雷山小香羊促黄体素β亚基基因SphⅠ酶切多态性分析

为了给雷山小香羊品种遗传资源的合理利用及进一步选育提供科学依据,同时为更全面地了解其种质特性提供基础性资料,利用PCR-RFLP技术对67只雷山小香羊促黄体素β亚基基因进行了SphⅠ内切酶酶切位点多态性分析。结果表明,所扩增的促黄体素β亚基基因序列中仅有1个SphI酶切位点,且不具有多态性。

南江黄羊LHβ基因序列多态性与产羔数的相关分析

根据GenBank中公布的牛、绵羊、猪等动物LHβ基因序列设计引物，采用PCR扩增并以SphⅠ酶切分析了南江黄羊（246只）LHβ基因部分序列，比较了不同基因型的繁殖性能。检测到2个等位基因A和B构成3种基因型：AA（4．065％），AB（44．309％），BB（51．626％），不同基因型由第401位三碱基突变（G→A或C）引起。在各基因型间，南江黄羊1～5胎的初生窝重和产羔数差异不显著（P〉0．05），但从第2胎开始从型母羊的产羔数和窝重有增加的趋势。

南江黄羊LHβ基因多态性与繁殖性能的相关性分析

以南江黄羊246个个体作为研究材料,利用GenBank中公布的牛、绵羊、猪等动物LHβ亚基基因序列设计引物,扩增并采用Sph I酶切分析山羊LHβ基因,比较不同基因型的繁殖性能。结果:检测到2个等位基因A和B构成3种基因型:AA型(4.065%),AB型(44.309%),BB型(51.626%)。序列分析显示不同基因型由第401位三碱基突变(G→A或C)引起。在各基因型间,山羊15胎的初生窝重和产羔数差异不显著(P>0.05),但从第2胎开始AA型母羊的产羔数和窝重相对较大(P>0.05)。上述结果为首次测定并分析山羊的LHβ基因序列的多态性。

裂果薯皂苷对人肝癌BEL-7402细胞自噬的影响

目的:探讨裂果薯皂苷中化合物Ⅰ(SPHSⅠ)和化合物Ⅱ(SPHSⅡ)对人肝癌BEL-7402细胞自噬的影响,并对其分子机制进行初步探究。方法:采用MTT、Western blotting、Lyso-Tracker Red染色、Magic Red Cathepsin B染色、流式细胞仪分析分别检测SPHSⅠ和SPHSⅡ对人肝癌BEL-7402细胞增殖、自噬和凋亡的影响。结果:SPHSⅠ和SPHSⅡ可抑制BEL-7402细胞增殖并诱导细胞凋亡,同时可抑制细胞自噬,引起自噬标志性蛋白LC3-Ⅰ转变为LC3-Ⅱ,p62蛋白表达无明显变化;加入溶酶体抑制剂氯喹后,SPHSⅠ和SPHSⅡ未能进一步提高用氯喹处理的细胞中的LC3-Ⅱ水平。Lyso-Tracker Red染色、Magic Red Cathepsin B染色及Western blotting检测结果表明,SPHSⅠ和SPHSⅡ可阻断自噬体-溶酶体融合,并通过改变溶酶体酸化和下调溶酶体组织蛋白酶的表达来抑制溶酶体蛋白水解活性。利用Earle′s平衡盐溶液(EBSS)饥饿处理细胞后,SPHSⅠ和SPHSⅡ诱导的细胞凋亡进一步增加。结论:SPHSⅠ和SPHSⅡ可抑制自噬并诱导细胞凋亡,饥饿显著增加人肝癌BEL-7402细胞对SPHSⅠ和SPHSⅡ诱导的细胞凋亡的敏感性。

裂果薯皂苷的特征图谱及总皂苷中有效组分的抗肿瘤活性研究

采用高效液相色谱紫外及蒸发光散射检测器建立裂果薯总皂苷(SFSP60%)的特征图谱,乙腈-水为流动相梯度洗脱,检测波长203 nm,柱温30℃,流速1 m L/min,进样量10μL。以ELSD色谱图中SFSP60%色谱峰为参照,采用面积归一法计算出裂果薯皂苷Ⅰ(SPHSⅠ)相对百分比为84.28%,裂果薯皂苷Ⅱ(SPHSⅡ)为3.02%,化合物1为2.21%,化合物2为6.31%,化合物3为2.73%,化合物1~3可能是母核类似的皂苷类化合物。取对数生长期的人肝癌SMMC-7721细胞,给药组分别加入0、0.25、0.5、2、4μg/m L的SFSP60%、SPHSⅠ、SPHSⅡ和SPHSⅠ+Ⅱ(SPHSⅠ和SPHSⅡ各占比96.54%、3.46%)培养24 h、48 h、72 h,采用MTT法观察并计算细胞增殖抑制率和IC50。结果显示给药组对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用呈现时间与剂量依赖性(P均<0.05),且活性大小:SFSP60%<SPHSⅠ、SPHSⅡ<SPHSⅠ+Ⅱ。证明在总皂苷中是SPHSⅠ和SPHSⅡ发挥主要抗肿瘤作用,且抗肿瘤作用是各组分共同作用的结果。为裂果薯中有效组分的抗肿瘤活性研究提供了参考以及有效组分的合理配比提供了新思路。

锦鲤疱疹病毒双重PCR检测方法的研究

为了快速确诊锦鲤疱疹病毒(koi herpesvirus,KHV),本试验建立了KHV双重PCR检测方法。根据锦鲤疱疹病毒的SphⅠ-5基因和胸腺嘧啶脱氧核苷激酶(thymidine kinase,TK)基因设计特异性引物,优化反应条件,建立了KHV双重PCR检测方法。结果表明,建立的方法简单、灵敏、准确,一个反应体系可同时扩增292bp和410bp两个基因片段,可有效用于KHV的检测。