LncRNA SPRY4-IT1调节血管平滑肌细胞在子宫螺旋动脉重铸中的作用

目的探讨LncRNA快速发育生长因子同源蛋白4内含子转录本1(SPRY4-IT1)在人早孕绒毛组织中的表达,以及SPRY4-IT1调节血管平滑肌细胞生物学行为在子宫螺旋动脉重铸中的作用。方法收集因孕早期胚胎停育行人工流产患者的绒毛组织及非计划妊娠行人工流产患者的绒毛组织,采用qRT-PCR检测两组胎盘组织中SPRY4-IT1的表达;利用原位杂交定位SPRY4-IT1在子宫螺旋动脉肌层的表达。结果与正常绒毛组织相比,SPRY4-IT1在胚胎停育绒毛组织中呈现高表达,差异有统计学意义(P<0.05);原位杂交结果显示SPRY4-IT1广泛表达于早孕蜕膜组织的螺旋动脉肌层。结论胚胎停育绒毛组织中SPRY4-IT1表达升高,其可能通过调节血管平滑肌细胞功能影响子宫螺旋动脉重铸过程。

长链非编码RNA SPRY4-IT1对髓母细胞瘤增殖及侵袭转移的影响

目的:探讨长链非编码RNA SPRY4-IT1(Lnc RNA)对髓母细胞瘤增殖及侵袭转移的影响。方法:髓母细胞瘤Daoy细胞分为对照组和si-SPRY4-IT1组,分别利用脂质体Lipofectamine 2000将阴性对照荧光序列和SPRY4-IT1-si RNA转入细胞中,采用Real-time PCR检测转染后各组细胞中SPRY4-IT1的表达情况,CCK-8实验及平板克隆形成实验检测细胞增殖能力的变化,以细胞体外侵袭、迁移实验分别检测细胞侵袭、迁移能力的变化,Western blot检测SPRY4-IT1对基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白的影响。结果:si-SPRY4-IT1组SPRY4-IT1 m RNA表达水平、细胞体外增殖能力、细胞侵袭、迁移能力、细胞MMP-2蛋白表达均较对照组明显降低(P<0.05),而MMP-9蛋白表达未见明显变化。结论:干扰长链非编码RNA SPRY4-IT1在髓母细胞瘤Daoy细胞中的表达能显著抑制细胞的增殖、侵袭和迁移能力。

长链非编码RNA SPRY4-IT1在食管鳞癌中的表达及对细胞生长的影响

目的:探讨长链非编码RNA SPRY4-IT1与食管鳞状细胞癌(ESCC)的临床病理及预后的相关性,以及对细胞生长的影响。方法:收集2008年1月至2009年12月南京医科大学附属南京医院肿瘤外科50例ESCC手术切除标本(包括癌组织和癌旁组织),荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测50例ESCC中SPRY4-IT1的表达情况,分析其与临床病理及预后的关系,用小干扰RNA(siRNA)干扰SPRY4-IT1后MTT法检测其对细胞生长的影响,流式细胞检测对细胞凋亡和周期的影响。结果:45例(90%)标本中SPRY4-IT1呈阳性表达,SPRY4-IT1在癌组织中的表达量显著高于癌旁组织(t=5.377,P<0.01)。SPRY4-IT1的相对表达水平与肿瘤大小、临床分期相关(P均<0.05)。SPRY4-IT1在ESCC细胞株中表达量高于正常食管上皮细胞。KYSE30细胞中干扰SPRY4-IT1的表达后可明显减慢细胞生长,阻滞细胞周期并促进细胞凋亡(P<0.01)。结论:SPRY4-IT1在ESCC组织中显著高表达,并且能促进细胞生长,可能成为诊断和判断预后的重要分子标记物。

