蛋白酶体20S亚基β8调控丝裂原活化蛋白激酶激酶/细胞外信号调节激酶通路对肾透明细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探究蛋白酶体20S亚基β8(PSMB8)对肾透明细胞癌(ccRCC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响,以及是否通过调控丝裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路发挥其作用。方法采用癌症基因组图谱数据库分析ccRCC与正常组织PSMB8 mRNA的表达水平,并通过实时荧光定量PCR、Western blot和免疫组织化学染色等方法进一步检测PSMB8在ccRCC组织和细胞中的表达情况。构建稳定过表达和敲减PSMB8的细胞株,分别采用CCK-8法和平板克隆实验检测细胞的增殖能力,划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭的能力。对PSMB8共表达基因进行京都基因与基因组百科全书通路富集分析,Western blot检测MEK/ERK通路相关蛋白的磷酸化水平,并加用ERK激动剂C16-PAF处理进行细胞功能学挽救实验。结果与正常组织比较,PSMB8 mRNA和蛋白在ccRCC组织中呈高表达(P均<0.001),且与临床患者的TNM分期显著相关(P<0.001);与阴性对照组比较,过表达PSMB8可以促进786-O、ACHN细胞的增殖(P=0.021,P=0.039)、迁移和侵袭(P均<0.001),敲减PSMB8可以抑制786-O、ACHN细胞的增殖(P=0.022,P=0.005)、迁移和侵袭(P均<0.001);PSMB8共表达基因通路富集分析提示其可能与丝裂原活化蛋白激酶通路相关(P<0.001);敲减PSMB8后786-O和ACHN细胞MEK1/2(P=0.017,P=0.016)、ERK1/2(P=0.010,P=0.040)蛋白磷酸化水平及ERK下游因子c-Myc(P=0.043,P=0.038)、c-Fos(P=0.025,P=0.008)和CyclinD1(P=0.006,P=0.047)转录水平均下调;与ERK激动剂C16-PAF处理组比较,敲减PSMB8+C16-PAF组明显抑制786-O、ACHN细胞的增殖(P=0.003,P=0.002)、迁移和侵袭能力(P均<0.001)。结论PSMB8通过激活MEK/ERK信号通路从而促进ccRCC细胞的增殖、迁移及侵袭。

RAS/RAF/丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶信号通路在胃癌中的研究进展

胃癌(GC)的发病机制复杂,与多种因素有关,包括环境和遗传因素等。细胞内信号通路失调代表了一种常见的致病机制,可能适合对患者进行靶向药物治疗。RAS/RAF/丝裂原活化蛋白激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路在多种恶性肿瘤的发生发展中起到至关重要的作用。但迄今为止,大多数针对此通路的药物研究是基础实验,临床试验有待开展。本文就RAS/RAF/MEK/ERK信号通路在GC中的研究进展进行综述,重点论述其与GC的关系及潜在的作用机制,以及RAS/RAF/MEK/ERK信号通路抑制剂在GC治疗中的应用前景,旨在为GC的早期诊断和治疗提供新思路。

人A431皮肤鳞状细胞癌中丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶信号通路对P53的调节作用

目的观察丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(MAPK/ERK)信号通路的活化及抑制对皮肤鳞状细胞癌(SCC)细胞增殖、凋亡情况的影响,探讨MAPK/ERK信号通路与抑癌基因P53在皮肤SCC中的相互作用机制。方法培养人A431皮肤SCC细胞株,分为低、中、高浓度的MAPK/ERK通路抑制剂(PD98059+DMSO)组及激活剂(IGF+PBS)组、空白对照(DMSO)组。噻唑蓝法检测细胞体外增殖活力,流式细胞术(FCM)检测细胞的凋亡,Western blot检测各组A431细胞中P-ERK、P53蛋白表达。结果经不同浓度的抑制术PD98059处理A431细胞,细胞增殖受到抑制,呈浓度-效应和时间-效应关系(P<0.05);经不同浓度的激动剂胰岛素样生长因子(IGF)处理A431细胞,细胞增殖受到促进,呈浓度-效应和时间-效应关系(P<0.05)。FCM检测结果显示,PD98059作用于A431细胞,细胞凋亡率明显增高,呈浓度-效应关系(P<0.05);而IGF作用于A431细胞,细胞凋亡率明显降低,呈浓度-效应关系(P<0.05)。Western blot检测结果显示,PD98059处理A431细胞,P-ERK蛋白的表达降低,P53蛋白的表达增强,随着PD98059浓度的增加,P-ERK蛋白明显降低,P53蛋白明显增强(P<0.05);而IGF处理A431细胞,P-ERK蛋白的表达增强,P53蛋白的表达降低,随着IGF浓度的增加,P-ERK蛋白明显增强,P53蛋白明显降低(P<0.05);经过Pearson相关性分析,P53与P-ERK的表达呈负相关(P<0.05)。结论人A431细胞中MAPK/ERK信号通路被IGF激活后,促凋亡因子P53表达降低,细胞增殖能力增强,凋亡能力降低;而该通路受抑制后,促凋亡因子P53表达增高,细胞增殖能力降低、凋亡能力增强。

