程序性死亡受体1/程序性死亡受体配体1和SRY盒转录因子2在三阴性乳腺癌中的研究进展

三阴性乳腺癌(TNBC)是最具侵袭性的乳腺癌亚型之一,因其雌激素受体、孕激素受体、人表皮生长因子受体2均表达阴性,临床治疗难度较其他类型乳腺癌更大,目前仍以手术和化疗为主,但仅对早期患者有效,对晚期TNBC患者几乎没有作用.近年来,程序性死亡受体1(PD-1)/程序性死亡受体配体1(PD-L1)抑制剂已经广泛应用于多种肿瘤的治疗中,并取得了较好的效果,但在TNBC中的应用仍存在颇多难题.SRY盒转录因子2(SOX2)是维持干细胞多能性和自我更新的转录因子之一,在肿瘤形成和发展中也发挥重要作用.目前关于SOX2和PD-L1在TNBC中协同作用的研究较少.本文综述SOX2和PD-1/PD-L1在TNBC中的研究进展.

干细胞转录因子OCT4、SOX2在食管鳞癌中的表达及与预后的关系

目的探讨干细胞转录因子Sry相关HMG盒2(SOX2)、八聚体结合转录因子4(OCT4)在食管鳞癌中的表达变化及与患者临床特征、预后的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测77例手术后经病理学证实为食管鳞癌的手术标本(食管癌组)和40例癌旁组织标本(癌旁组织)中SOX2、OCT4蛋白的表达水平,并分析其与患者临床特征、预后的关系。结果食管癌组织中的SOX2蛋白、OCT4蛋白阳性表达率分别为63.64%和77.92%均高于癌旁组织的17.50%和15.00%,且差异具有统计学意义(P<0.05);食管癌组织中的SOX2蛋白、Oct4蛋白在低分化、淋巴结转移患者中呈高表达(P<0.05);食管癌组织中的SOX2蛋白阳性表达患者的3年随访中位生存期24个月低于阴性患者的30个月(χ~2=4.072,P=0.044);OCT4蛋白阳性表达患者的中位生存时间21个月低于阴性患者33个月(χ~2=4.880,P=0.037)。结论 SOX2、OCT4蛋白在食管癌组织中高表达,并且与患者的分化程度、转移及预后有关。

干细胞转录因子OCT4、SOX2在食管鳞癌组织中表达及与预后的关系

背景:研究表明,OCT4、SOX2、HIWI等在肿瘤组织中有表达。目的:分析干细胞转录因子SOX2、OCT4在食管鳞癌中的表达变化及与患者临床特征、预后的关系。方法:采用免疫组织化学SP法检测77例手术后经病理学证实为食管鳞癌患者的手术标本(食管癌组)和40例癌旁组织标本(癌旁组织)中SOX2、Oct4蛋白的表达水平,并分析其与患者临床特征、预后的关系。结果与结论:(1)食管癌组织中的SOX2蛋白、Oct4蛋白阳性表达率均显著的高于癌旁组织(P<0.05);(2)食管癌组织中的SOX2蛋白、Oct4蛋白在低分化、淋巴结转移患者中呈显著的高表达(P<0.05);(3)食管癌组织中的SOX2蛋白阳性表达患者的3年随访中位生存期24个月,显著低于阴性患者的30个月;Oct4蛋白阳性表达患者的中位生存时间21个月显著低于阴性患者33个月;(4)结果提示,SOX2、Oct4蛋白在食管癌组织中高表达,并且与患者的分化程度、转移及预后有关。

