猪链球菌2型四川株与江苏株对SPF猪的致病性

以SPF巴马小型猪为实验动物,分别用猪链球菌2型四川分离株以及江苏分离株进行攻击,通过临床症状观察、病理解剖检查、病原分离鉴定以及病原组织分布检测等,比较二者的致病性。结果表明:四川株攻击猪40 h后出现神经症状,关节肿大和全身出血等不很明显;病程为6￣7 d,而江苏株攻毒后18 h即出现神经症状,20 h即有死亡者,关节肿大和全身出血明显。死后病理解剖观察可见,四川株猪主要表现为肺淤血、肿大以及脑水肿,而未见败血症的变化,全身性出血不明显;而江苏株猪除了肺淤血、肿大以及脑水肿外,出现明显的败血症变化。均分离到与攻击相同的细菌,细菌溶血特性不明显,革兰氏阳性染色典型。细菌在组织中分布不同菌株也有一定的差异。

SPF猪的培育、质量控制及其应用

无特定病原体(specific pathogen-free pig,SPF)猪是专为预防特定猪病来计划性生产的猪,对生猪生产、生命科学研究和生物制品研发等意义重大。本文综述了SPF猪的质量控制及国内外病原控制现状、病原净化方法,并简要介绍了SPF猪的应用和发展趋势。

猪链球菌2型感染SPF小型猪模型的构建

构建了致病性猪链球菌2型(SS2)感染模型。通过典型临床症状观察、剖检病变和组织学观察及病原分离鉴定,证实该模型能成功模拟自然感染状态下SS2引起的典型临床症状和病理变化特点,稳定性好,可进一步用于致病性SS2在动物体内动态分布规律、致病机制和机体免疫应答以及疫苗的效果评价和相关药物筛选等方面的研究,对于猪链球菌2型感染的防控具有重要意义。

SPF小型猪主要脏器重量脏器系数的测定

目的 测定SPF小型猪主要脏器重量和系数。方法 实验选用 6 0dSPF小型猪雌、雄各 10头 ,分别测定体重和 9个主要脏器重量 ,计算脏器系数 ,并对雌、雄小型猪脏器重量、脏器系数进行比较。结果 雌雄小型猪脑、肺重量差异有显著性 (P <0 0 1) ,体重、心、肝重量差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,雄性均重于雌性 ,脾、肾上腺、肾、胃重量差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;雌雄小型猪脑、肺脏器系数差异有显著性 (P <0 0 1) ,雄性脏器系数明显高于雌性 ,其他脏器系数 ,雌雄小型猪差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论 本研究填补了国内有关SPF小型猪脏器重量、脏器系数测定的空白 。

SPF小型猪血液学、血液生化正常参考值、尿常规值测定

本实验选用 2 0头 6 0dSPF小型猪 ,雌雄各半 ,对其 2 6项血液常规、生化正常值和 18项尿常规值进行测定 ,并将雌雄SPF小型猪血液常规、生化常值、尿常规值进行比较。结果表明 :SPF小型猪血、尿值变动幅度更小 ,SPF小型猪血液成分变化趋势与文献报道SPF大、小鼠血液成分变化趋势一致 ,红细胞 (RBC)总数、血红蛋白 (Hgb)量较高 ,白细胞 (WBC)总数、中性粒细胞 (NEUTRO)较低。淋巴细胞 (LYM)、中性粒细胞分叶型 (NEUTROl)、血清球蛋白 (GLOb)、白球比 (ABG)相差非常显著 (P <0 0 1) ;淋巴细胞、白球比雌性高于雄性 ,中性粒细胞分叶型、血清球蛋白雄性高于雌性 ;血小板总数 (PLT)、酸性粒细胞 (EO)、血液pH值 (pH)、血清白蛋白 (ALB)、血清氯 (Cl)、血清钠(Na)、血清钙 (Ca)、血清磷 (P)相差显著 (p <0 0 5 ) ;血液pH值、血清白蛋白、血清钙、血清磷雌性高于雄性 ;血小板总数、酸性粒细胞、血清氯、血清钠雄性高于雌性 ;其他血液常规、生化常值及 18项尿常规值 ,雌雄SPF小型猪相差不显著 (p >0 0 5 )。