长链非编码RNA SPRY4-IT1对结直肠癌细胞HT-29增殖凋亡的影响及机制

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)SPRY4-IT1对结直肠癌细胞HT-29增殖、凋亡的影响及机制。方法采用qRT-PCR方法检测LncRNA SPRY4-IT1在结直肠癌细胞株(HT-29、HCT-116、SW-480、SW-620、Caco-2)和正常肠上皮细胞(FHC)的表达。选择其相对表达最高的HT-29细胞,以慢病毒载体介导构建SPRY4-IT1过表达(上调组)和干扰的(下调组)稳转细胞株,并设立无义转染组和空白对照组;qRT-PCR检测各组HT-29细胞中SPRY4-IT1 mRNA的表达量;CCK-8法检测细胞增殖活力;克隆试验检测细胞的克隆形成率;流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期。Western blotting法检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表达量。结果 LncRNA SPRY4-IT1在结直肠细胞株(HT-29、HCT-116、SW-480、SW-620、Caco-2)相对FHC的表达增高,以HT-29细胞株中的表达最高(P均<0.05)。相对于空白对照组、无义转染组,上调组SPRY4-IT1 mRNA表达量升高,HT-29细胞增殖活力增强,克隆形成率升高,凋亡率降低(P<0.05或<0.01);而下调组SPRY4-IT1 mRNA表达量下降,细胞增殖活力减弱,克隆形成率降低,凋亡率升高(P<0.05或<0.01);在各组细胞间,细胞周期分布比较,P均>0.05。相对于空白对照组、无义转染组,上调组细胞Bcl-2蛋白表达量增多,Bax蛋白表达量减少(P<0.05或<0.01);下调组Bcl-2蛋白表达量减少,Bax蛋白表达量增多(P均<0.01)。结论 LncRNA SPRY4-IT1可能通过促进Bcl-2表达,抑制Bax表达而促进结直肠癌细胞增殖、抑制其凋亡。

长链非编码RNASPRY4-IT1对膀胱癌生长的影响

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)SPRY4内含子转录本1(SPRY4-IT1)对膀胱癌生长的影响。方法使用qRT-PCR法检测SPRY4-IT1标本和细胞表达水平并分析其临床病理特征之间的关联;使用特异性小干扰RNA(siSPRY4-IT1)转染两种膀胱癌细胞,使用qRT-PCR法检测siSPRY4-IT1效果,再分别以CCK-8实验、MTT实验、划痕实验、ELISA实验和流式细胞术检测SPRY4-IT1对膀胱癌细胞在增殖、迁移和凋亡等方面的影响。结果 SPRY4-IT1在膀胱癌组织中高表达(68.33%,P=0.026 3)。SPRY4-IT1表达水平与病理分级(P<0.05)和TMN分期(P<0.001)有关。SPRY4-IT1在5637(P=0.002 29)和T24(P=0.000 12)细胞中明显高表达。si-SPRY4-IT1可显著降低SPRY4-IT1表达(P<0.001);si-SPRY4-IT1可显著抑制两种细胞的增殖、迁移和增加凋亡(P<0.01)。结论 SPRY4-IT1在膀胱癌标本组织和细胞水平中高表达,有促进膀胱癌细胞生长的作用,在膀胱癌中起着癌基因的作用。

长链非编码RNA SPRY4-IT1在恶性肿瘤中的研究进展

SPRY4-IT1是转录自SPRY4基因的长度为708个核苷酸的转录产物,许多恶性肿瘤的发生、发展与其密切相关,如黑色素瘤。在这些肿瘤中,SPRY4-IT1表达量大致增高,主要通过染色体甲基化、细胞周期蛋白调控以及脂质蛋白表达途径对于肿瘤细胞增殖、转移、凋亡等过程进行调节,在转移过程中主要通过上皮细胞-间质化途径引导。同时,随着临床研究的进展,其未来有望成为潜在的肿瘤标志物。

长链非编码RNA SPRY4-IT1对非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭的影响及机制

目的:探讨长链非编码RNA SPRY4-IT1在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织和细胞系中的表达水平,以及SPRY4-IT1对NSCLC细胞增殖和侵袭功能的影响及分子机制。方法:用实时定量PCR技术检测SPRY4-IT1在NSCLC组织及细胞系中的表达水平。将p CDNA-SPRY4-IT1转染SPC-A1和A549细胞,过表达SPRY4-IT1,用MTT法和克隆形成实验检测SPRY4-IT1对SPC-A1和A549细胞增殖和克隆形成能力的影响。Transwell实验评价SPRY4-IT1对细胞迁移、侵袭能力的影响。q PCR和Western blot检测过表达SPRY4-IT1对上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志物上皮性钙粘蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达水平的影响。结果:SPRY4-IT1的表达在NSCLC组织和细胞系中出现显著下调(P<0.01)。过表达SPRY4-IT1能降低SPC-A1细胞和A549细胞的增殖和侵袭能力。过表达SPRY4-IT1显著上调E-cadherin的水平、抑制Vimentin的表达,从而影响肿瘤细胞EMT过程。结论:长链非编码RNA SPRY4-IT1表达下调可能通过调控EMT机制促进NSCLC细胞的增殖和侵袭。