示-环指长比与6个指骨发育相关基因多态性的关联性

目的探讨6个指骨发育相关基因,即成纤维细胞生长因子受体2(FGFR2)、印度刺猬信号分子(IHH)、Msh同源盒1(MSX1)、Runx家族转录因子2(RUNX2)、SRY盒转录因子9(SOX9)及Wnt家族成员5A(WNT5A)13个位点单核苷酸多态性(SNP)与人类示-环指长比(2D∶4D)的关联性。方法采用数码相机拍摄宁夏地区731名在校大学生(男性358名,女性373名)手部正面照片,采用GraphPad Prism 8.0图像分析软件标记解剖点并测量示(2)指及环(4)指指长;多重PCR法进行6个基因13个SNP位点(rs1047057、rs755793、rs41258305、rs3731881、rs3100776、rs12532、rs3821949、rs45585135、rs3749863、rs1042667、rs12601701、rs1829556和rs3732750)的基因分型;单因素方差分析或独立样本t检验间接评估2D∶4D与13个SNP位点间的关联性。结果宁夏大学生女性左手和右手2D∶4D均显著高于男性(均P<0.01);13个SNP位点基因型、等位基因频率在不同性别间的差异均无显著统计学意义(均P>0.05);不同性别中,男性左手2D∶4D与SOX9基因rs12601701位点基因型显著关联(P<0.05),右手2D∶4D与WNT5A基因rs1829556位点基因型显著关联(P<0.05);女性右手2D∶4D与MSX1基因rs12532(P<0.01)和rs3821949(P<0.05)位点基因型显著关联。结论SOX9(rs12601701)、WNT5A(rs1829556)、MSX1(rs12532和rs3821949)基因多态性可能与宁夏地区人群2D∶4D的形成有关。

SOX12在宫颈癌组织中的表达及生物学功能

目的:探讨SRY盒转录因子12(SRY-box transcription factor 12,SOX12)在宫颈癌中的临床及生物学意义。方法:采用免疫组织化学染色检测50对宫颈癌及癌旁组织中SOX12的表达,评价SOX12表达水平与患者临床特征及预后的相关性。通过SOX12 shRNA质粒降低宫颈癌HeLa细胞内SOX12的表达水平,检测宫颈癌细胞的迁移及侵袭能力。结果:SOX12主要定位于细胞核中。与癌旁组织相比,宫颈癌组织中SOX12的表达水平明显升高(P=0.004)。SOX12高表达与淋巴结转移(P=0.020)及较晚的FIGO分期(P=0.038)密切相关,并且SOX12高表达的宫颈癌患者术后总生存期(HR=2.169,P=0.004)及无病生存期(HR=2.438,P=0.006)均较短。体外研究显示,沉默SOX12表达可以抑制HeLa细胞迁移(P=0.039)和侵袭(P=0.026)。结论:SOX12高表达与宫颈癌恶性临床特征及不良预后密切相关,SOX12具有抗肿瘤转移作用,SOX12作为治疗靶点存在研究价值。

老年脓毒症相关性脑病患者血清外泌体LncNEAT1、LncSOX2OT表达及对临床预后评价

目的分析老年脓毒症相关性脑病(SAE)患者血清外泌体长链非编码RNA核富含丰富的转录本1(LncNEAT1)、长链非编码RNA SRY盒转录因子2重叠转录本(LncSOX2OT)的表达及对临床预后意义。方法选择2020年2月—2022年2月就诊于成都中医药大学附属第五人民医院重症医学科的老年SAE患者96例为SAE组,根据28 d内生存状态再分为生存亚组(n=50)和死亡亚组(n=46),以同期诊治的无SAE的脓毒症患者60例为非SAE组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清外泌体中LncNEAT1、LncSOX2OT的表达水平。多因素Logistic回归分析老年SAE患者预后的影响因素。受试者工作特征曲线(ROC)分析血清外泌体LncNEAT1、LncSOX2OT对老年SAE患者预后的诊断价值。结果SAE组血清外泌体LncNEAT1、LncSOX2OT的相对表达高于非SAE组(t/P=16.726/<0.001、21.803/<0.001)。死亡亚组SAE患者C反应蛋白、降钙素原、神经元特异性烯醇化酶、APACHEⅡ评分、SOFA评分、LncNEAT1、LncSOX2OT均高于生存亚组(t/P=14.197/<0.001,4.535/<0.001,19.253/<0.001,8.442/<0.001,5.670/<0.001,9.861/<0.001,6.931/<0.001)。SAE患者血清外泌体LncNEAT1、LncSOX2OT与APACHEⅡ评分、SOFA评分呈正相关(r/P=0.812/<0.001,0.761/<0.001,0.833/<0.001,0.598/<0.001)。降钙素原高、C反应蛋白高、神经元特异性烯醇化酶高、APACHEⅡ评分高、SOFA评分高、LncNEAT1高及LncSOX2OT高是影响SAE患者28 d生存预后的独立危险因素[OR(95%CI)=1.459(1.195~1.782)、1.464(1.164~1.841)、1.334(1.086~1.639)、1.644(1.223~2.210)、1.779(1.295~2.444)、1.347(1.050~1.728)、1.578(1.122~2.219)]。血清外泌体LncNEAT1、LncSOX2OT二者联合预测SAE患者28 d生存预后诊断的AUC为0.914,高于单项指标的0.846、0.834(Z/P=3.864/<0.001、3.915/<0.001)。结论老年SAE患者血清外泌体LncNEAT1、LncSOX2OT表达升高,是影响老年SAE患者预后的独立危险因素,并对老年SAE患者生存预后具有较高的评估价值。