紫草素对肺炎链球菌引起的肺炎小鼠细胞外信号调节激酶/p38丝裂素活化蛋白激酶/核苷酸结合寡聚化结构域样蛋白3信号通路及肺血管通透性的影响

目的探究紫草素对肺炎链球菌引起的肺炎小鼠细胞外信号调节激酶/p38丝裂素活化蛋白激酶/核苷酸结合寡聚化结构域样蛋白3(ERK/p38/NLRP3)信号通路及肺血管通透性的影响。方法采用肺炎链球菌悬液50 L滴加BALB/c小鼠破损鼻黏膜建立肺炎链球菌性肺炎模型,成模小鼠采用随机数字表法分为模型组、紫草素低、中、高浓度组及头孢呋辛酯组,另取鼻腔滴加50 L生理盐水BALB/c小鼠为对照组,每组10只,紫草素低、中、高浓度组分别给予紫草素12.5 mg/kg、25.0 mg/kg、50.0 mg/kg,头孢呋辛酯组给予头孢呋辛酯50.0 mg/kg,对照组、模型组给予等量生理盐水,每天1次,连续灌胃7 d。末次给药12 h后处死小鼠,检测各组小鼠左肺湿/干重比值(W/D),每组采用随机数字表法选取4只小鼠进行1%伊文氏蓝5 mL/kg尾静脉注射检测肺血管通透性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺组织白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达量,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)及蛋白质印迹法(WB)分别检测肺组织ERK、p38、NLRP3 mRNA及蛋白表达。结果与对照组比较,模型组小鼠肺组织W/D比值[(4.49±0.27)%比(3.02±0.15)%]、肺血管通透性[(0.091±0.009)g/mg比(0.034±0.004)g/mg]、IL-1β[(567.29±14.65)pg/mL比(102.46±6.73)pg/mL]、TNF-α[(417.16±12.89)pg/mL比(83.59±6.28)pg/mL]、ERK、p38、NLRP3 mRNA及蛋白表达水平均显著增加(P<0.05);与模型组比较,紫草素低、中、高浓度组小鼠肺组织W/D比值、肺血管通透性、IL-1β、TNF-α表达量、ERK、p38、NLRP3 mRNA及蛋白表达水平均依次降低(P<0.05),紫草素高剂量组均低于头孢呋辛酯组(P<0.05)。结论紫草素可减轻肺炎链球菌性肺炎小鼠肺组织损伤、炎症反应及肺血管通透性,可能与抑制ERK/p38/NL‐RP3信号通路有关。

抑制水通道蛋白4可降低脊髓后角胶质细胞细胞外调节蛋白激酶信号的活化改善坐骨神经损伤导致的神经病理性疼痛

目的探讨腰椎间盘突出引起的坐骨神经痛中,抑制水通道蛋白4(AQP4)对脊髓胶质细胞以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路活化的影响。方法取8周龄雄性SD大鼠90只,分为假手术组18只,坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)+DMSO组36只,CCI+TGN-020组(AQP4抑制剂) 36只。CCI模型应用动物行为学,Western blotting方法,免疫荧光(双重染色)等方法检测。结果 Western blotting显示,细胞外调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p38MAPK信号通路及星形胶质细胞在神经损伤之后活化;免疫荧光在AQP4的表达被TGN-020抑制之后,胶质细胞及ERK、JNK、p38MAPK信号通路的活化被削弱,p-ERK和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)共定位的细胞数量在损伤后明显增多,而TGN-020可减少之。结论抑制AQP4可抑制坐骨神经损伤引发的脊髓后角星形胶质细胞活化及MAPK信号通路活化,且可以通过抑制脊髓后角ERK通路的活化来抑制星形胶质细胞的活化,从而改善坐骨神经损伤所致神经病理性疼痛。

