甘蔗SPSⅢ内含子地高辛探针的制备及检测

以甘蔗SPS基因选择性剪接保留的内含子6,7,8片段为靶序列,利用PCR扩增技术分别制备出3种地高辛标记的SPS内含子探针:SPS-intron 6探针167 bp,SPS-intron 7探针93 bp和SPS-intron8探针175 bp,并通过斑点杂交实验表明这3种探针灵敏度高,都能检测到pg级的靶核酸,且特异性好,阴性对照实验显示无杂交信号.

甘蔗蔗糖磷酸合成酶SPS Ⅲ基因表达分析

为探讨蔗糖磷酸合成酶(sucrose phosphate synthase,简称SPS)对甘蔗糖分代谢的重要影响,以4个甘蔗品种桂糖28号(GT28)、果蔗Badila、新台糖20号(ROC20)、新台糖22号的+1、0叶(最高可见肥厚带的第1张完全展开叶为+1叶,自下而上位于+1叶之上的为0叶)、幼嫩叶鞘、幼茎等部位为材料,采用半定量RT-PCR技术分析甘蔗蔗糖磷酸合成酶基因(简称SPSⅢ)在工艺成熟期不同部位中的表达情况。结果表明,在工艺成熟期间,SPSⅢ在4个甘蔗基因型的+1、0叶、幼嫩叶鞘和幼茎中均有表达,表达量因基因型及测定部位与时期不同而不同;在工艺成熟初期,以GT28的4个部位较其他3个品种的低,而在果蔗Badila的4个部位中表达较稳定,在ROC20中以嫩叶鞘表达最高,而在ROC22中以幼茎表达最高,在工艺成熟中期,SPSⅢ在4个甘蔗基因型中的+1、0叶、幼嫩叶鞘和幼茎中的表达较初期没有明显差异;在工艺成熟后期,SPSⅢ在4个甘蔗基因型中的+1、0叶、幼嫩叶鞘和幼茎中的表达较前2个时期迅速提高,均达到了较高的表达水平。

血清Ⅲ型前胶原氨基端肽水平与肝硬化患者预后的相关性研究

肝纤维化是慢性肝炎向肝硬化转变的必然阶段，它的形成是肝功能障碍的主要原因之一，血清Ⅲ型前胶原氨基端肽(SPⅢP)是反映肝纤维化的良好指标。为了进一步了解SPⅢP水平与肝纤维化患者病情变化之间的关系，我们对136例肝硬化患者SPⅢP水平进行检测，并分析其与肝功能Child分级、凝血酶原时间以及上消化道出血等的相关性。现报告如下：

肝炎患者血清Ⅲ型前胶原肽的RIA测定

血清Ⅲ型前胶原肽(SPⅢP)是Ⅲ型前胶原在细胞外经特异性酶的作用转化成Ⅲ型胶原时同时释放入血循环的N 端前肽,共量与Ⅲ型胶原相等。因此,测定SPⅢP 含量即可知Ⅲ型胶原的合成量和合成速率。由于Ⅲ型胶原主要存在于肝脏,因而SPⅢP 含量可反映肝纤维化程度和肝病的活动性。现将我院从1989年6月起住院的92例各型肝炎SPⅢP RIA 测定结果进行初步分析如下。资料和结果一、资料:92例各型肝炎均按1984年南宁病毒性肝炎会议修订的防治方案(试行)标准诊断,同时作了HBV、HAV

甘蔗蔗糖磷酸合成酶磷酸化位点的突变及相应表达载体的构建

用Clontech公司的定点突变试剂盒TransformerTMSite-Directed Mutagenesis Kit对克隆载体pMD18T-SPS3L上的SPS基因SPS3L进行定点突变,使其459位的丝氨酸密码子分别突变为编码苏氨酸、丙氨酸和谷氨酸的密码子。然后将突变后的和未突变的SPS3L基因分别克隆至表达载体质粒pCAMBIA1301中,构建重组质粒pCAMBIA1301-SPS3L。经测序鉴定,对SPS3L基因的定点突变成功,构建表达载体pCAMBIA1301-SPS3L成功。

胆囊炎胆石症致肝纤维化的血清学诊断

本文对34名胆囊炎胆石症患者血清中Ⅲ型前胶原肽(sPⅢP)、单胺氧化酶(sMAO)及总羟脯氨酸(sTHP)的测定结果进行了分析,并与组织学肝纤维化程度进行了相关性研究。发现SPⅢP值的升高有显著差异,且与肝纤维化程度相关性良好,其诊断阳性率达72.7％,显著优于另二者。认为胆囊炎胆石症可导致肝纤维化,其程度随阻塞变化而加重;测定sPⅡP含量是一种非创伤性诊断肝纤维化敏感、可靠的方法。