SPF级与普通级Hartley豚鼠主要脏器系数的比较

目的测定SPF级和普通级Hartley豚鼠的主要脏器质量,比较屏障环境和普通环境下豚鼠脏器系数的差异。方法取2月龄SPF级和普通级豚鼠雌雄各30只,剖检取心、肝、脾、肺、肾等13个脏器,称其质量并计算脏器系数。结果 SPF级和普通级Hartley豚鼠雌性之间比较,体质量、心、脾、肺、肾、肾上腺、子宫质量差异极显著(P<0.01);SPF级和普通级Hartley豚鼠雄性之间比较,心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、睾丸、附睾等其质量差异极显著(P<0.01)。SPF级和普通级Hartley豚鼠雌性之间比较,心、脾、肺、肾、肾上腺、子宫的脏器系数差异极显著(P<0.01)。SPF级和普通级Hartley豚鼠雄性之间比较,心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、睾丸、附睾的脏器系数差异极显著(P<0.01)。结论 SPF级和普通级Hartley豚鼠比,除脑以外的脏器系数均有显著差异,且普通级豚鼠的脏器系数普遍高于SPF级豚鼠。

畜禽疫病防控用SPF猪的开发

本文就SPF猪在畜禽疫病防控研究中的重要性和国内外研究现状进行了阐述,分析了目前存在的问题,介绍了培育标准化SPF猪种群常用的方法,并探讨了SPF猪的应用前景,旨在为畜禽疫病防控研究用实验动物的开发提供一定的理论指导。

SPF小型猪阶段生长指标的测定

目的 测定SPF小型猪阶段生长指标。方法 采用隔离器内人工饲养方法对中国Ⅰ号小型猪的剖腹产仔猪进行SPF化饲养 ,在仔猪初生、30d、6 0d分别测定其体重、体长、胸围及体高 ,并与自然环境下饲养的同龄仔猪进行比较。结果 自然环境下饲育的仔猪在各测试期的体重、体长、胸围和体高均明显高于SPF条件下饲育的小型猪 (P <0 .0 1;0 .0 1<P <0 .0 5 )。SPF小型猪初生体重与体长、胸围、体高的相关系数分别为 0 978,0 977,0 982 ;30d分别为 0 90 0 ,0 916 ,0 982 ;6 0d分别为 0 917,0 896 % ,0 913。结论 实验测定的SPF小型猪各日龄组相关系数与文献报道基本一致。

SPF级FMMU白化豚鼠基础生理指标的测定与比较

目的测定与比较SPF级FMMU白化豚鼠血液指标、心率、颈总动脉压及心室压、脏器参数。方法取30只雌雄各半、体质量250~300 g范围内SPF级FMMU白化豚鼠,心脏采血后分别检测血常规、血生化及血气指标;穿刺颈总动脉量取动脉压,辅助呼吸下开胸测定心室压;解剖后称量各脏器质量。结果雄性与雌性豚鼠比较：血液指标中,红细胞、血红蛋白、红细胞压积、谷草转氨酶、淀粉酶、胆固醇、二氧化碳总量、实际碳酸氢根、钠离子、总血红蛋白差异有显著性意义（P〈0.05或P〈0.01）;颈总动脉舒张压、颈总动脉平均压、左心室舒张压、右心室收缩压、右心室平均压差异有显著性意义（P〈0.05或P〈0.01）;体质量、脑质量差异以及脑垂体、肾上腺、左肾、右肾脏器系数差异有显著性意义（P〈0.05或P〈0.01）。结论不同性别的SPF级FMMU白化豚鼠血生理生化、血气、颈总动脉压、心室压指标及脏器参数存在差异。