丝裂原活化蛋白激酶/胞外信号调节蛋白激酶的激酶基因多态性与亚综合征抑郁的关联性分析

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶/胞外信号调节蛋白激酶的激酶(MEK)基因多态性与亚综合征抑郁(SSD)的关系。方法:收集SSD患者(SSD组)143例和正常对照200名(正常对照组)的外周静脉血,提取基因组DNA。采用TaqMan探针SNP基因分型技术,检测两组受试者MEK1基因(rs1549854与rs4255740)和MEK2基因(rs7258366与rs12459484)共4个SNP位点的基因型,并分析基因多态性与SSD的关系。结果:SSD组和正常对照组MEK基因的4个位点的基因型和等位基因频率比较,差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论:MEK基因rs1549854、rs4255740、rs7258366及rs12459484其4个位点的基因型及等位基因频率与SSD的发生可能无关。

补肾安胎方对自身免疫型复发性流产细胞外信号调节蛋白激酶信号通路的影响

复发性流产是妊娠常见的并发症之一,其病因较为复杂。除与遗传、解剖、内分泌、感染因素有关外,免疫因素在本病中占有重要的地位。细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）是丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）家族的一个亚族,可被多种生长因子和细胞因子激活,介导细胞生长、增殖、分化的信号转导。有研究表明,自身免疫型复发性流产患者母胎界面胎盘与蜕膜中的ERK蛋白的含量及活性均明显高于健康对照,自身免疫型复发性流产与ERK信号通路的激活密切相关。

促分裂原活化的蛋白激酶信号通路与能量代谢的关系

能量代谢每时每刻都伴随着物质代谢在生命体内发生。生物通过利用物质代谢产生的高能磷酸化合物以维持各项生命功能的运转,不同状态下的细胞通过利用各种物质通过不同的通路进行不同的代谢方式。促分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)通路作为生命体里广泛存在的一类信号蛋白,影响着细胞、生物体的生命活动。MAPK通路在能量代谢的各个环节起着非常重要的作用。通过研究MAPK通路中的胞外信号调节激酶(ERK)通路、Jun激酶(JNK)通路、P38通路均与能量代谢有关的蛋白、靶点、关键酶、转运体,与三大营养物质能量代谢相结合,从而为能量代谢相关的细胞功能进一步研究铺垫,并为今后治疗肿瘤性疾病、感染性疾病、代谢性疾病等提供新思路。

细胞外信号调节激酶在蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛中的研究进展

脑血管痉挛（cerebral vasospasm,CVS）是蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage,SAH）后最严重的并发症之一。CVS发生后常引起严重局部脑组织缺血或迟发性缺血性脑损害,导致严重的神经功能障碍,成为SAH致死、致残的重要原因。近年来随着研究的不断深入,已经认识到炎症反应、缩血管物质增多、氧合血红蛋白、离子通道紊乱、血管细胞增殖、一氧化氮合成减少等在CVS发病中起重要作用。

家蚕丝胶对糖尿病大鼠肾脏胞外信号调节激酶信号转导通路活性的影响

糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）是糖尿病的严重并发症,其病理特征是肾小球肥大,系膜细胞增生、细胞外基质（extracellular matrix,ECM）积聚和基底膜增厚,从而导致肾小球高滤过和蛋白尿,最终导致肾小球硬化和肾间质纤维化.近年来有研究显示胞外信号调节激酶（extracellular signal regulated kinase,ERK）信号转导通路与DN密切相关.ERK是丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase,MAPK）家族的一个亚族,可被多种生长因子和细胞因子激活,介导细胞的生长、增殖和分化等多种生理、病理过程[1,2].本研究旨在探讨家蚕丝胶对糖尿病模型大鼠肾脏ERK信号转导通路的影响及可能机制,以期为临床治疗DN提供新思路.