lncRNASOX2-OT调节miR-215-5p/ZEB2轴抑制人前列腺癌细胞系增殖和上皮间质转化研究

目的探讨长非编码RNA SRY盒转录因子2重叠转录本(lncRNA SOX2-OT)调节miR-215-5p/E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)轴对前列腺癌细胞增殖和上皮间质转化(EMT)的影响。方法将PC-3细胞分为对照组、si-SOX2-OT组、si-NC组、si-SOX2-OT+anti-miR-215-5p组,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中SOX2-OT、miR-215-5p与ZEB2表达。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)及5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色法检测PC-3细胞增殖;流式细胞术检测PC-3细胞凋亡率;Transwell检测PC-3细胞迁移、侵袭;qRT-PCR检测PC-3细胞miR-215-5p、ZEB2 mRNA、凋亡蛋白与EMT标志蛋白转录表达;Western blot检测PC-3细胞ZEB2、凋亡蛋白与EMT标志蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证PC-3细胞中SOX2-OT对miR-215-5p及miR-215-5p对ZEB2的靶向调节作用。结果与人前列腺上皮细胞相比,人前列腺癌组织源细胞和人前列腺癌细胞株PC-3、DU 145、22RV1中SOX2-OT、ZEB2 mRNA表达升高,miR-215-5p表达降低(P<0.05)。与对照组相比,si-SOX2-OT组细胞活力、EdU阳性率、迁移细胞数、侵袭细胞数、细胞ZEB2、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)及Vimentin mRNA和蛋白表达均降低,细胞凋亡率、miR-215-5p及Bcl-2相关X基因(Bax)、E-cadherin mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05)。下调miR-215-5p表达可减弱敲低SOX2-OT对PC-3细胞的影响。结论敲低SOX2-OT可通过促进miR-215-5p表达而下调ZEB2的表达,从而抑制前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,并诱导细胞凋亡。

miR-452-5p靶向SOX7促进食管癌KYSE-150细胞增殖、侵袭及EMT

目的:检测miR-452-5p在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达,并探讨其异常表达对食管癌KYSE-150细胞增殖、侵袭能力和EMT进程的影响及其分子机制。方法:收集2012年3月至2015年12月在河北医科大学第四医院就诊的86名ESCC患者的癌组织样本和对应的癌旁组织,用qPCR法检测miR-452-5p及其他相关基因在ESCC组织和细胞中的表达;向KYSE-150细胞中分别转染miR-452-5p mimic或pcDNA3.1-SOX7构建过表达的细胞株。分析miR-452-5p表达与ESCC病理特征和患者5年OS的关系。用MTS、Tanswell法检测miR-452-5p过表达对食管癌KYSE-150细胞增殖、侵袭能力和EMT进程的影响;用双荧光素酶报告基因实验及TOP/FOP报告基因系统检测miR-452-5p与SRY盒转录因子(SOX7)3’UTR区的结合作用及对Wnt/β-catenin通路活化水平的影响。结果:miR-452-5p在ESCC组织中呈明显高表达(P<0.01),并与ESCC患者的淋巴结转移、TNM分期及5年OS密切相关(均P<0.01)。miR-452-5p过表达明显促进食管癌KYSE-150细胞的增殖、侵袭能力及EMT进程(P<0.05或P<0.01)。SOX7是miR-452-5p的直接靶基因,miR-452-5p通过对SOX7的负向调控影响了Wnt通路活化水平(P<0.05或P<0.01),同时,miR-452-5p表达也受Wnt通路活化水平的影响(P<0.05或P<0.01),其可能为Wnt通路下游靶基因。结论:miR-452-5p通过miR-452-5p/SOX7/Wnt/miR-452-5p正反馈环路提高Wnt/β-catenin通路活化水平,进而促进ESCC KYSE-150细胞的增殖、侵袭能力及EMT进程,miR-452-5p有望成为ESCC患者靶向治疗的潜在靶点及预后评估的新型分子标志物。