应用胚胎移植及相关技术培育SPF香猪的研究进展

文章介绍了利用胚胎移植技术培育SPF香猪的原理、基本过程及应注意的事项,以期为进一步应用胚胎移植及相关技术培育SPF香猪的研究提供依据。

SPF大白猪和长白猪CIITA基因剪接突变体的鉴定分析及在不同组织中的表达模式

为了鉴定分析SPF大白猪和长白猪CIITA剪接突变体,研究其在猪不同组织中的表达模式。本研究以5周龄的8头SPF大白猪和7头SPF长白猪为研究对象,设计特异性引物对CIITA基因进行扩增、克隆和测序,对获得的序列分析其剪接突变体特征,利用在线软件对不同剪接突变体进行生物信息学分析,同时利用荧光定量PCR方法检测CIITA基因剪接突变体在2头SPF长白猪8种组织中的表达模式。结果显示,在SPF大白猪和长白猪CIITA基因CDS区存在3种不同的剪接突变体(CIITA-A、CIITA-B和CIITA-C),其CDS长分别为939、984和1698 bp。CIITA-A和CIITA-B突变体由于Exon 11部分核苷酸缺失(40和199 bp)使终止密码子提前,从而致使编码CIITA蛋白的结构域受到了剪接的影响,缺失了末端富含亮氨酸的4个重复结构域,蛋白结构发生了明显的改变。进化树结果表明,针对CIITA,猪与绵羊和牛具有较近的亲缘关系,在不同猪品种中具有较高的保守性。同时,CIITA不同剪接突变体在猪8种组织中均有表达,且表达量趋于一致,均在脾或肺中表达量较高,其次是肾、脊髓、甲状腺、肝、胸腺,在心脏中表达最低。本研究从SPF大白猪和长白猪上共获得了3个CIITA剪接突变体,其中两个蛋白结构缺失了4个富含亮氨酸的重复结构域,且不同剪接突变体在猪不同组织中均有表达,表达量稍有差异,为后续CIITA基因在机体内的免疫调控功能研究奠定了理论基础。

乙基纤维素包被VC对SPF级豚鼠繁殖影响的初步研究

为评价乙基纤维素包被VC对SPF级豚鼠繁殖性能的影响,选取SPF级繁育适龄雄性豚鼠24只,雌性豚鼠72只,按性别随机分成对照组、试验组Ⅰ、试验组Ⅱ、试验组Ⅲ,每组24只,其中雄性6只,雌性18只。试验组Ⅰ、试验组Ⅱ、试验组Ⅲ豚鼠饲料中分别添加500、1 000、1 500 mg/kg的乙基纤维素包被VC,对照组饲料中添加1 800 mg/kg的单体VC。使母鼠完成2胎的生产,期间观察母鼠妊娠期情况、有无脱毛、流产情况和生产仔鼠的健康状况,计算各组母鼠受孕率、产仔率、仔鼠出生重、离乳率。结果表明,当乙基纤维素包被VC添加量为500 mg/kg时,可获得与添加单体VC一致的饲养效果;当乙基纤维素包被VC添加量为1 000 mg/kg时,SPF级豚鼠繁育指标达到最优,可满足繁殖状态下SPF级豚鼠对VC的需求;当乙基纤维素包被VC添加量为1 500 mg/kg时,SPF级豚鼠繁育指标并无显著变化。综上提示,饲料中添加乙基纤维素包被VC代替单体VC进行SPF级豚鼠饲养切实可行,且乙基纤维素包被VC最优添加量为1 000 mg/kg。

Hartley豚鼠SPF级核心种群生长曲线与血液生理生化指标测定

目的测定SPF级Hartley豚鼠核心群的生长体质量,血液生理、生化指标,并与清洁级豚鼠各指标进行比较。方法选择种群中雌、雄个体各10只,通过称重,记录0~8周龄体质量;豚鼠采血,应用全自动血细胞计数仪与全自动血液生化分析仪检测各项生理、生化指标。结果在SPF级豚鼠血液生理指标中,白细胞计数(WBC)、中性粒细胞计数(NEUT)、嗜酸性粒细胞计数(EOS)3项指标,在雌性与雄性间有显著性差异(P<0.05);血小板压积(PCT)、血小板容积(MPV)、淋巴细胞计数(LYM)、淋巴细胞百分比(LYM%)、中性粒细胞百分比(NEUT%)、嗜酸性粒细胞百分比(EOS%)、嗜碱性粒细胞百分比(BAS%)在雌、雄性别间表现为差异极显著(P<0.01)。血液生化指标中,碱性磷酸酶(ALP)两性别间有显著性差异(P<0.05),尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)、胆固醇(CHO)3项指标,两性别间差异极显著(P<0.01)。与清洁级豚鼠比较结果显示,各项血液学指标中除白细胞计数(WBC)以及雌性豚鼠的红细胞体积(MCV)与血小板计数(PLT)无显著差异(P>0.05)外,其他指标均存在极显著差异(P<0.01)。结论绘制了SPF级豚鼠生长曲线。SPF级豚鼠血液学指标在性别间有差异,与清洁级豚鼠相比存在显著差异。

Hematologic and biochemical reference intervals for specific pathogen free 6-week-old Hampshire-Yorkshire crossbred pigs

