微小RNA-150及靶基因SRC激酶信号抑制剂1在下肢深静脉血栓中的表达及作用机制

目的探讨微小RNA(miRNA)-150及靶基因SRC激酶信号抑制剂1(SRCIN1)在下肢深静脉血栓(LEDVT)中的表达及作用机制。方法收集2022年1月至2023年1月柳州市人民医院收治的60例LEDVT患者的临床资料作为LEDVT组,另纳入同期进行体检的60例健康者作为对照组。采集两组受试者的外周静脉血,并分离内皮祖细胞。通过荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miRNA-150的表达水平,利用生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-150的靶基因,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测SRCIN1蛋白的表达,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测内皮祖细胞增殖情况。结果与对照组相比,LEDVT组内皮祖细胞中miRNA-150的相对表达量明显降低(P﹤0.01)。生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验证实SRCIN1是miRNA-150的靶基因;在野生型SRCIN1中,与转染miRNA-NC的细胞相比,转染miRNA-150 agomir细胞的荧光素酶活性明显降低(P﹤0.01)。在突变型SRCIN1中,miRNA-150对SRCIN1的负向调控作用消失。Western blot检测结果显示,与miRNA-150antagomir组内皮祖细胞相比,miRNA-150 agomir组内皮祖细胞中SRCIN1蛋白的表达水平降低(P﹤0.05);与对照组相比,LDVT组内皮祖细胞中SRCIN1蛋白的表达水平升高(P﹤0.05)。MTT实验检测结果显示,与miRNA-150antagomir组相比,miRNA-150 agomir组的吸光度(OD)值在48、72 h时均明显升高(P﹤0.01)。结论miRNA-150在内皮祖细胞中的表达水平降低可能与LEDVT的发生、发展有关。高表达的miRNA-150可能通过靶向SRCIN1促进内皮祖细胞的增殖,从而达到治疗LEDVT的目的。

Src激酶抑制剂PP2对癫痫持续状态性大鼠脑水肿形成及ERK1/2和P38信号通路的影响

目的探讨Src激酶抑制剂PP2对癫痫持续状态性大鼠脑水肿形成及ERK1/2和P38信号通路的影响。方法60只大鼠建立癫痫模型,随机分为:模型组、PP2低剂量(1 nmol)组、PP2中剂量(2.5 nmol)组、PP2高剂量(5 nmol)组、丙戊酸钠(5 mg/kg)组,每组12只;另取12只SD大鼠作为对照组。分组处理后,以脑电图仪检测记录各组大鼠脑电波(EEG);观察记录癫痫发作次数、持续时间;计算脑组织含水量检测各组大鼠脑水肿情况;HE染色检测各组大鼠皮质神经元病理变化;免疫印记法检测各组大鼠脑组织ERK1/2和P38通路相关蛋白p-ERK1/2、ERK1/2、p-P38、P38表达。结果对照组大鼠皮层区脑电波正常,大脑皮质神经元无病理改变。模型组大鼠皮层区出现散在性痫波,多为尖波、棘波、棘慢复合波,并大量痫性放电,脑电波发生异常改变;皮质神经元细胞形态不规则,变小皱缩,排列紊乱,细胞较多凋亡,数量减少,出现病理损伤。PP2低、中、高剂量组、丙戊酸钠组大鼠脑电波异常改变及皮质神经元细胞病理损伤均减轻,且减轻程度随剂量升高呈依赖性增强,PP2高剂量组与丙戊酸钠组大鼠改变及损伤减轻程度相似。与对照组相比,模型组大鼠癫痫发作次数及持续时间、脑组织含水量、脑皮层区p-ERK1/2/ERK1/2、p-P38/P38显著升高(P<0.05);与模型组相比,PP2低、中、高剂量组和丙戊酸钠组大鼠癫痫发作次数及持续时间、脑组织含水量、脑皮层区p-ERK1/2/ERK1/2、p-P38/P38降低(P<0.05),且PP2三组之间呈剂量依赖性,PP2高剂量组与丙戊酸钠组相比,上述各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论Src激酶抑制剂PP2可减轻脑水肿,缓解癫痫发作,保护神经功能,改善其临床症状,可能通过抑制ERK1/2和P38信号激活实现。