微小RNA-3677靶向调控SOX6表达及对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨微小RNA-3677(miR-3677)对SRY盒转录因子6(SOX6)表达的靶向调控作用及其对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法采用癌症多组学和临床数据库LinkedOmics分析TCGA数据库中has-miR-3677表达与肝癌临床病理特征和预后的关系。脂质体法向肝癌细胞SMMC7721转染miR-3677抑制剂(Inhibitor组)和阴性对照(NC组),并以未转染的细胞为空白对照,采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测miR-3677水平,MTT法和AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术分别检测增殖和凋亡情况,双荧光素酶报告基因实验验证miR-3677对SOX6的靶向调控作用,QPCR和Western blotting检测SOX6、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)水平。结果miR-3677表达与临床分期和T分期有关,其中miR-3677表达随分期的升高而呈上升趋势(P<0.05);预后方面,miR-3677低表达者的总生存期较高表达者延长(P<0.05)。Inhibitor组的miR-3677水平为0.374±0.038,低于空白对照组的1.039±0.042和NC组的1.107±0.316(P<0.05);与空白对照组和NC组相比,Inhibitor组转染24~48 h后的细胞增殖活力降低(P<0.05);Inhibitor组的凋亡率为(11.241±1.235)%,高于空白对照组的(3.578±0.598)%和NC组的(4.216±0.823)%,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-3677模拟物可降低SOX6野生型3’端非翻译区的荧光素酶活性,而对突变型的荧光素酶活性无影响。与空白对照组和NC组比较,Inhibitor组SOX6、caspase-3的mRNA和蛋白水平均升高,而Bcl-2的mRNA和蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);空白对照组和NC组上述指标的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论下调miR-3677可抑制SMMC7721细胞的增殖能力并诱导凋亡,可能通过靶向SOX6来发挥促癌作用,有望成为肝癌防治的潜在靶点。

Circ_0000218通过调节miR-139-3p/SOX2分子轴促进肾癌发展

目的:探究环状RNA(circRNA)0000218(circ_0000218)/miR-139-3p/SRY盒转录因子2(SOX2)分子轴在调节肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)细胞增殖和转移的作用及其机制。方法:采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肾癌组织和细胞中circ_0000218和miR-139-3p的表达水平,以及肾癌细胞中二者的调控关系,并对43例肾癌患者组织中circ_0000218和miR-139-3p的表达水平进行相关性分析。采用CCK-8和Transwell实验分别检测过表达circ_0000218或miR-139-3p模拟物在细胞中增殖和迁移侵袭的作用。采用StarBase数据库预测miR-139-3p在肾癌样本中的表达与其生存预后信息。采用蛋白质印迹法检测肾癌细胞中circ_0000218或miR-139-3p对SOX2表达水平的影响。最后采用CircInteractome和TargetScan预测,双荧光素酶报告基因实验验证circ_0000218与miR-139-3p,miR-139-3p和SOX2之间的靶向关系。结果:Circ_0000218在肾癌患者癌组织以及细胞系中均显著上调,同时其高表达水平和T分期级别增加,局部淋巴结转移和远处转移显著相关。过表达circ_0000218促进肾癌细胞增殖和转移。而miR-139-3p在肾癌组织和细胞中低表达,且StarBase数据库预测其低表达与肾癌患者生存期呈正相关。Circ_0000218与miR-139-3p表达呈负相关,潜在的机制表明circ_0000218通过调节miR-139-3p/SOX2轴促进肾癌增殖和转移。结论:在RCC中,circ_0000218通过调节miR-139-3p/SOX2轴促进RCC细胞的增殖和转移,并有可能作为诊断性生物标志物和治疗靶点。