基因干扰lncRNA SPRY4-IT1对GBC-SD细胞干样性及线粒体膜电位的影响

目的通过基因干扰长链非编码RNA(lncRNAs)SPRY4-IT1,探究其对胆囊癌(GBC)细胞GBC-SD肿瘤干细胞样特性及线粒体膜电位变化的影响。方法设计合成SPRY4-IT1 shRNA,将shRNA-SPRY4-IT1转染GBC-SD细胞,RT-PCR检测SPRY4-IT1的表达水平;BrdU染色检测细胞增殖;流式检测细胞凋亡;肿瘤细胞成球实验检测肿瘤干细胞样特性;流式检测线粒体膜电位的变化;Western blot检测肿瘤干样特性标志物以及线粒体损伤标志物的蛋白表达。结果将shRNA-SPRY4-IT1转染GBC-SD细胞,SPRY4-IT1的表达水平降低。干扰SPRY4-IT1表达抑制GBC-SD细胞增殖;提高线粒体膜电位,促进GBC-SD细胞凋亡;降低GBC干细胞样特性;抑制SOX2,OCT4,CD44,c-Myc和Bcl-2的表达以及促进cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9和Bax的表达。结论基因干扰lncRNAs SPRY4-IT1能降低GBC细胞GBC-SD肿瘤干细胞特性,提高线粒体膜电位,促进GBC细胞GBC-SD的凋亡。

乳腺癌组织SPRY4-IT1表达水平及其对患者远期生存的预测价值

目的探讨乳腺癌组织SPRY4内含转录因子1(SPRY4-IT1)表达水平及其对远期生存的预测价值。方法采用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测99例乳腺癌组织及配对癌旁组织SPRY4-IT1的表达。利用受试者工作特征曲线(ROC)确定SPRY4-IT1最佳临界值及对乳腺癌的诊断效能;Kaplan-Meier法绘制不同SPRY4-IT1表达乳腺癌患者总体生存和无瘤生存曲线,Cox多因素回归模型分析乳腺癌预后的独立危险因素。结果乳腺癌组织SPRY4-IT1表达水平明显高于癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。SPRY4-IT1最佳临界值为1.57,诊断乳腺癌的AUC为0.876,敏感度为78.6%,特异度为94.2%。SPRY4-IT1高表达与TNM分期、淋巴结转移、分子分型和增殖标志物Ki-67有关(均P<0.05),与年龄、肿瘤大小无关(均P>0.05)。乳腺癌患者中,SPRY4-IT1低表达组总生存率和无病生存率明显高于SPRY4-IT1高表达组,差异具有统计学意义(均P<0.05)。Luminal型乳腺癌中,SPRY4-IT1低表达组总生存率和无病生存率明显高于SPRY4-IT1高表达组(均P<0.05);三阴型乳腺癌中,SPRY4-IT1低表达组和高表达组总生存率、无病生存率比较差异无统计学意义(均P>0.05)。淋巴结转移、Ki-67阳性、SPRY4-IT1高表达是影响乳腺癌总体生存和无病生存的独立危险因素(均P<0.05)。结论 SPRY4-IT1在乳腺癌组织中表达升高,高表达SPRY4-IT1可以作为乳腺癌不良预后的预测因子。

长链非编码RNASPRY4-IT1对宫颈癌细胞的生物学行为影响

目的探讨长链非编码RNA(lnc RNA)SPRY4-IT1对宫颈癌细胞增殖侵袭及迁移的影响。方法宫颈癌细胞株He La中设计并合成SPRY4-IT1 RNA片段及其转染形成的si RNA片段(si-SPRY4-IT1 RNA),q RT-PCR技术检测其沉默效率,MTT检测SPRY4-IT1 RNA片段对He La细胞的增殖影响,Transwell实验检测He La细胞的侵袭、迁移能力,研究si-SPRY4-IT1 RNA对宫颈癌细胞He La侵袭凋亡能力的影响。结果长链非编码RNA SPRY4-IT1在人宫颈癌细胞He La中的表达明显增高,si-SPRY4-IT1RNA可下调He La细胞中SPRY4-IT1的表达,并抑制宫颈癌细胞He La的增殖和侵袭迁移能力。结论 SPRY4-IT1是宫颈肿瘤的一个致癌基因,可作为新的靶向治疗目标。