细胞外信号调节激酶5信号转导通道研究的最新进展

作为一个开放系统,细胞具有极其复杂的生命活动,而这些生命活动又受细胞本身严密的调控机制所调节。为了与细胞外的环境和其他细胞之间进行信息交流,生物体在长期的自然选择和进化发展当中逐渐形成了一个复杂的信号转导网络。促分裂素原活化蛋白激酶（mitogen-activatedprotein kinases,MAPK）链是自然界生物体内普遍存在的信号转导系统之一,它在细胞的生存、增殖、分化和凋亡等生命活动周期的调控中发挥着极其重要的作用。真核细胞的MAPK信号转导通路可分为4个亚族：

八聚体转录因子1通过细胞外调节蛋白激酶/丝裂原活化蛋白激酶信号通路对胃癌细胞侵袭的影响

目的 研究八聚体转录因子1(OCT1)对胃癌细胞侵袭能力影响,及其可能的作用机制。方法 用免疫组化法检测96例胃癌患者组织及其正常胃黏膜组织标本中OCT1的表达情况。将SGC-7901细胞分为实验组和对照组。实验组转染OCT1-siRNA质粒,对照组转染NC质粒。用蛋白质印迹法检测上皮细胞-间充质转化(EMT)和细胞外调节蛋白激酶/丝裂原活化蛋白激酶(ERK/MAPK)通路相关蛋白的表达情况,用Transwell实验法检测细胞的侵袭转移能力。结果 OCT1在癌组织和癌旁组织阳性表达率分别为62.50%(60例/96例)和3.12%(3例/96例),差异有统计学意义(P<0.001)。实验组和对照组的OCT1蛋白相对表达水平分别为0.21±0.02和0.62±0.11,MMP-2蛋白相对表达水平分别为0.19±0.01和0.71±0.13,E-cadherin蛋白相对表达水平分别为0.93±0.07和0.18±0.02,p-ERK蛋白相对表达水平分别为0.27±0.02和0.42±0.03,侵袭细胞数分别为(21.88±5.13)和(47.23±7.01)个,迁移细胞数分别为(32.55±6.23)和(89.82±9.11)个,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论 OCT1可通过调节细胞外调节蛋白激酶/丝裂原活化蛋白激酶信号通路的表达,进而调控胃癌细胞的迁移和侵袭能力。

外源性硫化氢对早期糖尿病肾脏疾病大鼠丝裂原活化细胞外信号调节蛋白激酶/细胞外信号调节激酶信号通路的影响

目的研究外源性硫化氢(H2 S)通过丝裂原活化细胞外信号调节蛋白激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路对早期糖尿病肾脏疾病(DN)大鼠的保护作用。方法随机选取SPF级健康雄性SD大鼠24只腹腔一次性注射1%链尿佐菌素(STZ)60 mg/kg制作DN模型,余下10只(正常对照组)腹腔一次性注射等量的柠檬酸缓冲液。3周后DN造模成功,再将24只DN大鼠随机分为DN组和DN+硫氢化钠(NaHS)组,每组各12只。DN+NaHS组予腹腔注射NaHS溶液56μmol·kg^(-1)·d^(-1),正常对照组和DN组予等量生理盐水腹腔注射,3组大鼠均连续注射12周。检测各组血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)及24小时尿蛋白(24h Upro)水平,观察其肾脏组织病理变化。采用Katafuchi评分评估大鼠肾脏病变(包括肾小球、肾小管及肾血管)。采用免疫组化法检测ERK1/2、MEK1和MEK2蛋白阳性区域面积百分比。结果DN组大鼠SCr、BUN及24h Upro水平、肾脏组织Katafuchi评分、MEK1、MEK2及ERK1/2蛋白阳性区域面积百分比均显著高于正常对照组和DN+NaHS组(P<0.01),而正常对照组与DN+NaHS组大鼠上述指标水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论外源性H2 S对早期DN大鼠肾脏的保护作用可能与抑制MEK/ERK信号通路有关。