Background： Hematologic and biochemical reference intervals depend on many factors, including age. A review of the literature highlights the lack of reference intervals for 6-wk-old specific pathogen free （SPF） Hampshire-Yorkshire crossbred pigs. For translational research, 6-wk-old pigs represent an important animal model for both human juvenile colitis and diabetes mellitus type 2 given the similarities between the porcine and human gastrointestinal maturation process. The aim of this study was to determine reference intervals for hematological and biochemical parameters in healthy 6-wk-old crossbred pigs. Blood samples were collected from 66 clinically healthy Hampshire-Yorkshire pigs. The pigs were 6 wks old, represented both sexes, and were housed in a SPF facility. Automated hematological and biochemical analysis were performed using an ADVIA 120 Hematology System and a Cobas 6000 C501 Clinical Chemistry Analyzer. Results： Reference intervals were calculated using both parametric and nonparametric methods. The mean, median, minimum, and maximum values were calculated. Conclusion： As pigs are used more frequently as medical models of human disease, having reference intervals for commonly measured hematological and biochemical parameters in 6-wk-old pigs will be useful. The reference intervals calculated in this study will aid in the diagnosis and monitoring of both naturally occurring and experimentally induced disease. In comparison to published reference intervals for older non SPF pigs, notable differences in leukocyte populations, and in levels of sodium, potassium, glucose, protein, and alkaline phosphatase were observed.

不同级别实验动物用于过敏反应检查的对比研究

目的:评价不同级别实验动物用于过敏反应和类过敏反应检查的适用性和灵敏性。方法:按2010年版《中国药典》过敏反应检查法相关规定进行试验。结果:对硫酸鱼精蛋白、骨瓜提取物和卵清蛋白进行过敏反应检查,普通级豚鼠对卵清蛋白过敏反应阳性,对硫酸鱼精蛋白和骨瓜提取物过敏反应阴性,无类过敏反应;SPF级豚鼠对卵清蛋白过敏反应阳性,对硫酸鱼精蛋白有类过敏反应,对骨瓜提取物过敏反应阴性,无类过敏反应。结论:普通级和SPF级豚鼠都适用于过敏反应检查,SPF级豚鼠对类过敏反应敏感。

环境空气暴露对猪粪悬液中菌群及代谢物的影响

目的研究环境空气暴露对制备的粪悬液中微生物及代谢物的影响。方法收集无特定病原体级巴马小型猪粪便:(1)未处理组(C组);(2)有氧暴露处理组(T1组);(3)厌氧暴露处理组(T2组)。利用扩增子测序技术和非靶向代谢组比较各组粪样的微生物群落组成及代谢产物。结果(1)T1和T2组粪悬液制备操作均保存了新鲜粪便中(C组)的全部细菌门,仍以厚壁菌门和拟杆菌门细菌为主,但显著降低了密螺旋体属细菌的丰度;(2)猪粪便中以子囊菌门、担子菌门真菌为主,粪悬液制备显著提高了猪粪便中子囊菌门真菌的丰度;有氧暴露处理去除了猪粪便中节单菌属真菌。(3)LC-MS结果显示:正负离子模式下各识别出402、195种代谢物,其中T1∶C代谢集、T2:C代谢集的差异代谢物分别为155和201个。结论猪粪悬液制备时间虽然不长,但有氧暴露对样本中真菌群落丰度的影响高于厌氧暴露,都显著地降低Treponema和Spirochaetes等有害菌群和相关代谢产物的丰度,提高了FMT的安全性。

猪鼻支原体的分离鉴定及其对巴马猪的致病性试验

为了探索猪鼻支原体（Mhr）对仔猪的致病性，从临床呼吸道疾病的患猪肺分离到1株猪鼻支原体流行菌株（Mhr—DL株）。对该菌株16SrRNA序列进行的分析证实，它与GenBank中的猪鼻支原体（AB680688）、猪肺炎支原体（NR-074745）和猪滑液支原体（KC512403）的同源性分别为99．3％、92．8％和74．0％。电镜下该菌为多形性，大小为500～600nm。取Mhr-DL菌株培养物（1．8×10^9 CCU／mL）经腹腔和气管途径接种SPF小型巴马猪，被感染猪临床上表现为精神沉郁、粪便干燥、食欲不振、结膜炎、体温高达41．6℃；剖检时病理表现为肺、肝、脾等器官纤维渗出，淋巴结充血肿胀、胸膜炎、腹膜炎、肺呈虾肉样病变。茵株核酸检测发现，肺和扁桃体检出率最高；组织病理表现为间质性肺炎，淋巴细胞增生、坏死、崩解，肾毛细血管淤血，小肠固有层大量嗜酸性粒细胞浸润、肠绒毛结构不完整，心脏小血管淤血，脾白髓内淋巴细胞增生。本研究获得的Mhr-DL菌株对巴马猪具有显著的致病性，为今后深入开展猪鼻支原体致病机理和防控技术的研究奠定了基础。