牛蒡子苷元基于机械敏感离子通道对软骨细胞转录因子和胶原蛋白表达的影响

目的:基于机械敏感离子通道探讨牛蒡子苷元(ARG)对软骨细胞SRY相关高迁移率族盒蛋白转录因子9(SOX9)、Runt相关转录因子2(RUNX2)和胶原蛋白表达的影响。方法:分离并培养原代小鼠软骨细胞。将细胞分为空白组(常规培养基)、ARG组(10μmol/L)、瞬时受体电位香草素亚家族4(TRPV4)抑制剂组(GSK2193874,10 nmol/L)、ARG+抑制剂组(10μmol/L ARG+10 nmol/L GSK2193874)和TRPV4激动剂组(GSK1016790A,10 nmol/L),各组给予相应干预。细胞培养24 h后,免疫荧光染色检测Ⅱ型胶原蛋白(ColⅡ)表达,PCR检测Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)和ColⅡ的mRNA表达水平,Western blot检测转录因子SOX9、RUNX2及ColⅠ、ColⅡ的蛋白表达水平。结果:①免疫荧光染色观察显示,与空白组相比,ARG组、抑制剂组和ARG+抑制剂组ColⅡ蛋白表达更显著,而激动剂组较弱。与ARG组或抑制剂组相比,ARG+抑制剂组ColⅡ蛋白表达更显著。②与空白组相比,ARG组、抑制剂组和ARG+抑制剂组ColⅡmRNA表达量显著增高(P<0.05,P<0.01),ColⅠmRNA表达量明显降低(P<0.01),而激动剂组ColⅡmRNA表达量显著降低(P<0.01)。与ARG组相比,抑制剂组和ARG+抑制剂组细胞的ColⅡ和ColⅠ的mRNA表达量均显著增高(P<0.05,P<0.01),而激动剂组ColⅠmRNA表达量增高(P<0.01),ColⅡmRNA表达量降低(P<0.01)。与抑制剂组相比,ARG+抑制剂组ColⅡ和ColⅠ的mRNA表达量均显著增高(P<0.05)。③与空白组相比,ARG组ColⅡ蛋白表达量显著上调(P<0.01),ColⅠ、SOX9和RUNX2蛋白表达量降低(P<0.05,P<0.01);抑制剂组ColⅡ蛋白表达量亦明显增多(P<0.01),ColⅠ和RUNX2蛋白表达量明显降低(P<0.01);ARG+抑制剂组细胞的ColⅡ蛋白表达量显著升高(P<0.01),SOX9蛋白表达量显著降低(P<0.05),ColⅠ和RUNX2蛋白表达无明显变化(P>0.05);激动剂组ColⅡ和SOX9蛋白表达量明显降低(P<0.01),RUNX2蛋白表达量明显增高(P<0.01),ColⅠ蛋白表达量无明显变化(P>0.05)。④与ARG组相比,抑制剂组ColⅡ和ColⅠ蛋白表达量均显著增高(P<0.05,P<0.01);ARG+抑制剂组细胞的ColⅡ、ColⅠ和RUNX2蛋白表达量均明显增高(P<0.01);激动剂组ColⅡ蛋白表达量降低(P<0.01),ColⅠ和RUNX2蛋白表达量升高(P<0.01)。与抑制剂组相比,ARG+抑制剂组细胞的ColⅡ、ColⅠ和RUNX2蛋白表达量均显著增多(P<0.05),SOX9蛋白表达量明显降低(P<0.05)。结论:ARG可上调软骨细胞ColⅡ表达,抑制ColⅠ表达,调节转录因子SOX9和RUNX2,促进软骨细胞分化成熟。其作用与TRPV4抑制剂相似,两者合用对ColⅡ的调控作用更显著。

