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中华蜜蜂SRP9基因的克隆、序列分析及原核表达
1
作者
吴鹏杰
金红岩
+6 位作者
徐进
武江利
李雨时
郭岳琴
姚军
徐书法
吴杰
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第12期1332-1339,共8页
【目的】探究中华蜜蜂Apis cerana cerana信号识别颗粒9(signal recognition particle 9,SRP9)基因的序列,获得纯化的重组蛋白,为探究其蛋白功能奠定基础。【方法】利用RT-PCR方法,以中华蜜蜂的c DNA为模板扩增中华蜜蜂SRP9基因编码区,...
【目的】探究中华蜜蜂Apis cerana cerana信号识别颗粒9(signal recognition particle 9,SRP9)基因的序列,获得纯化的重组蛋白,为探究其蛋白功能奠定基础。【方法】利用RT-PCR方法,以中华蜜蜂的c DNA为模板扩增中华蜜蜂SRP9基因编码区,并通过软件MEGA5.1构建系统发育树,运用Predice Protein和SWISS-MODEL等软件预测分析蛋白结构;用大肠杆菌Escherichia coli表达系统进行原核表达;采用尿素洗脱法进行重组蛋白纯化。【结果】扩增得到的中华蜜蜂SRP9基因编码区长为237 bp,命名为Acc SRP9。该基因编码78个氨基酸,编码蛋白的相对分子量为9.36 k D,等电点为9.17。系统进化树分析表明,Acc SRP9与西方蜜蜂Apis mellifera的SRP9和小蜜蜂Apis florea的SRP9聚成一支。蛋白质二级结构预测发现其含有2个α-螺旋区和3个β-折叠区。利用同源建模获得蛋白质的三维结构。将Acc SRP9连入表达载体p GEX-6P-1并在BL21(DE3)中进行原核表达,发现该重组蛋白表达在包涵体中,经蛋白纯化,最终获得了N端带GST标签的重组蛋白p GEX-6P-1-SRP9。【结论】本研究成功克隆了中华蜜蜂SRP9基因Acc SRP9,对其序列进行了分析,并获得了带有标签的重组蛋白,为进一步研究该基因的功能提供参考和材料。
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关键词
中华蜜蜂
srp9
基因克隆
序列分析
结构预测
原核表达
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职称材料
题名
中华蜜蜂SRP9基因的克隆、序列分析及原核表达
1
作者
吴鹏杰
金红岩
徐进
武江利
李雨时
郭岳琴
姚军
徐书法
吴杰
机构
中国农业科学院蜜蜂研究所
中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
出处
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第12期1332-1339,共8页
基金
国家农业产业技术体系(nycytx-45)
中国农业科学院科技创新工程(CAAS-ASTIP-2016-IAR)
国家自然科学基金项目(31372384)
文摘
【目的】探究中华蜜蜂Apis cerana cerana信号识别颗粒9(signal recognition particle 9,SRP9)基因的序列,获得纯化的重组蛋白,为探究其蛋白功能奠定基础。【方法】利用RT-PCR方法,以中华蜜蜂的c DNA为模板扩增中华蜜蜂SRP9基因编码区,并通过软件MEGA5.1构建系统发育树,运用Predice Protein和SWISS-MODEL等软件预测分析蛋白结构;用大肠杆菌Escherichia coli表达系统进行原核表达;采用尿素洗脱法进行重组蛋白纯化。【结果】扩增得到的中华蜜蜂SRP9基因编码区长为237 bp,命名为Acc SRP9。该基因编码78个氨基酸,编码蛋白的相对分子量为9.36 k D,等电点为9.17。系统进化树分析表明,Acc SRP9与西方蜜蜂Apis mellifera的SRP9和小蜜蜂Apis florea的SRP9聚成一支。蛋白质二级结构预测发现其含有2个α-螺旋区和3个β-折叠区。利用同源建模获得蛋白质的三维结构。将Acc SRP9连入表达载体p GEX-6P-1并在BL21(DE3)中进行原核表达,发现该重组蛋白表达在包涵体中,经蛋白纯化,最终获得了N端带GST标签的重组蛋白p GEX-6P-1-SRP9。【结论】本研究成功克隆了中华蜜蜂SRP9基因Acc SRP9,对其序列进行了分析,并获得了带有标签的重组蛋白,为进一步研究该基因的功能提供参考和材料。
关键词
中华蜜蜂
srp9
基因克隆
序列分析
结构预测
原核表达
Keywords
Apis cerana cerana
srp9
gene cloning
sequence analysis
structure prediction
prokaryotic expression
分类号
Q966 [生物学—昆虫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
中华蜜蜂SRP9基因的克隆、序列分析及原核表达
吴鹏杰
金红岩
徐进
武江利
李雨时
郭岳琴
姚军
徐书法
吴杰
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
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