科尔沁牛不同组织脂肪酸含量与SCD和SREBP-1基因表达相关分析

文章旨在研究科尔沁牛不同组织脂肪酸含量及SCD、SREBP-1基因表达量和参与脂肪酸代谢的调控机制。试验采用气相色谱-质谱联用法和实时荧光定量PCR方法分别检测科尔沁牛的肾周脂肪、肠周脂肪、肩肌和背最长肌等4个不同组织的脂肪酸含量及SCD和SREBP-1基因的表达量。结果表明:(1)SFA中,肾周脂肪C14:0、C16:0、C18:0含量显著高于背最长肌(P<0.05)。MUFA中,背最长肌C16:1和总MUFA含量高于肾周脂肪,但无显著差异(P>0.05)。背最长肌的各PUFA、总PUFA和UFA含量均显著高于肾周脂肪(P<0.05)。(2)SCD基因在科尔沁牛背最长肌中的表达量高于肾周脂肪组织,与SREBP-1基因的表达趋势相似,但无显著差异(P>0.05)。SREBP-1基因在科尔沁牛背最长肌中的表达量显著高于肾周脂肪组织(P<0.05)。以上结果表明,科尔沁牛背最长肌的营养价值与肉质较肾周脂肪更高、更有利于健康。同时,SREBP-1基因在参与SCD基因的脂肪沉积调控过程中,协同调节肌内脂肪代谢,进而影响牛肉脂肪酸组成及风味。

SREBP-1基因在湘西黄牛不同组织中的发育性表达研究

研究旨在比较分析固醇调节元件结合蛋白-1(Sterol regulatory element-binding protein 1,SREBP-1)基因在湘西黄牛不同组织中的发育性表达规律,以探讨SREBP-1基因与肉牛脂肪代谢的关系。选取湖南德农牧业集团有限公司国家级保种场不同月龄(6月龄、18月龄、30月龄)湘西黄牛各4头,利用实时荧光定量PCR检测肝脏、背最长肌、皮下和腹腔脂肪组织SREBP-1基因的相对表达量。结果表明:①SREBP-1基因在湘西黄牛肝脏、背最长肌、皮下和腹腔脂肪的4个部位中的表达量随月龄增加依次显著增加(P<0.01);②在6月龄时,皮下脂肪SREBP-1基因的表达量显著高于肝脏与腹腔脂肪(P<0.05);③18月龄时,SREBP-1基因在肝脏中的表达量显著高于背最长肌与腹腔脂肪(P<0.05);④30月龄时,SREBP-1基因在肝脏组织中的表达量显著高于其他3个组织(P<0.05),在皮下脂肪中的表达量显著高于背最长肌与腹腔脂肪(P<0.05)。由此可见,SREBP-1基因在湘西黄牛不同部位脂肪组织和肌肉组织中均有表达,且其表达随月龄与部位的不同而不同,存在月龄和部位的差异性。

红鳍东方鲀SREBP-1和SREBP-2基因克隆及表达分析

为了研究红鳍东方鲀SREBP-1和SREBP-2基因的功能及在脂肪代谢中的分子机制,从红鳍东方鲀脂肪组织提取总RNA,反转录获得c DNA模板,利用设计的引物PCR扩增获得SREBP-1和SREBP-2开放阅读框(ORF),SREBP-1基因ORF区的c DNA序列长度为3 330 bp,编码1 109个氨基酸,SREBP-2基因ORF区的c DNA序列为3 444 bp,编码1 147个氨基酸。实时荧光定量PCR检测SREBP-1基因在红鳍东方鲀不同组织中的表达特征,结果表明,SREBP-1在脑组织中表达丰度最高,其次为眼、脂肪组织、肠、鳃、脾脏、心脏及肝脏,在肌肉中表达丰度最低。将SREBP-1连接到原核表达载体p ET32a上,利用IPTG对重组质粒p ET32a-SREBP-1在大肠杆菌Rosetta(DE3)进行诱导表达,SDS-PAGE电泳显示在141 k Da处有特异性的条带出现。

SREBP-1基因表达对血清生化指标的效应分析

为丰富SREBP-1基因的功能研究并更好地选育优质鸭种奠定理论基础。本研究以鸭为试验材料,运用q PCR技术研究SREBP-1基因组织表达规律,并分析其与所测血清生化指标间的关联性。结果表明,SREBP-1基因在鸭9个组织中存在差异性表达。其中,在腹脂中表达最高,皮脂和肾次之,在肝、脾、小肠、肌胃、心及肺中均有少量表达;SREBP-1基因与甘油三酯、低密度胆固醇、总胆固醇,总蛋白及低密度脂蛋白显著或极显著正相关,与高密度胆固醇显著负相关。推测SREBP-1基因对鸭脂质代谢具有调控作用。

郏县红牛SREBP-1c基因84 bp缺失突变的检测及其对6个生长性状的影响

旨在研究牛SREBP-1c基因内含子7区域84bp缺失的遗传多态性及其对生长性状的影响。本试验以中国地方品种郏县红牛共计441头个体为实验动物,通过DNA测序技术和琼脂糖凝胶电泳方法检测该区域缺失突变的多态性。结果发现,在该突变位点检测到2种基因型:WW和WD型,等位基因W和D频率分别为0.8651和0.1349。He、Ne和PIC值都很低,说明在本突变位点遗传多态性不够丰富。该突变位点处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。该位点的多态性与郏县红牛6个生长性状指标关联分析显示,郏县红牛WD基因型个体在12、18、24月龄的体质量和胸围显著高于WW基因型个体(P<0.01或P<0.05),基因型WD个体在18、24月龄的体斜长显著高于WW基因型个体(P<0.05),基因型WD个体在18月龄的平均日增体质量显著高于WW基因型个体(P<0.01)。初步认为WD型是提高黄牛体质量和体尺指标性状的有利基因型。本研究结果表明,黄牛SREBP-1c基因内含子7区域84bp缺失位点可作为郏县红牛生长性状的潜在分子育种标记,具有很大的研究价值。

SREBP-1c基因过表达细胞模型的构建及对HepG2细胞脂滴含量的影响

目的:构建SREBP-1c过表达HepG2细胞模型并观察其对脂滴含量的影响,为进一步深入研究肝癌脂滴代谢异常机制提供细胞模型。方法:采用DNA重组技术,将SREBP-1c基因克隆至慢病毒表达载体p Lenti 6.3/V5中,并用脂质体介导法将慢病毒包装系统和带目的基因的质粒p Lenti6.3-SREBP-1c共转染293T细胞,收集上清,感染HepG2细胞。通过Real-time PCR和Western blot对细胞株进行鉴定。采用免疫荧光检测HepG2细胞中脂滴的数量、大小及细胞内甘油三酯的含量。结果:成功构建了过表达SREBP-1c基因的慢病毒载体p Lenti6.3-SREBP-1c,转染后HepG2细胞中可见明显的SREBP-1c蛋白表达。Real-time PCR检测结果显示转染SREBP-1c基因的HepG2细胞中SREBP-1c m RNA水平较对照组升高了约11.4倍。Western blot结果显示SREBP-1c蛋白水平较对照组提高3.2倍。免疫荧光显示过表达SREBP-1c能够明显增加HepG2细胞内脂滴的数量和大小。细胞内甘油三酯定量结果显示甘油三酯含量较对照组明显升高(P<0.01)。结论:成功构建了SREBP-1c基因过表达的重组慢病毒载体及其稳定转染细胞株。高表达SREBP-1c的HepG2细胞增加了细胞中脂滴的数量、大小和甘油三酯的含量,可用于从脂滴代谢方面对肝癌发病分子机制的研究。