飞燕草素葡萄糖苷通过上调SOX2OT减轻高糖诱导的心肌细胞损伤

目的:探讨飞燕草素葡萄糖苷(DPg)对高糖(HG)诱导的心肌细胞H9C2损伤的影响及可能机制。方法:体外培养H9C2细胞,不同剂量(1,10,100μmol·L^(-1))的DPg作用于33.3 mmol·L^(-1)葡萄糖诱导的H9C2细胞24 h,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blot检测细胞中兔抗鼠B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关蛋白(Bax)的蛋白表达,试剂盒检测细胞中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平,RT-qPCR检测SRY盒转录因子2重叠转录本(SOX2OT)表达。转染SOX2OT过表达载体、小干扰RNA至H9C2细胞,经33.3 mmol·L^(-1)葡萄糖诱导24 h后,检测细胞增殖、凋亡、Bax和Bcl-2蛋白表达及MDA和SOD水平。结果:DPg可提高高糖诱导的H9C2细胞吸光度(A)值(P<0.05),降低细胞凋亡率、Bax蛋白表达及MDA含量(P<0.05),并促进Bcl-2蛋白表达和SOD活性(P<0.05),且呈剂量依赖性。DPg可剂量依赖性促进高糖诱导的H9C2细胞中SOX2OT的表达,过表达SOX2OT可提高高糖诱导的H9C2细胞A值(P<0.05),降低细胞凋亡率、Bax蛋白表达及MDA含量(P<0.05),并促进Bcl-2蛋白表达和SOD活性(P<0.05)。与未敲减SOX2OT的H9C2细胞比较,敲减SOX2OT的H9C2细胞经100μmol·L^(-1)DPg和高糖处理后A值、Bcl-2蛋白表达和SOD活性降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax蛋白表达及MDA含量升高(P<0.05),并抑制Bcl-2蛋白表达和SOD活性(P<0.05)。结论:DPg可能通过上调SOX2OT表达抑制HG诱导的H9C2细胞凋亡和氧化应激。

miR-204靶向SOX4抑制皮肤鳞状细胞癌的发展

目的:探究miR-204和SRY相关HMG盒转录因子4(SOX4)在皮肤鳞状细胞癌(CSCC)中的功能以及可能的分子作用机制。方法:选择2019年5月至2022年3月于空军军医大学第二附属医院皮肤科确诊并接受手术治疗的皮肤鳞状细胞癌患者共70例,分别收集患者的CSCC组织和相应癌旁组织,采用qRT-PCR检测组织标本中miR-204和SOX4 m RNA的水平,Western blot和免疫组织化学染色检测组织标本中SOX4水平。将CSCC细胞系SCL-1分为对照组、miR-NC组、miR-204组、miR-204+pcDNA组和miR-204+SOX4组,采用Lipofectamine 2000TM转染试剂分别将miR-NC、miR-204模拟物、miR-204模拟物和pcDNA3.1空载体、miR-204模拟物和pcDNA3.1+SOX4载体分别转染至miR-NC组、miR-204组、miR-204+pcDNA组和miR-204+SOX4组,对照组细胞不转染。双荧光素酶报告基因实验检测miR-204与SOX4靶向关系。采用CCK-8法检测SCL-1细胞增殖,克隆形成实验检测SCL-1细胞克隆形成,流式细胞术实验检测SCL-1细胞凋亡,Transwell实验检测检测SCL-1细胞迁移和侵袭,Western blot检测SOX4、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平。结果:CSCC组织中miR-204低表达,SOX4的m RNA和蛋白均高表达。TargetScan软件在线分析结果显示miR-204的5'端与SOX4的3'端存在结合位点。与对照组或NC组比较,miR-204组SCL-1细胞相对增殖活力、克隆形成数量、迁移和侵袭数量均降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05);SCL-1细胞中SOX4、N-cadherin和Vimentin蛋白水平均降低(P<0.05),E-cadherin蛋白水平升高(P<0.05)。与miR-204组或miR-204+pcDNA组比较,miR-204+SOX4组SCL-1细胞相对增殖活力、克隆形成数量、迁移和侵袭数量均升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05);SCL-1细胞中SOX4、N-cadherin和Vimentin蛋白水平均升高(P<0.05),E-cadherin蛋白水平降低(P<0.05)。结论:miR-204通过靶向SOX4抑制CSCC细胞的增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化过程,并促进细胞凋亡,进而缓解CSCC的发展。