肺癌患者丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)表达水平及临床意义

目的检测肺癌患者血浆中丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1/ERK2)表达水平及探讨其与肺癌类型、临床分期、TNM分期的关系。方法用ELISA法分别检测肺癌组(n=78),良性肺部疾病组(n=27),健康对照组(n=14)血浆中MAPK1/ERK2的水平含量。结果肺癌患者血浆中MAPK1/ERK2的含量高于良性肺部疾病组和健康对照组(P<0.05),良性肺部疾病组高于健康对照组(P<0.05)。肺癌患者血浆中MAPK1/ERK2的表达与性别,年龄,吸烟状况,肿瘤病理类型,临床分期,TNM分期无显著性差异。结论 MAPK1/ERK2对肺癌的辅助诊断有一定的临床价值,可作为一项新的肺癌生物标志物应用。

二甲双胍调节MEK/ERK通路及基质金属蛋白酶在恶性肿瘤中应用的研究进展

二甲双胍是目前治疗2型糖尿病的一线用药,其通过改善胰岛素抵抗、抑制肝脏糖异生等途径降低血糖。近年发现,二甲双胍还可通过促分裂原活化的蛋白激酶激酶/胞外信号调节激酶信号通路以及基质金属蛋白酶诱导细胞周期停滞、促进细胞凋亡、抑制细胞侵袭迁移,并可与各种抗肿瘤药物联用发挥协同作用以抑制肿瘤进展。但目前仍缺乏二甲双胍可以抑制癌症患者病情进展的研究证据,未来还需要对二甲双胍在恶性肿瘤治疗中的作用及其有效性、安全性进行进一步研究。

中药痛消饮治疗寒凝血瘀证原发性痛经效果及对MAPK/ERK信号通路的影响

目的探讨中药痛消饮治疗寒凝血瘀证原发性痛经的效果及对丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(mitogen activated protein kinase/extracellular regulated protein kinase,MAPK/ERK)信号通路的影响。方法选取衡水市中医医院106例寒凝血瘀证原发性痛经患者,按照随机数字表法分为中药组和常规组,各53例。常规组给予布洛芬颗粒治疗,中药组给予中药痛消饮治疗,2组均于月经预来潮前7 d开始服药至月经来3 d后停服,共服用3个月经周期。比较2组疗效、治疗前后COX痛经症状量表(Cox dysmenorrhea symptom scale,CMSS)评分、疼痛视觉模拟评分(visual analog score,VAS)、血清疼痛介质[β-内啡肽(β-endorphins,β-EP)、前列腺素F2α(prostaglandin F2α,PGF2α)、前列腺素E 2(prostaglandin E 2,PGE 2)]水平、外周血单个核细胞MAPK/ERK信号通路相关因子[丝裂原活化细胞外调节激酶(mitogen activated extracellular regulated kinase,MEK)1、MEK2、ERK1、ERK2 mRNA]水平、子宫微循环状态[子宫动脉血流阻力指数(resistance index,RI)、搏动指数(pulsatility index,PI)、收缩期峰值/舒张期峰值(systolic peak/diastolic peak,S/D)]及不良反应发生率。结果中药组总有效率高于常规组(P<0.05)。2组治疗后VAS评分、CMSS量表持续时间和严重程度评分低于治疗前,且中药组低于常规组(P<0.05);2组治疗后血清β-EP、PGE 2水平高于治疗前,且中药组高于常规组(P<0.05);2组治疗后PGF2α水平,外周血单个核细胞MEK1、MEK2、ERK1、ERK2 mRNA相对表达量,子宫动脉PI、RI、S/D低于治疗前,且中药组低于常规组(P<0.05)。2组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论中药痛消饮治疗寒凝血瘀证原发性痛经疗效显著,能通过抑制MAPK/ERK信号通路相关因子和疼痛介质表达显著减轻痛经症状,还可改善子宫微循环状态,且安全性良好。

有丝分裂原活化蛋白激酶/细胞外调节信号激酶信号转导通路与肝纤维化逆转的相关性

近年发现,无论是消除致病因素或是应用有效抗纤维化药物,都可逆转患者及模型动物的肝纤维化[1].但具体机制尚不明确.由于有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外调节信号激酶(ERK)信号通路在多种损伤修复过程中发挥重要作用,我们在建立肝纤维化自发逆转动物模型的基础上,检测MAPK/ERK信号通路的活性,以揭示该通路与肝纤维化逆转的相关性.