血清胸苷激酶1、细胞角质蛋白19片段抗原21-1及dickkopfWNT信号通路抑制剂1对食管癌的诊断价值

目的探讨血清胸苷激酶1(TK1)、细胞角质蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)及dickkopf WNT信号通路抑制剂1(DKK1)对食管癌的诊断价值。方法选取62例食管癌患者作为食管癌组,59例健康体检者作为对照组。对比两组受试者TK1、CYFRA21-1、DKK1水平,对比不同分期食管癌患者TK1、CYFRA21-1、DKK1水平,分析TK1、CYFRA21-1、DKK1单独及联合检测对食管癌的诊断价值。结果食管癌组患者TK1、CYFRA21-1、DKK1水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。Ⅲ~Ⅳ期食管癌患者TK1、CYFRA21-1、DKK1水平均明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。TK1+CYFRA21-1+DKK1联合检测诊断食管癌的灵敏度和特异度分别为88.50%、79.10%,曲线下面积为0.779(95%CI:0.695~0.864),均高于三者单独检测。结论TK1、CYFRA21-1、DKK1联合检测有利于提高食管癌的诊断效能,防止误诊漏诊,三者对其病情评估具有一定参考价值。

凋亡信号调节激酶-1抑制剂在非酒精性脂肪性肝炎中的研究进展

非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)是最常见的慢性肝病,当前未见有效疗法。凋亡信号调节激酶-1(apoptosis signal regulating kinases 1,ASK-1)是细胞丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶(mitogen-activated protein kinase kinase kinases,MAPKKKs)家族成员之一,当机体受到细胞内活性氧簇应激、内质网应激、钙内流和细胞外炎症等信号刺激时,ASK-1激活c-Jun氨基末端激酶(c-Jun amino terminal kinasec,JNK)和p38 MAPK通路,从而促进细胞增殖、分化、凋亡以及炎症因子的产生,诱发NASH、纤维化等疾病,因此可通过抑制ASK-1的活性来治疗NASH。本文对当前NASH的治疗手段、ASK-1结构和作用机制以及近年ASK-1抑制剂治疗NASH的研究进展进行综述,旨在为该类抑制剂的设计与开发提供参考。

微小RNA-338-3p调控信号转导和转录激活因子1对表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂耐药肺癌细胞株PC-9/GR中程序性死亡配体1表达和细胞凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-338-3p(miR-338-3p)对表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)耐药肺癌细胞株PC-9/GR中程序性死亡配体1(PD-L1)表达和细胞凋亡的影响及相关机制。方法 体外培养PC-9细胞、PC-9/GR细胞,采用0、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、8.00μmol/L吉非替尼处理确定用药浓度;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-338-3p表达。将PC-9/GR细胞分为对照组、miR-338-3p NC组(转染miR-338-3p NC)、miR-338-3p组(转染miR-338-3p模拟物)和信号转导和转录激活因子1(STAT1)抑制剂组(转染miR-338-3p模拟物+100μmol/L氟达拉滨)。4组均添加1.00μmol/L吉非替尼,转染后qRT-PCR检测细胞中miR-338-3p表达;MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;蛋白印迹(WB)法STAT1、p-STAT1、PD-L1、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果 当吉非替尼浓度升高至1.00μmol/L时,PC-9细胞与PC-9/GR细胞增殖率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。与PC-9细胞相比,PC-9/GR细胞中miR-338-3p表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。转染后,qRT-PCR结果显示,miR-338-3p组、STAT1抑制剂组的miR-338-3p表达水平均高于miR-338-3p NC组、对照组,差异有统计学意义(P>0.05)。与miR-338-3p NC组相比,miR-338-3p组PC-9/GR细胞增殖率及细胞中PD-L1、Bcl-2蛋白表达水平降低,凋亡率及细胞中p-STAT1/STAT1、Bax蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与miR-338-3p组相比,STAT1抑制剂组PC-9/GR细胞增殖率及细胞中PD-L1、Bcl-2蛋白表达水平升高,凋亡率及细胞中p-STAT1/STAT1、Bax蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-338-3p可抑制EGFR-TKI耐药肺癌细胞株PC-9/GR细胞中PD-L1表达,并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与激活STAT1有关。