血清lncRNA EWSAT1和SPRY4-IT1水平检测对卵巢癌的诊断及预后预测价值分析

目的探讨血清lncRNA EWSAT1和SPRY4-IT1水平检测对卵巢癌的诊断及预后预测。方法选择卵巢癌患者138例为病例组,健康体检者107例为对照组。获取2组患者血清组织,实时荧光逆转录法测定血清lncRNA EWSAT1和SPRY4-IT1表达水平,采用χ2检验分析lncRNA EWSAT1和SPRY4-IT1的表达情况与卵巢癌患者临床病理特征的关系,采用Log-rank检验分析不同lncRNA EWSAT1和SPRY4-IT1水平卵巢癌预后生存率。结果病例组血清lncRNA EWSAT1、SPRY4-IT1 mRNA水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);lncRNA EWSAT1、SPRY4-IT1 mRNA阳性率与肿瘤大小、病理学分级、临床分期、有无淋巴结转移、是否复发相关性明显,且肿瘤越大、病理学分级越高、临床分期越高、有淋巴结转移、复发,lncRNA EWSAT1、SPRY4-IT1 mRNA阳性率越高,差异有统计学意义(P<0.05);lncRNA EWSAT1+SPRY4-IT1联合筛查方法灵敏度、特异度、准确度均高于lncRNA EWSAT1、SPRY4-IT1单独筛查方法,差异有统计学意义(P<0.05);lncRNA EWSAT1、SPRY4-IT1单独筛查方法灵敏度、特异度、准确度相近,差异无统计学意义(P>0.05);lncRNA EWSAT1、SPRY4-IT1阴性组3年生存率及生存期均明显高于lncRNA EWSAT1、SPRY4-IT1阳性组(P<0.05)。结论卵巢癌患者血清lncRNA EWSAT1、SPRY4-IT1升高;ncRNA EWSAT1+SPRY4-IT1联合筛查方法诊断卵巢癌灵敏度、特异度、准确度高,适合在临床上推广应用;lncRNA EWSAT1、SPRY4-IT1低表达的卵巢癌患者具有较好的预后。

IncRNASPRY4-IT1在肝癌中的作用研究

目的研究长链非编码RNASPRY4-IT1（1ncRNASPRY4-ITI）在肝细胞肝癌（HCC）中的表达，及其对肝癌细胞系HepG2恶性生物学表型的调控作用。方法收集2013年9月至2014年12月60例肝癌及癌旁组织样本，利用荧光定量聚合酶链式反应（PCR）检测IncRNASPRY4-IT1在肝癌组织中的表达，并检测IncRNASPRY4-IT1在人源性肝癌细胞系HepG2、HHCC、SK-HEP-1中的表达；利用小干扰RNA沉默HepG2细胞内IncRNASPRY4-IT1表达，分别进行Transwell细胞迁移、侵袭及CCK8细胞增殖实验；建立肝癌裸鼠成瘤模型，观察干扰IncRNASPRY4-IT1表达后荷瘤小鼠肿瘤生长的情况。结果比较癌旁组织，IncRNASPRY4-IT1肝癌组织中的表达显著上升（P=0．0109）；比较正常人肝细胞系L02，IncRNASPRY4-IT1在肝癌细胞系HepG2、HHCC、SK—HEP-1中表达明显升高（P均〈0．01），且在HepG2中上调尤为显著。干扰IncRNASPRY4-IT1表达后，HepG2细胞的迁移和侵袭并未受到明显影响（P〉0．05），然而其体外增殖活性受到显著抑制（P〈0．01）；荷瘤小鼠的肿瘤生长也明显受到抑制（P〈0．01）。结论长链非编码RNASPRY4-IT1在HCC中高表达，并通过促进肝癌的增殖而发挥重要的生物学功能，可能是HCC潜在的治疗靶点。

SPRY4-IT1与乳腺癌

长非编码RNA(lncRNA)是一种不编码表达蛋白质的RNA分子, 在多种肿瘤的发生、发展中发挥着重要作用。SPRY4-IT1作为一种lncRNA, 在乳腺癌组织中高表达, 可作为乳腺癌上下游调控因子, 促进乳腺癌的进展并与乳腺癌分期及预后密切相关。深入研究SPRY4-IT1与乳腺癌的相关分子机制, 可为发现乳腺癌早期诊断生物标志物、评估疾病预后和寻找靶向位点提供新的思路。

