肉桂醛调节AMPK/SREBP1c信号通路对非酒精性脂肪性肝炎小鼠肝损伤的影响

【目的】探讨肉桂醛通过调节腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/胆固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP1c)信号通路对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)小鼠肝损伤的影响。【方法】实验随机分为正常组,模型组,肉桂醛低、中、高剂量组及肉桂醛高剂量+Compound C(AMPK抑制剂)组,每组15只小鼠。除正常组,其他各组给予高脂饲料喂养构建NASH模型。干预治疗后,观察肝组织病理形态变化,检测血清生化指标[丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)],肝组织氧化应激指标[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)],AMPK/SREBP1c通路蛋白[磷酸化AMPK(p-AMPK)、AMPK、SREBP1c、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、磷酸化ACC(p-ACC)、肉毒碱棕榈酰转移酶1(CPT1)、硬脂酰辅酶A去饱和酶1(Scd1)]表达,及CPT1α、长链酯酰辅酶A脱氢酶(Lcad)、ACC1、脂肪酸合成酶(FAS)的mRNA表达水平。【结果】与正常组比较,模型组肝脏脂肪变性,脂质沉积和纤维化间质增多,ALT、AST、TG、TC,MDA含量,SREBP1c、Scd1蛋白表达,ACC1、FAS mRNA表达水平显著升高,SOD、GSH活性,p-AMPK、AMPK、p-ACC、ACC、CPT1蛋白表达,CPT1α、Lcad m RNA表达水平显著降低(P<0.05);与模型组比较,肉桂醛低、中、高剂量组脂质沉积和纤维化间质减少,ALT、AST、TG、TC、MDA含量,SREBP1c、Scd1蛋白表达,ACC1、FAS mRNA表达水平显著降低,SOD、GSH活性,p-AMPK、AMPK、p-ACC、ACC、CPT1蛋白表达,CPT1α、Lcad mRNA表达水平显著升高(P<0.05),且呈剂量依赖性;与肉桂醛高剂量组比较,肉桂醛高剂量+Compound C组上述指标均被逆转(P<0.05)。【结论】肉桂醛可能通过调控AMPK/SREBP1c通路,抑制氧化应激,改善肝脏脂肪变性,减轻NASH小鼠肝损伤。

糖尿病肾病大鼠TGF-β1调控SREBP1活化的作用

目的 探讨糖尿病肾病(DKD)大鼠转化生子因子(TGF)-β1调控胆固醇调节元件结合蛋白(SREBP)1活化的作用。方法 TGF-β1 (2 ng/ml)和(或)SCAP抑制剂(Fatostatin)、S1P抑制剂(AEBSF)、PI3K抑制剂(LY294002,Wortmainin)、Akt抑制剂(Akt inhibitorⅧ)、mTOR抑制剂(rapamycin)、TβR1抑制剂(SB431542)处理培养的大鼠肾小球系膜细胞(MC),免疫荧光和Western印迹检测SREBP1的核移位和蛋白表达水平;Western印迹检测FN和CTGF蛋白表达;p3TP-Lux荧光素酶报告质粒和pCMV-β-gal或SREBP1 siRNA转染至MC或Smad3 WT/KO MC,TGF-β1处理24 h后检测p3TP-Lux荧光素酶活性。结果 与AdLacZ组大鼠肾组织中SREBP1蛋白水平相比,AdTGF-β1组明显增加(P<0.05)。与Con组MC中SREBP1蛋白的核表达荧光强度相比,TGF-β1组明显增加(P<0.05),与TGF-β1组MC中SREBP1蛋白的核表达荧光强度相比,T+fato组明显降低(P<0.05)。与Con组mSREBP1蛋白表达相比,TGF-β1组明显升高(P<0.05)。与TGF-β1组mSREBP1蛋白表达相比,T+fato组和T+AEBSF组均明显降低(P<0.01)。与Con组GFP荧光强度相比,TGF-β1组明显增加(P<0.05)。与TGF-β1组GFP荧光强度相比,T+fato组明显降低(P<0.05)。与TGF-β1组mSREBP1表达相比,T+LY组、T+Wort组、T+Akti组和T+rapa组均明显降低(均P<0.05)。与TGF-β1组相比,T+RIinh组明显抑制了mSREBP1蛋白的表达(P<0.01)。与ConB组mSREBP1表达相比,TGF-β1B组明显升高。ConB组Smad3 KO MC的p3TPLux荧光素酶活性与TGF-β1B组有显著差异(P<0.05)。TGF-β1A组和TGF-β1B组mSREBP1蛋白表达无明显差异(P>0.05)。与ConB组p3TP-Lux荧光素酶活性相比,TGF-β1D组明显增加(P<0.01);与TGF-β1D组p3TP-Lux荧光素酶活性相比,T+fatoA组明显抑制(P<0.01)。TGF-β1 E组p3TP-Lux荧光素酶活性明显高于TGF-β1 F组(P<0.05)。与ConD组SREBP1下游促纤维化蛋白CTGF和FN蛋白相比,TGF-β1D组均明显升高(P<0.05);与TGF-β1D组SREBP1下游促纤维化蛋白CTGF和FN蛋白相比,T+fatoA组则明显降低(P<0.05)。结论 TGF-β1诱导SREBP1活化引起MC的脂质沉积是DKD发生的重要原因。然而TGF-β1活化SREBP1的作用机制则与SCAP/S1P、PI3K/Akt和TβR1密切相关。然而,TGF-β1的促纤维化作用又依赖SREBP1的活化诱导脂质沉积。因此SREBP1是防治DKD的新靶点。