MEK1/2抑制剂U0126抑制肠道病毒71型的复制

为了揭示肠道病毒71型(enterovirus71,EV71)的复制与宿主细胞Raf/MEK/ERK信号通路(简称ERK通路)的相互关系,本研究应用临床诊断为手足口病的患儿疱疹液,通过易感细胞分离培养、RT-PCR及序列测定,以及Western印迹技术等方法,成功分离到EV71临床株.进一步用该分离株感染易感细胞,通过观察宿主细胞p-ERK1/2蛋白磷酸化水平、病毒特异性衣壳蛋白VP1水平、病毒半数组织培养感染量(50%tissue culture infectious dose,TCID50),以及感染细胞的CPE等指标,以期揭示ERK通路在EV71复制的作用.结果表明,EV71的复制可引起细胞ERK通路的活化;而用MEK1/2特异性的抑制剂U0126预先抑制ERK通路的活化,可显著地降低受染细胞上清液中的病毒的感染滴度(以TCID50表示)、受染细胞中EV71VP1蛋白水平、受染细胞中EV71核酸水平,以及受染细胞的细胞病变效应(cytopathic effect,CPE).提示ERK信号通路的活化对EV71的复制具有重要的作用.本研究为进一步阐明EV71在宿主细胞内的复制机制、寻找新型抗病毒靶标等研究奠定了良好的基础.

SRCIN1基因表达对肺癌细胞生长及替莫唑胺化疗敏感性的影响

目的探讨SRC激酶信号抑制剂(SRCIN) 1基因过表达对肺癌细胞活力、侵袭能力、凋亡率及替莫唑胺化疗敏感性的影响。方法人肺癌A549细胞分为4个处理组(空白对照组、pc DNA3. 1-SRCIN1组、替莫唑胺组和pc DNA3. 1-SR-CIN1+替莫唑胺组),其中噻唑蓝(MTT)法、Transwell小室和流式细胞术分别检测细胞活力、侵袭能力及凋亡率。Western印迹法检测SRCIN1、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、B细胞淋巴瘤(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)和β-catenin的蛋白表达。结果 pc DNA3. 1-SRCIN1组和替莫唑胺组均可抑制A549细胞活力、侵袭能力及PCNA、MMP-2和β-catenin的蛋白表达,诱导细胞凋亡及上调Bax表达,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0. 05),pc DNA3. 1-SRCIN1+替莫唑胺组对细胞活力、侵袭能力及PCNA、MMP-2和β-catenin的表达抑制、细胞凋亡、Bax表达诱导作用更明显,且与pc DNA3. 1-SRCIN1组和替莫唑胺组比较差异均有统计学意义(P<0. 05)。结论 SRCIN1基因过表达可抑制肺癌细胞活力和侵袭能力,诱导细胞凋亡,增加替莫唑胺化疗敏感性,机制可能与Wnt信号下调有关。

