爪蟾卵母细胞固醇调控通路的建立及姜黄素的作用

[目的]在爪蟾卵母细胞中建立人类SCAP/SREBP固醇调控系统,利用此系统研究姜黄素对SCAP/SREBP调控通路的作用。[方法]构建带有绿色荧光报告蛋白基因的PLXRN-4SRE-fpa质粒,将构建质粒和其他几种质粒分别提取混和成实验组质粒和对照组质粒,通过微注射的方法分别共注射到Ⅴ、Ⅵ爪蟾卵母细胞核内,与不同浓度的姜黄素共孵育3天,使用荧光定量PCR检测荧光表达量。[结果]相同浓度的姜黄素对注射含有固醇调节元件质粒的卵母细胞荧光表达量要明显高于不含相应元件的质粒。[结论]构建的质粒pLXRN-4SRE-fPA能在爪蟾卵母细胞中有效地应答SCAP、SREBP调控因子;通过影响SCAP/SREBP调控通路调节SRE-1下游基因的表达可能是姜黄素调脂作用的机理之一;利用核内共注射的方法在爪蟾卵母细胞中建立的SCAP/SREBP调控系统可作为SCAP配体类药物快速筛选和作用机制研究的细胞模型。

角鲨烯对HepG2细胞LDLR表达的影响及机制初探

目的研究角鲨烯对HepG2细胞低密度脂蛋白受体(LDLR)表达的影响,并探讨其降胆固醇的机制。方法MTT法检测不同浓度角鲨烯对HepG2细胞增殖活性的影响;倒置荧光显微镜和流式细胞术检测不同浓度角鲨烯对HepG2细胞内源性LDLR表达活性的影响;FRET技术检测不同浓度角鲨烯对SREBP通路中关键蛋白分子SCAP与Insig2相互作用的影响。结果角鲨烯能明显抑制HepG2细胞增殖活性,且呈浓度依赖性;倒置荧光显微镜和流式细胞术结果均表明,与对照组相比,角鲨烯能增强HepG2细胞LDLR的表达活性;FRET检测结果显示,与模型组相比,角鲨烯组YFP荧光值降低,而在5~25μmol·L^(-1)范围内,随角鲨烯浓度的增高,YFP荧光值降低。结论角鲨烯可能通过抑制SCAP/SREBP信号调控通路中关键蛋白分子SCAP与Insig2的相互作用,上调HepG2细胞LDLR的表达,是具有潜在价值的降胆固醇新药。