固醇调节元件结合蛋白1与多囊卵巢综合征关系的研究进展

多囊卵巢综合征(PCOS)病因复杂,临床表现多样,常表现有糖脂代谢异常、胰岛素抵抗(IR)、高雄激素血症(HA)以及其他典型症状。多项研究表明,固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)的表达与PCOS关系密切,与亚洲PCOS遗传易感性显著相关。SREBP1作为调控血脂和糖代谢的关键转录因子,被发现与IR相关,可被认为是引起IR的因素之一。雄激素能够参与调节与SREBP(SREBP1和SREBP2)有关的水解基因并使SREBP1表达增加,因此,SREBP1与PCOS有千丝万缕的关系。实验表明,运用药物或电针能够调控SREBP1进而调节血脂水平和IR症状,这为PCOS的治疗提供了新的思路。

白虎加人参汤对2型糖尿病大鼠脂代谢的影响

目的:研究白虎加人参汤对2型糖尿病(T2DM)模型大鼠腺苷一磷酸活化蛋白激酶(AMPK)/固醇反应元件结合蛋白-1(SREBP1)信号通路的影响。方法:通过高脂饲料联合链脲佐菌素(STZ)注射建立T2DM模型大鼠,并用不同剂量的白虎加人参汤灌胃。通过检测各组大鼠造模给药后血清中相关生化指标和肝组织病理学变化,评估白虎加人参汤对T2DM模型大鼠的治疗作用;然后,运用定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质免疫分析法检测白虎加人参汤干预后,各组大鼠肝组织中AMPK/SREBP1信号通路关键因子腺苷一磷酸活化蛋白激酶(AMPK)、乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1)、脂肪酸合成酶(FASN)、ATP柠檬酸裂解酶(ACLY)基因及蛋白水平,初步探究白虎加人参汤治疗T2DM模型大鼠的作用机制。结果:白虎加人参汤可明显降低T2DM模型大鼠血清中空腹血糖(FBG)、口服葡萄糖耐量试验(OGTT)、谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)以及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,同时改善T2DM模型大鼠肝组织病理学变化。qPCR及蛋白质免疫分析结果显示,白虎加人参汤可显著降低T2DM模型大鼠肝组织中AMPK基因与蛋白水平,上调SREBP1、ACC1、ACLY、FASN基因与蛋白水平。结论:白虎加人参汤对T2DM模型大鼠具有治疗作用,其作用机制可能与调节肝组织中AMPK/SREBP1信号通路,改善脂代谢有关。

基于STAT3/SREBP1介导的脂质代谢探讨乌梅丸防治结肠炎相关结直肠癌作用机制

目的:探讨乌梅丸防治结肠炎相关结直肠癌(CAC)的潜在作用机制。方法:36只C57BL/6J小鼠随机分为空白组、模型组、乌梅丸组。通过偶氮甲烷(AOM)和葡聚糖硫酸钠(DSS)联合应用,建立CAC动物模型。第一循环DSS结束1周后,乌梅丸组小鼠予乌梅丸(6 g·kg^(-1)·d^(-1))灌胃,空白组、模型组小鼠给予等体积0.9%氯化钠溶液灌胃,连续给药8周。在第10周结束时计算小鼠存活率、肿瘤数量、结肠长度等;HE染色观察结肠组织病理学改变;q-PCR检测小鼠结肠组织中白介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF-α)mRNA水平;Western Blot检测固醇调节元件结合蛋白-1(SREBP1)信号转导和转录激活因子3(STAT3)及p-STAT3的表达;使用超高效液相色谱和串联质谱(UPLC-MS/MS)检测小鼠血清脂质代谢物,使用多变量统计工具筛选血清代谢物的变化。结果:乌梅丸组可提高CAC小鼠存活率,减少肿瘤数量(P<0.05),缩小肿瘤体积,改善结肠病理损伤,降低CAC小鼠结肠组织中炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α的水平(P<0.01,P<0.05);乌梅丸能显著下调SREBP1和p-STAT3的表达(P<0.05);靶向脂质代谢组学显示29种与CAC相关脂质代谢物能够被乌梅丸所回调。结论:乌梅丸能有效防治CAC,其机制可能与STAT3/SREBP1介导的脂质代谢相关。