洛伐他丁对心肌细胞外信号调节激酶信号传导水平及心脏营养素-1表达的影响

目的:探讨细胞外信号调节激酶(ERK)通路与甲基戊二酰辅酶A(HGM-CoA)还原酶抑制剂的关系。方法:体外培养的大鼠心肌细胞株H9c2(2-1)经洛伐他丁处理24h和5d,然后以免疫印迹杂交检测p-44ERK1、p-42ERK2和总ERK蛋白水平,同时检测心脏营养素-1蛋白水平的变化。结果:洛伐他丁处理24h后,ERK1、ERK2的磷酸化水平分别升高125%(P=0.041)和89%(P=0.034);处理5d后检测ERK1、ERK2的磷酸化水平分别升高93%(P=0.021)和80%(P=0.046)。培养中的大鼠心肌细胞H9c2(2-1)经过洛伐他丁处理24h或5d后,作为重要炎性细胞因子的心脏营养素-1水平均显著增高,其中,处理24h后增高79.3%(P=0.004),处理5d后增高34.8%(P=0.014)。选择性抑制ERK之后,洛伐他丁处理导致心脏营养素-1水平的变化显著减弱。结论:洛伐他丁除了具有已知的降脂作用外,亦可能参与心肌细胞炎性反应的调节机制。

THZ1缓解心肌肥大保护射血分数降低的心力衰竭小鼠心脏功能的机制研究

目的:探讨细胞周期蛋白依赖性激酶7(CDK7)抑制剂THZ1对射血分数降低的心力衰竭(HFrEF)小鼠心肌肥大和心脏功能的保护作用并探讨其作用机制。方法:将10周龄雄性C57BL/6小鼠成年应用永久性冠状动脉结扎术诱导HFrEF小鼠模型(HFrEF组,12只),12只小鼠接受假手术(sham组)。54只小鼠行冠状动脉结扎术,将存活的36只小鼠分为HFrEF组、THZ1组、THZ1+Colivelin TFA组,每组12只小鼠。THZ1组静脉注射THZ1,THZ1+Colivelin TFA组静脉注射THZ1与信号转导与转录激活因子3(STAT3)激活剂Colivelin TFA静脉注射。比较各组心重/胫骨长度比(HW/TL)、心肥大指数(HWI)、左室肥大指数(LVWI)、左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)、左室前壁厚度(LVAWd)、左室后壁厚度(LVPWd)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、左室短轴缩短分数(LVFS)、左室舒张期容积(LVdVol)、左室收缩期容积(LVsVol)。实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-q PCR)或大白免疫(Western Blot)检测各组小鼠心肌组织中CDK7、STAT3、Tyr705磷酸化的STAT3(p-STAT3)表达。结果:与sham组比较,HFrEF组HW/TL、HWI、LVWI、LVEF、LVFS、LVAWd、LVPWd、LVEDD、LVESD、LVFS、LVdVol、LVsVol均明显增加(P<0.05),且CDK7、STAT3、p-STAT3的表达均明显增加(P<0.05)。与HFrEF组比较,THZ1组HW/TL、HWI、LVWI、LVEF、LVFS、LVAWd、LVPWd、LVEDD、LVESD、LVdVol、LVsVol均明显降低(P<0.05),且CDK7、STAT3、p-STAT3表达均被抑制(P<0.05)。与THZ1组比较,THZ1+Colivelin TFA组HW/TL、HWI、LVWI、LVEF、LVFS、LVAWd、LVPWd、LVEDD、LVESD、LVdVol、LVsVol的指标均增加(P<0.05)。结论:CDK7抑制剂THZ1通过抑制STAT3缓解心肌肥大并改善HFrEF小鼠的心脏功能。

