抗病毒固有免疫分子TRIM22 C端SPRY结构域对其转录、翻译及亚细胞定位的影响

本文旨在探讨TRIM22 C端SRPY结构域对其转录、翻译及亚细胞定位的影响。以野生型TRIM22真核表达质粒为模板,扩增出C端SPRY结构域缺失的TRIM22基因片段,并将其克隆入真核表达质粒pcDNA3.1。将野生型和突变型TRIM22真核表达载体分别转染高分化人肝癌细胞株HepG2。通过反转录-聚合酶链反应检测其mRNA表达水平,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测其蛋白表达水平,并通过间接免疫荧光法检测其亚细胞内定位。结果成功构建了C端SPRY结构域缺失的TRIM22真核表达质粒。转染HepG2细胞后,TRIM22 SPRY结构域缺失突变体在转录和翻译水平上均与野生型TRIM22无明显差异,但TRIM22 SPRY结构域缺失突变体完全丧失了核定位能力,这为进一步研究SPRY结构域在TRIM22抗病毒过程中所发挥的作用及机制提供了有益的启示。

FSD1蛋白对胶质瘤干细胞侵袭的影响

目的研究具有SPRY结构域的纤连蛋白Ⅲ型(FSD1)在胶质瘤干细胞侵袭中发挥的作用,探索新的胶质瘤肿瘤标志物或治疗靶点。方法利用TCGA数据库数据,分析比较在多形性成胶质细胞瘤(GBM)组织、正常脑组织及不同分型级别胶质瘤组织中的FSD1的mRNA表达水平,并分析FSD1 mRNA表达水平与胶质瘤患者预后的相关性。利用慢病毒感染体系,在胶质瘤干细胞(GSC)T4121和D456中稳定过表达FSD1蛋白,通过Transwell侵袭实验检测过表达FSD1蛋白对T4121和D456两种GSC侵袭能力的影响。结果 FSD1基因在GBM组织中mRNA表达水平显著低于正常脑组织(P<0.01);FSD1的mRNA表达水平随胶质瘤分型级别提高而降低(Ⅱ级与Ⅲ级比较,P<0.05,Ⅲ级与Ⅳ级比较,P<0.01);FSD1 mRNA低表达的胶质瘤患者的生存期显著低于高表达患者(P<0.01)。在T4121和D456两种GSC细胞系中,过表达FSD1蛋白的GSC侵袭细胞数显著低于空白对照组(2株细胞系中均为P<0.01)。结论 FSD1表达水平是胶质瘤恶性程度的一个临床相关因素,低水平FSD1有利于维持GSC的侵袭能力。