴度排毒(≥104拷贝/μL),GDT08-8b和GDWYT-11组仅能检测到低滴度(≤103拷贝/μL)排毒。器官指数表明,除GDT08-8b组与对照组无明显差异外,其余攻毒组均能造成器官不同程度的肿大或萎缩。病理组织学切片显示,肝脏、肾脏、法氏囊的正常结构被破坏,可见肝细胞有大量淋巴细胞浸润、肾间质充血出血、法氏囊淋巴细胞坏死等。病毒载量分析结果显示,GDDL-4与GDWYT-11组在肝脏组织中病毒滴度最高,而GDB3-8a与GDT08-8b组在十二指肠中病毒滴度最高。【结论】Ⅰ亚群FAdV的死亡率高,4株分离株均可导致雏鸡肝脏出现包涵体肝炎的病理变化,均可反复排毒,且分离株对不同的组织器官有不同的亲嗜性,在肝脏与十二指肠等组织中的病毒载量最高。

鸡白痢沙门氏菌感染对雏鸡脾脏miRNA表达谱的影响

【目的】鉴定感染鸡白痢沙门氏菌后雏鸡脾脏差异表达的miRNA,为阐明miRNA在鸡白痢沙门氏菌感染中的调控机制提供理论基础。【方法】采集感染和未感染鸡白痢沙门氏菌的SPF雏鸡脾脏,提取脾脏RNA,构建6个miRNA文库;利用Illumina Hiseq 2500测序技术和生物信息学分析筛选差异表达miRNA,通过TargetScan和miRanda算法预测差异表达miRNA的靶基因,并进行GO功能富集和KEGG通路富集分析,最后利用RT-qPCR方法验证测序结果。【结果】鉴定到29个差异表达miRNAs,其中15个显著上调、14个显著下调。GO分析表明:脂多糖介导的信号通路正调控以及NIK/NF-κB介导的信号通路负调控等免疫相关生物学过程显著富集;KEGG分析显示:差异表达的miRNA主要参与溶酶体和内吞作用等免疫相关通路。高通量测序结果与RT-qPCR结果一致。【结论】成功鉴定到鸡白痢沙门氏菌感染雏鸡脾脏miRNA表达谱,获得29个鸡白痢沙门氏菌感染潜在相关miRNAs。

2,4,6-三硝基苯磺酸诱导雏鸡溃疡性结肠炎模型的建立

为探索动物溃疡性肠炎的发生发展机制及其对机体的影响,以10日龄SPF雏鸡为研究对象,以2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)为诱导剂,分别根据体重应用50、100、150mg·kg-1的TNBS(50%乙醇稀释)通过灌肠途经建立TNBS诱导的雏鸡溃疡性结肠炎动物模型,进而分析TNBS对雏鸡溃疡性结肠炎发生的剂量效应。并对TNBS所致的溃疡性结肠炎雏鸡的临诊症状、眼观和病理组织以及体重等变化进行较全面系统的观察或检测,结果发现,100mg·kg-1 TNBS为制备雏鸡溃疡性结肠炎动物模型的理想给药剂量,其能够得到理想的实验动物临诊症状和病理变化,同时对雏鸡的损伤在可控范围内,不会造成模型动物的大批死亡。本研究成功建立雏鸡溃疡性结肠炎病理模型,为进一步研究溃疡性结肠炎的发生发展奠定了基础。

粪菌移植结合噬菌体抵抗雏鸡沙门氏菌感染的作用

本试验研究了粪菌移植(fecal microbiota transplantation)与噬菌体(phage)的结合疗法抵抗雏鸡肠炎沙门氏菌感染的作用。试验设置4个处理,分别为Ca组(口服PBS缓冲液且攻毒)、Cb组(口服PBS缓冲液且不攻毒)、FPa组(粪菌移植与噬菌体结合疗法且攻毒)和FPb组(粪菌移植与噬菌体结合疗法且不攻毒)。每组隔离饲养至40日龄,记录不同日龄每组鸡的死亡率和体重变化,病理切片法分析肠道绒毛长度、隐窝深度和肝脏病理变化,PCR方法检测肝脏中沙门氏菌的定殖情况,ELISA方法检测血清中细胞因子水平。结果表明:粪菌移植与噬菌体的结合疗法可以降低沙门氏菌感染导致的雏鸡死亡率,促进雏鸡的体重增长;在一定程度上提高了雏鸡的免疫水平,减少了攻毒雏鸡肝脏的炎性病变,清除了肠炎沙门氏菌在雏鸡肝脏中的定殖;增强了雏鸡的消化吸收能力。综上,粪菌移植与噬菌体的结合疗法能帮助雏鸡抵抗沙门氏菌的感染,并促进雏鸡的健康生长。

Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)在鸡胚中的增殖及感染力的测定

为确定所分离Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)毒力,为DHV单克隆抗体研究做好前期准备。将Ⅰ型鸭肝炎病毒接种于9日龄SPF鸡胚尿囊腔(0.2 mL/胚)进行增殖,制备鸡胚成纤维细胞(CEF),并分别运用鸡胚半数致死量(CELD50)法和组织培养半数感染量(TCID50)法测定DHV的感染力。结果显示,DHV-Ⅰ在SPF鸡胚内成功增殖,致死鸡胚具有典型临床症状和体表特征,所增殖病毒的CELD50和TCID50分别为10-5.6/0.2 mL和10-5.12/0.1 mL。结果表明,该分离毒株毒力较强,是进行DHV单克隆抗体研究的理想抗原。

传染性法氏囊病病毒对雏鸡机体氧化-抗氧化能力的影响

60只21日龄SPF混合雏鸡随机分为病毒感染组（I）和对照组（c）。I组雏鸡经眼、鼻途径感染传染性法氏囊病毒（IBDV），C组不做任何处理。两组雏鸡分别于病毒感染后的1、3、5、7、14、28d，每组随机抽取5只，心脏采血，分离血清，检测总超氧化物歧化酶（T—SOD）、谷胱甘肽过氧化酶（GSH—Px）、丙二醛（MDA）及一氧化氮（NO）含量。结果发现：21日龄sPF雏鸡感染IBDV后，其血清T—SOD和GSH—Px活性均于感染后5～7d显著或极显著低于对照雏鸡（P〈0．05或P〈0．01）；而MDA和NO含量分别于感染后5～7d和5d显著或极显著升高（P〈0．05或P〈0．01）。结果表明传染性法氏囊病病毒能够降低雏鸡血液抗氧化酶活性，促进自由基生成，从而影响雏鸡氧化一抗氧化能力。