SOX7基因甲基化在肾癌中的临床价值及对肾癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:研究SRY盒转录因子7( SOX7)基因甲基化在肾癌中的临床价值及对肾癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。 方法:选择80例肾癌患者(肾癌组)及50例肾脏良性疾病患者(对照组)为研究对象。设计合成寡核苷酸序列(MON、UMON和CON)并转染至肾癌细胞A498。采用甲基特异性PCR检测肾癌患者(肿瘤组织、癌旁组织)和对照组肾脏组织中 SOX7基因甲基化状态,分析 SOX7基因甲基化与临床病理因素的关系,MTT法检测 SOX7基因甲基化对肾癌细胞增殖的影响,Transwell小室法检测 SOX7基因甲基化对肾癌细胞迁移和侵袭的影响。 结果:肾癌组患者肿瘤组织 SOX7基因甲基化率高于癌旁组织和对照组肾脏组织,差异有统计学意义(χ^(2)=67.522, P<0.05)。肾癌细胞Caki-1、786-O、769-P中 SOX7基因呈甲基化状态,而在A498细胞中呈未甲基化状态。肾癌组患者肿瘤组织 SOX7基因甲基化率在性别、年龄及病理类型方面比较差异无统计学意义(均 P>0.05),在分化程度、肿瘤最大径、淋巴结转移、肿瘤数量及肿瘤分期方面比较差异均有统计学意义(均 P<0.05)。转染MON后可成功诱导A498细胞 SOX7基因甲基化,MON组A498细胞第1~7天细胞活力高于UMON组和CON组( P<0.05)。 结论:SOX7基因甲基化可促进肾癌细胞增殖、迁移和侵袭,在肾癌的病情及预后评估中具有重要临床价值。

川芎嗪对小鼠坐骨神经损伤后施万细胞Sox2与Egr2表达的影响

目的观察川芎嗪(TMP)对小鼠坐骨神经挤压伤后髓鞘脱失及施万细胞Sox2、早期生长反应因子2(Egr2)表达的影响。方法按照体重将小鼠随机分为假手术组(n=5)、模型组(n=8)及实验组(n=8)。用改良的夹持损伤法来制备小鼠坐骨神经损伤模型。造模前,实验组给予50mg·kg^(-1)TMP腹腔内注射,每日4次,模型组同法给予等量生理盐水;用药5 d后造模。继续饲养24 h后,经固蓝(LFB)染色来观察髓鞘成分,DAPI标记细胞数量,免疫荧光法检测小鼠坐骨神经髓鞘碱性蛋白(MBP)、神经源纤维(NF)、Sox2及Egr2的表达,以及透射电镜下观察髓鞘的超微结构。结果与模型组比较,实验组小鼠坐骨神经MBP表达明显,细胞总数较少,髓鞘层较厚;同时实验组施万细胞Sox2的表达较模型组明显减少,而Egr2的表达则明显增加(均P<0.05)。结论川芎嗪可能通过增加施万细胞Egr2表达和抑制Sox2的表达来维持小鼠外周神经损伤后髓鞘的完整性。