微小RNA-374a-5p靶向调控SRCIN1及对骨肉瘤细胞迁移、侵袭的影响

目的探讨微小RNA-374a-5p(miR-374a-5p)对SRC激酶信号抑制剂1(SRCIN1)的靶向调控作用及对骨肉瘤(OS)细胞迁移、侵袭和Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测人正常成骨细胞hFOB 1.19及OS细胞(HOS、Saos-2、MG-63和U2OS)的miR-374a-5p水平。脂质体法向U2OS细胞转染miR-374a-5p抑制物(Inhibitor组)和无关对照序列(NC组),并设未转染细胞为对照组,qPCR、MTT比色法、划痕实验和Transwell小室实验检测miR-374a-5p水平、细胞增殖活力、划痕愈合率和穿膜细胞数,qPCR和Western blotting检测SRCIN1、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、Wnt1和β-catenin水平。通过生物信息学和双荧光素酶报告实验鉴定miR-374a-5p的靶基因。结果OS细胞的miR-374a-5p水平均高于hFOB 1.19细胞(P<0.05)。Inhibitor组转染24、48 h后的增殖活力均低于其余两组(P<0.05)。Inhibitor组的miR-374a-5p水平、划痕愈合率和穿膜细胞数分别为0.327±0.062、(30.893±4.287)%和(140.390±13.598)个,均低于对照组的1.021±0.116、(77.339±5.130)%和(363.922±24.411)个及NC组的1.028±0.142、(75.019±3.670)%和(351.381±19.872)个(P<0.05)。与其余两组相比,Inhibitor组的SRCIN1水平升高,而MMP-9、Wnt1和β-catenin水平降低(P<0.05)。在线TargetScan预测显示,miR-374a-5p能够与SRCIN1的3’端非翻译区结合,miR-374a-5p模拟物和野生型SRCIN1质粒共转染细胞的相对荧光强度较其他转染组合降低(P<0.05)。结论异常高水平的miR-374a-5p在OS中发挥致癌作用,miR-374a-5p可能通过靶向SRCIN1激活Wnt/β-catenin通路,进而促进OS细胞的迁移和侵袭,miR-374a-5p/SRCIN1/Wnt/β-catenin轴有望阐明OS的发病机制,为其抗肿瘤治疗提供新候选靶点。

Src激酶抑制剂对人肺癌顺铂耐药细胞A549/DDP多药耐药性的影响及机制

目的研究Src激酶抑制剂PP2对人肺癌顺铂耐药细胞A549/DDP多药耐药性的影响及机制。方法以5和10μmol.L-1Src激酶抑制剂PP2作用A549/DDP细胞24h后,应用Western blot考察肿瘤细胞Src磷酸化表达的变化,MTT法检测细胞的药物敏感性,流式细胞仪考察细胞P-gp表达的变化,Western blot及Real-time PCR考察肿瘤细胞MDR1蛋白及mRNA表达的变化。结果 Src激酶抑制剂PP2可下调A549/DDP细胞Src磷酸化表达,5和10μmol.L-1 Src激酶抑制剂PP2作用后,顺铂对A549/DDP细胞的药物敏感性分别提高了1.37和2.47倍,细胞P-gp表达分别为对照组的65.2%和46.4%,MDR1在蛋白水平表达显著降低,MDR1在mRNA水平的表达分别为对照组的50.24%(P<0.05)和37.6%(P<0.05)。结论 Src激酶抑制剂PP2可逆转A549/DDP细胞多药耐药性,其机制可能与降低细胞MDR1表达水平有关。

p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂对脓毒症大鼠多器官损伤的保护作用研究

目的 探讨脓毒症致多器官损伤的原因,以及p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂的保护作用和机制。方法 采用盲肠结扎穿刺术(CL P)制备脓毒症大鼠模型,治疗组采用术前给予p38MAPK抑制剂SB2 0 35 80灌胃。在不同时间点观察大鼠血清肿瘤坏死因子- α(TNF-α)和白细胞介素- 1β(IL- 1β)以及生化指标如丙氨酸转氨酶(AL T)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、肌酸磷酸激酶同工酶(CPK -MB)浓度的变化。结果 CL P术后大鼠血清TNF-α、IL -1β显著升高,AL T、BU N、Cr、CPK- MB也进行性升高;血清AL T、BU N、Cr、CPK -MB变化与TNFα、IL 1β呈显著正相关。应用SB2 0 35 80后,血清TNF-α、IL- 1浓度显著降低,同时AL T、BUN、Cr、CPK MB也降低。结论 TNF-α、IL- 1β的大量释放是脓毒症致多器官损伤的原因之一,通过调控p38MAPK信号转导通路可对脓毒症所致多器官损伤起保护作用。