SPRY4-IT1通过激活锌指蛋白703基因表达增强肺癌细胞增殖能力

目的观察长链非编码RNA SPRY4-IT1在非小细胞肺癌（NSCLC）患者中的表达及其调控细胞增殖的分子生物学功能。 方法采用实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测32例NSCLC患者癌组织和远癌正常肺组织中SPRY4-IT1的相对表达量；肺癌A549细胞株内转染针对SPRY4-IT1序列的小干扰RNA（si-SPRY4-IT1）和无关序列（si-nc），采用细胞计数试剂盒（CCK-8）实验计数两组细胞增殖情况并绘制生长曲线；采用结晶紫染色实验观察细胞克隆形成情况。采用Western blot检测转染si-SPRY4-IT1后A549细胞中锌指蛋白703（ZNF703）蛋白表达。 结果SPRY4-IT1在NSCLC患者癌组织和癌旁组织中的相对表达量分别为3.24±2.01和1.12±0.78，癌组织中的相对表达量显著高于癌旁组织（t＝5.560，P＝0.001）；非小细胞肺癌细胞株A549转染si-SPRY4-IT1后，细胞中SPRY4-IT1表达水平显著降低（P＝0.001）；CCK-8实验显示，转染si-SPRY4-IT1的A549细胞增殖能力显著降低（P＝0.001）；结晶紫染色显示，转染si-SPRY4-IT1的A549细胞克隆形成能力显著降低（P＝0.001）；转染si-SPRY4-IT1和si-nc的A549肺癌细胞中ZNF703 mRNA相对表达量分别为0.61±0.07和0.96±0.08，si-SPRY4-IT1细胞显著低于si-nc细胞（P＝0.001）；ZNF703蛋白相对表达量分别为0.08±0.02和0.12±0.03，si-SPRY4-IT1细胞显著低于si-nc细胞（P＝0.001）。 结论长链非编码RNA SPRY4-IT1在NSCLC中高表达，并可通过增强ZNF703表达促进肺癌细胞的增殖。

沉默长链非编码RNA SPRY4-IT1对宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的探究长链非编码RNA SPRY4-IT1在宫颈癌中的表达水平及其对宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法 20对宫颈癌组织和癌旁组织取自2016年2月-2017年2月到该院就诊的20例宫颈癌患者,qRT-PCR检测长链非编码RNA SPRY4-IT1在宫颈癌组织和宫颈癌HeLa细胞中的表达水平;通过小RNA干扰技术检测沉默长链非编码RNA SPRY4-IT1,CCK-8实验检测沉默长链非编码RNA SPRY4-IT1对HeLa细胞增殖能力的影响;划痕愈合实验和Transwell迁移侵袭实验检测沉默长链非编码RNA SPRY4-IT1对HeLa细胞迁移及侵袭能力的影响。结果长链非编码RNA SPRY4-IT1的表达水平在宫颈癌组织和HeLa细胞中显著高于癌旁组织和人永生化表皮细胞HaCaT,差异有统计学意义(t=3.21,P<0.01;t=4.58,P<0.001)。HeLa细胞转染si-SPRY4-IT1 48 h后,HeLa细胞的增殖能力明显降低,差异有统计学意义(t=2.75,P<0.01);迁移距离显著减少(t=4.19,P<0.001);迁移和侵袭能力明显降低,差异有统计学意义(t=3.84,P<0.001;t=3.96,P<0.001)。结论长链非编码RNA SPRY4-IT1的表达水平在宫颈癌中显著上调,沉默长链非编码RNA SPRY4-IT1抑制HeLa细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

长链非编码RNASPRY4-IT1对结肠癌细胞SW48恶性生物学行为的影响

目的观察长链非编码RNASPRY4-IT1（1ncRNASPRY4-IT1）对结肠癌细胞株SW48恶性生物学行为的影响。方法合成针对IncRNASPRY4-IT1的特异性小干扰RNA（si-SPRY4-IT1），转染SW48细胞，利用实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）技术检测SW48细胞中SPRY4-IT1表达量，验证siRNA效果；细胞计数试剂盒（CCK-8）增殖实验检测低表达IncRNASPRY4-IT1对SW48细胞增殖能力的影响；膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（AnnexinV-FITC）／碘化丙锭（PI）染色流式检测法检测对凋亡的影响；Transwell侵袭实验观察对细胞侵袭能力的影响。结果RT-qPCR证实与对照组比较（0．923±0．025），si-SPRY4-IT1可使IncRNASPRY4-IT1表达量（0．3124-0．034）明显降低；CCK-8增殖实验中，IncRNASPRY4-IT1低表达可抑制SW48细胞的增殖能力（P〈0．05）；凋亡实验中，低表达SPRY4-IT1细胞的凋亡率[（15．140±0．680）％]较对照组细胞凋亡率[（4．223±0．724）％]明显增高（P〈0．05）；侵袭实验中低表达SPRY4-IT1细胞穿膜数目为（29．6±4．2）个，较对照组（92．3±2．5）个明显减少（P〈0．05）。结论低表达IncRNASPRY4-IT1可抑制结肠癌细胞SW48增殖和侵袭能力，促进其凋亡。