剪接因子SRp40调控糖皮质激素受体α/β的表达及其对肾病综合征患者糖皮质激素疗效的影响

目的:明确肾病综合征患者(NS)外周血单个核细胞(PBMC)糖皮质激素受体α和β(GRα和GRβ)与剪接因子SRp40mRNA的表达水平,探讨剪接因子对糖皮质激素受体pre-mRNA可变剪接的调控作用,同时查明糖皮质激素受体亚型的差异表达对肾病综合征患者糖皮质激素治疗效应之间的影响。方法:临床收集健康志愿者20例、NS患者46例,根据患者对糖皮质激素(GC)治疗效应,将NS患者分为GC敏感组(24例)和GC抵抗组(22例)。收集受试者外周静脉血6 m L,采用实时定量PCR(Quantitative Real-time PCR)方法检测健康志愿者及GC敏感组与GC抵抗组患者治疗前后PBMC中GRα、GRβ及剪接因子SRp40的mRNA表达量;分析GR及SRp变化的相关性及其对NS临床疗效的影响。结果:NS患者与健康对照组PBMC中均有GRα、GRβmRNA表达,其中GRα为主要GR受体亚型;GRα、GRβmRNA的表达水平在GC抵抗组与GC敏感组未见显著差异,但GC抵抗组SRp40的mRNA表达量明显高于GC敏感组及正常对照组(P=0.035);糖皮质激素治疗后GC抵抗组GRβ的表达显著增加(P<0.001),但GRαmRNA表达量在两组患者间无统计学意义;线性回归分析显示GRβmRNA表达量与SRp40 mRNA呈显著正相关(P=0.006)。结论:SRp40高表达可能通过调控可变剪接、诱导GRβ高表达,参与NS患者GC抵抗的发生,NS患者外周血PBMC中GRβ及SRp40的表达水平可能成为NS患者激素敏感性的预测因子。

酿酒酵母SRP40基因对细胞耐受性影响的研究

【目的】本论文研究酿酒酵母srp40^(39)突变基因对酵母细胞异丁醇耐受性的影响。【方法】首先,以酿酒酵母野生型W303-1A和突变株EMS39染色体DNA为模板克隆野生型SRP40基因和srp40^(39)突变基因;然后,将野生型SRP40基因和srp40^(39)突变基因分别连接到质粒YCplac22上,构建质粒YCplac22-SRP40和YCplac22-srp40^(39)。将质粒YCplac22-SRP40、YCplac22-srp40^(39)以及YCplac22空质粒分别转化入野生型酿酒酵母W303-1A中,分别得到W303-1A-SRP40工程菌、W303-1A-srp40^(39)工程菌和W303-1A-control工程菌。将3株工程菌分别置于含1.0%异丁醇、1.3%异丁醇、8.0%乙醇和0.5%异戊醇的CM培养基中进行发酵,测定细胞密度(OD_(600))和生长情况,并计算2–10 h的比生长速率(μ)。将3株工程菌于55°C热激4 min后做稀释实验(dilution),观察它们在平板上的生长情况。最后,对野生型SRP40基因、srp40^(39)突变基因的氨基酸序列进行生物信息学分析。【结果】在不含异丁醇(0%异丁醇)的培养基中,3株工程菌无明显差异。在含1.0%异丁醇和1.3%异丁醇的CM培养基中,发酵24 h工程菌W303-1A-srp40^(39)的细胞密度分别是工程菌W303-1A-SRP40的1.12倍和1.06倍,是工程菌W303-1A-control的1.10倍和1.10倍;工程菌W303-1A-srp40^(39)的比生长速率(μ)分别是工程菌W303-1A-SRP40的1.07倍和1.10倍,是对照菌W303-1A-control的1.10倍和1.10倍。在含8.0%乙醇和0.5%异戊醇的CM培养基中,发酵24h工程菌W303-1A-srp40^(39)的细胞密度分别是工程菌W303-1A-SRP40的1.12倍和1.01倍,是对照菌W303-1A-control的1.17倍和1.07倍;工程菌W303-1A-srp40^(39)的比生长速率(μ)分别是工程菌W303-1A-SRP40的1.37倍和1.07倍,是对照菌W303-1A-control的1.31倍和1.09倍。工程菌W303-1A-srp40^(39)在热激后生长仍优于其他2株菌。生物信息学分析发现,Srp40^(39)蛋白与硅藻的胸膜蛋白-1具有相似的结构。【结论】本研究发现酿酒酵母srp40^(39)突变基因能够提升细胞的异丁醇耐受性,此外对提升细胞的乙醇耐受性、异戊醇耐受性和耐热性也有一定的作用。同时,我们发现Srp40^(39)蛋白与硅藻的胸膜蛋白-1具有相似的结构,说明其可能具有胸膜蛋白-1的功能,推测该蛋白在细胞壁维持方面有作用。这些研究将为提高酿酒酵母对乙醇、异丁醇、异戊醇和高温等的抗逆性提供新思路。

流感病毒A/Brevig Mission/1918/1(H1N1)片段7和8 mRNAs的低效拼接提高NS1蛋白表达量的研究

A型流感病毒编码的2个片段(7和8)产生的mRNAs拼接后,可潜在地改变NS1蛋白和NS2蛋白及M1蛋白和蛋白M2的比例。本试验研究了A型流感病毒自然发生的序列多态性对其mRNAs拼接的影响,通过对A/Brevig Mission/1918/1(H1N1)和A/Netherlands/178/95(H3N2)及多个H5N1禽流感病毒株片段7和8mRNAs拼接效率进行比较,发现与其他毒株的片段7和8mRNAs相比,A/Brevig Mission/1918/1(H1N1)片段7和8 mRNAs拼接效率低,导致更高水平的NS1功能蛋白的产生,可能有利于A/Brevig Mission/1918/1(H1N1)的致病性。结果还显示,A/Brevig Mission/1918/1(H1N1)片段8 mRNAs对SR蛋白过表达的应答与A/Netherlands/178/95(H3N2)不同。