ERK5信号通路介导流体剪切力对MC3T3-E1成骨细胞MMPs、TIMPs表达的影响

目的观察流体剪切力(fluid shear stress,FSS)作用下,MC3T3-E1成骨细胞中细胞基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)和基质金属蛋白酶抑制剂(tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMPs)的表达情况,并探讨ERK5信号通路在其中的作用。方法对MC3T3-E1成骨细胞进行不同的处理,分为正常组、XMD8-92组、FSS组和FSS+XMD8-92组,对FSS组施加12 dyn/cm^2流体剪切力,采用蛋白免疫印迹法分别检测P-ERK5、ERK5、MMPs和TIMPs蛋白水平的变化。结果生理强度(12 dyn/cm^2)的流体剪切力作用于MC3T3-E1成骨细胞45 min后能显著上调MMPs的表达,下调TIMPs的表达,但此效应可被ERK5高选择性抑制剂XMD8-92阻断。结论 ERK5信号通路调控流体剪切力对成骨细胞MMPs、TIMPs蛋白的表达。

Chk1激酶在恶性血液肿瘤中的研究进展

细胞周期检查点激酶1(Chk1)属于丝氨酸/苏氨酸蛋白质激酶,是一种细胞周期调节因子,控制细胞增殖,是DNA损伤后引起S/G 2期、G 2/M期阻滞的关键基因,为修复DNA损伤提供保障,具有重要的监视功能。Chk1在多种肿瘤组织中呈过表达,可通过特定分子信号通路参与部分肿瘤的发生发展;其表达水平的异常与血液肿瘤患者的治疗效果及预后密切相关,高表达Chk1在血液肿瘤细胞的浸润转移中具有重要意义,而Chk1抑制剂的出现为恶性血液肿瘤治疗提供了新的方向。

人类胞外信号调节激酶1的同源模建及其抑制剂的对接与结构改造

通过同源模建和分子动力学模拟构建了人类胞外信号调节激酶1(hERK1)的三维结构,并利用profile-3D和procheck方法评估了模型的合理性.对所得的结构使用分子对接程序Affinity和CDOCKER进行了两种抑制剂的对接.结果显示这两种抑制剂与酶的结合方式相似,它们均与残基K36,Q87之间存在氢键作用,二者取代基的不同导致了抑制能力的差别.基于对接结果分析,对已知抑制剂进行结构改造,得到了一个理论上结合能力更强的抑制剂.它在保持与K36和Q87之间氢键的同时,又与残基D93,K96,S135形成了四条氢键,显著提高了与酶的相互作用.对接相互作用能显著下降,MM-PBSA结合自由能降为负值,这些均体现了抑制能力的提高.本工作对于针对该酶的抑制剂设计和相关疾病的新药开发具有理论指导价值.

ERK在NGF诱导PC12细胞分化中的作用

目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK)在NGF诱导的PC12细胞分化中的作用机制。方法以NGF处理PC12细胞建立分化模型,运用免疫印迹检测不同浓度不同作用时间时NGF对ERK1/2蛋白和磷酸化ERK1/2蛋白水平的影响,并观察MAPK/ERK激酶(MEK)抑制剂U0126对NGF诱导的细胞形态学改变的影响。结果ERK1/2蛋白的磷酸化呈现NGF剂量和时间依赖性。NGF作用细胞5min即可观察到明显的ERK1/2蛋白磷酸化,持续1h左右,2h时降低到初始水平,而细胞形态的改变出现在NGF作用12h以后。倒置相差显微镜观察可见PC12细胞分化的程度与ERK1/2活化持续的时间正相关,U0126可完全即时抑制ERK1/2的活化,而ERK1/2活化的抑制可完全阻断NGF诱导的PC12细胞分化。结论ERK1/2的活化是PC12细胞发生分化的必需事件,其活化时间的长短对分化具有决定作用。