DACH1、FASN和SREBP1在子宫内膜癌中的表达

目的探讨细胞命运决定因子(DACH1)蛋白、脂肪酸合成酶(FASN)、固醇元件结合蛋白1(SREBP1)在子宫内膜癌中的表达及与临床病理参数的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测DACH1、FASN、SREBP1在子宫内膜癌、不典型增生子宫内膜、复杂性子宫内膜、正常子宫内膜中的表达。结果 DACH1在子宫内膜癌中的表达显著低于非癌组,FASN及SREBP1在子宫内膜癌中的表达均显著高于非癌组。DACH1、FASN、SREBP1在子宫内膜癌中的表达率分别为40.0%、61.7%、65.0%,DACH1、FASN、SREBP1均与子宫内膜癌分化程度有关。DACH1与手术病理分期和病理类型有关,SREBP1与年龄有关。FASN、SREBP1与DACH1的表达呈负相关(r=-0.41,r=-0.40)。单因素分析结果显示,DACH1蛋白阳性组子宫内膜癌患者生存率高于DACH1蛋白阴性组(P<0.05);FASN及SREBP1蛋白阳性组子宫内膜癌患者生存率分别低于FASN蛋白及SREBP1蛋白阴性组(P<0.01,P<0.04)。结论 DACH1、FASN、SREBP1有可能成为子宫内膜癌判断预后的新指标。

转录因子互作调控鸡脂肪细胞分化研究

哺乳动物的CAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)、CAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ)、过氧化物酶体增殖物激活型受体γ(PPARγ)和胆固醇调节元件结合蛋白质1(SREBP1)是脂肪细胞分化调控的重要因子,鸟类脂肪细胞分化的分子调控网络目前还不清楚。本研究利用荧光素酶报告基因检测发现,C/EBPα、C/EBPβ和SREBP1过表达促进鸡PPARγ基因启动子活性(P<0.05);C/EBPβ和SREBP1过表达抑制鸡C/EBPα基因启动子活性(P<0.05);PPARγ过表达促进鸡FAS基因启动子的活性(P<0.05),并抑制鸡LPL和AFABP基因启动子活性(P<0.05),但对鸡C/EBPα基因启动子活性没有显著影响(P>0.05)。本研究结果为进一步阐明鸡脂肪细胞分化的转录调控网络奠定了基础。

营养基因组学、瘤胃衍生生物活性脂肪酸及乳脂合成调节的研究进展

乳腺中乳脂合成的研究一直是热门的领域,生物活性脂肪酸在脂类合成调节中有显著的作用。生化还原理论表明,日粮引起的奶牛乳脂低下(MFD)是由于瘤胃的生化还原产生的特异脂肪酸使得乳腺乳脂合成受到抑制而引起的。影响乳脂合成最重要的脂肪酸是t10,c12CLA,它的作用非常具有特征性,包括效应关系的剂量效应。在MFD期,脂肪的生产能力及乳腺关键的脂肪生成调节基因都是协同下调的。研究结果已经证明,在反刍动物和啮齿类动物中SREBF1及Spot 14是脂肪生产信号通路中的生化还原中间应答物。MFD及瘤胃衍生特定生物活性脂肪酸对其的调节是现在动物营养研究中营养基因组学的一个成功的例子,并在动物生产中有潜在的应用。

芹菜素对肥胖型小鼠脂肪组织AMPK信号通路的作用机制

目的：研究芹菜素对肥胖型db/db小鼠脂肪紊乱的作用及机制。方法：8周龄雄性db/db小鼠随机分为模型组、芹菜素组（50 mg·kg^-1·d^-1）,雄性C57BL/6J小鼠为正常组,药物干预4周后,检测小鼠体质量、空腹血糖（fasting blood glucose,FBG）,总胆固醇（total cholesterol,CHO）,甘油三酯（total triglyceride,TG）,游离脂肪酸（free fatty acids,FFA）,天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）,血肌酐（serum creatinine,SCr）,血尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）;脂肪组织苏木素-伊红染色（hematoxylin-eosin staining,HE）观察脂肪细胞病理变化;实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测胆固醇应答元件结合蛋白1c（sterol regulatory element-binding protein 1c,SREBP1c）,脂肪酸合成酶（fatty acid synthetase,FAS）,过氧化物增殖物激活受体α（peroxisome proliferator activated receptorα,PPARα）基因表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测腺苷酸活化蛋白激酶（phosphorylated adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK）和乙酰CoA羧化酶（acetyl-CoA carboxylase,ACC）磷酸化水平。结果：与模型组比较,芹菜素组小鼠体质量,FBG,CHO,TG,FFA明显降低（P〈0.05,P〈0.01）;HE染色脂肪细胞变小,脂质沉积减低;脂肪组织SREBP1c,FAS mRNA表达降低（P〈0.01）,p-AMPKα,p-ACC蛋白表达升高（P〈0.05,P〈0.01）。结论：芹菜素可以改善db/db小鼠脂肪代谢紊乱,可能是通过上调脂肪组织AMPK,ACC磷酸化水平,下调SREBP1c,FAS mRNA表达实现。