HB-EGF对HSC-T6细胞Ras/ERK通路的激活及对MMP-2、TIMP-1表达的影响

目的观察肝素结合性表皮生长因子样生长因子(HB-EGF)激活肝星状细胞(HSC)过程中Ras/ERK信号通路的变化和对金属基质蛋白酶(MMP)及其抑制物的影响。方法传代培养HSC-T6细胞,分空白对照组、HB-EGF处理组(20,40,80ng/mL),采用QRT-PCR法检测MMP-2、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)及表皮生长因子受体(EGFR)mRNA的表达,并确定HB-EGF刺激HSC-T6Ras/ERK通路(ERK1、ERK2、P38MAPK)活化的最佳浓度及最佳时间,检测该通路活化情况。结果 QRT-PCR检测提示,MMP-2的表达随HB-EGF干预时间的延长增加,TIMP-1的表达随干预时间的延长递减;40ng/mL HB-EGF培养HSC-T6 48h后,EGFR mRNA的表达较空白对照组明显上调(P<0.05);选择40ng/mL HB-EGF培养48h为最佳刺激时间与浓度,该处理组ERK1mRNA的表达较空白对照组明显上调(P<0.05),但ERK2、P38MAPK的变化无统计学意义;Western-blot检测提示该处理组ERK1蛋白的表达较空白对照组上调(P<0.05)。结论HB-EGF可影响HSC-T6的MMP-2、TIMP-1的表达;HB-EGF通过促进HSC-T6表达EGFR、ERK1,有效激活细胞内Ras/ERK信号通路。

nm23-H_1基因转染前后人肺癌细胞中PKC转位的研究

目的 探讨nm2 3 H1转染和蛋白激酶C(PKC)特异抑制剂CalphostinC对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981细胞PKC信号转导通路的作用 ,以及nm2 3 H1基因对PKC激活转位的影响。方法 应用激光扫描共聚焦显微镜观察nm 2 3 H1基因转染前后和CalphostinC处理转基因细胞株L9981 nm2 3 H1前后PKC在不同的亚细胞区域的定位情况。结果 ( 1)原代细胞株L9981和空载体细胞株L9981 pLXSN中PKC α、PKC βⅡ主要位于胞核及核周 ,处于激活状态 ;转染nm 2 3 H1基因后的人肺癌细胞株L9981 nm2 3 H1中PKC α、PKC βⅡ主要位于胞浆 ,处于未激活状态。 ( 2 )CalphostinC作用后所有细胞中的PKC均主要位于胞浆中 ,处于未激活状态。结论 ( 1)nm2 3 H1基因可使L9981细胞株中PKC从胞核向胞浆转位 ,从而抑制PKC信号转导。 ( 2 )CalphostinC可使L9981、L9981 pLXSN细胞株中PKC从胞核向胞浆转位 ,从而抑制PKC信号转导。

凋亡信号调节激酶-1抑制剂联合血管紧张素转换酶抑制剂对5/6肾切除大鼠肾保护的研究

目的 观察凋亡信号调节激酶-1抑制剂（ASK-1I）联合血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）对5/6肾切除大鼠的肾保护作用.方法 48只5/6肾切除大鼠饲养8周后行肾活检后平均分4组：（1）对照组;（2） ASK-1抑制剂组;（3）ACEI组;（4）联合组.0、8、12周分别检测各组大鼠安静状态下尾动脉收缩压、尿微量白蛋白肌酐比值（ACR）、血肌酐.使用CKD-EPI公式计算各组肌酐清除率（Ccr）水平.8、12周肾组织制作病理片测定肾小球硬化指数（GSI）.结果 所有大鼠8周后均形成高血压、蛋白尿、肾小球硬化和肌酐升高.12周时ACEI组血压较对照下降明显（P＜0.05）,ACEI组及联合组的ACR的增长率较对照组明显下降[分别为（57.8±24.4）％、（50.2±27.5）％、（244.9±69.4）％,P＜0.05],ASK-1抑制剂组及联合用药组的肌酐增长率较对照组下降[分别为（19.1±17.5）％、（22.3±17.7）％、（89.8±24.7）％,P＜0.05],同时联合组相较于其他组可有效逆转肾小球硬化（P＜0.05）.结论 ASK-1I联合ACEI能更有效的降血压,降低蛋白尿及硬化指数,从而更有效的保护肾功能.