NRSN2-AS1在卵巢癌组织中表达的临床意义及体外生物学效应

目的探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)NRSN2-AS1在卵巢癌组织中表达的临床意义及体外生物学效应。方法临床收集84例卵巢癌组织及相应正常癌旁组织,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测NRSN2-AS1表达,并分析其与患者临床资料的关系;体外培养人卵巢上皮细胞HOSEpiC、人卵巢癌细胞A2780及OVCAR3,于A2780及OVCAR3细胞中分别转染过表达及干扰NRSN2-AS1载体及相应的对照载体,作为本研究的空白组、过表达组及对照组、干扰组;CCK-8实验检测细胞增殖能力的变化;Transwell侵袭及迁移实验检测细胞转移能力的变化,RT-qPCR技术及蛋白质印记(Western blot)技术检测细胞NRSN2-AS1潜在下游基因SRY相关HMG盒转录因子12(SOX12)mRNA及蛋白的表达。结果NRSN2-AS1在卵巢癌组织及细胞中显著高表达(P<0.05),且其高表达与患者预后不良、淋巴结转移及高临床分期显著相关(P<0.05);空白组及过表达组NRSN2-AS1表达分别为:1.00±0.08及5.78±0.41,SOX12 mRNA表达分别为:1.00±0.10及3.08±0.23;SOX12蛋白表达分别为:1.00±0.08及7.26±0.39,每视野侵袭细胞数分别为:22.7±4.9个及79.0±6.2个,每视野迁移细胞数为26.5±4.1个及43.5±4.5个;对照组及干扰组NRSN2-AS1表达分别为:1.00±0.11及0.37±0.04,SOX12 mRNA表达分别为:1.00±0.07及0.59±0.05;SOX12蛋白表达分别为:1.00±0.07及0.36±0.03,每视野侵袭细胞数68.3±6.1及30.6±5.5,每视野迁移细胞数为85.2±7.0个及22.7±4.2。相比空白组,过表达组SOX12 mRNA及蛋白表达均显著增高(P<0.05),细胞增殖及转移能力显著增强(P<0.05);相比对照组,干扰组SOX12 mRNA及蛋白表达均显著降低(P<0.05),细胞增殖及转移能力显著减弱(P<0.05)。结论NRSN2-AS1在卵巢癌组织中表达上调,且与患者预后不良及病情进展密切相关,体外可促进SOX12的表达及细胞的恶性行为。

二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织GATA3,T-bet mRNA表达的影响

目的:观察二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织锌指蛋白3(GATA3),T盒转录因子(T-bet)的影响。方法:将70只SD大鼠随机分为7组,每组10只,分别为正常组,模型组,二陈汤加味低、中、高剂量组(5,10,20 g·kg-1),消咳喘组(5 g·kg-1),二陈汤组。以烟熏合并脂多糖(LPS)气管滴注的方法制备COPD大鼠模型。成功造模后,治疗组灌胃给药,正常组及模型组灌胃等体积生理盐水。酶联免疫吸附测定(ELISA)测定大鼠血清中白细胞介素-10(IL-10),白细胞介素-12(IL-12)的含量。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测GATA3,T-bet mRNA表达,免疫组化(IHC)检测其肺组织GATA3,T-bet的蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清中IL-10水平显著降低,IL-12显著升高(P <0. 01);肺组织GATA3的蛋白和mRNA表达显著降低,T-bet的表达显著升高(P <0. 01)。与模型组比较,各治疗组血清中IL-10水平均有不同程度的升高,IL-12则不同程度的降低(P <0. 05)。各治疗组大鼠肺组织GATA3 mRNA和蛋白表达均明显增多,T-bet则受到了抑制(P <0. 05)。结论:二陈汤加味可能是通过降低IL-12,增加IL-10的含量,并抑制T-bet,兴奋GATA3的蛋白和mRNA表达,来减轻COPD大鼠肺组织炎症,改善肺功能的,并阻止COPD的免疫紊乱。

模拟步行压力下牛蒡子苷元对软骨细胞的保护机制研究

目的:探讨模拟步行压力对软骨细胞的作用及压力负荷下牛蒡子苷元(ARG)对软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白(ColⅡ)、SRY相关高迁移率族盒蛋白转录因子9(SOX9)、瞬时受体电位香草素亚家族4(TRPV4)、基质金属蛋白酶(MMPs)的影响。方法:分离并培养小鼠原代软骨细胞,制备3D培养软骨细胞水凝胶。将制备的水凝胶分为空白组、模型组、ARG组和抑制剂组。空白组不进行压力干预,使用常规培养基换液。其他3组均给予模拟步行压力(正弦波,1 Hz,20 kPa)干预2 h。压力干预同时,ARG组和抑制剂组分别给予10μmol/L ARG和10 nmol/L TRPV4抑制剂GSK2193874。收集干预后各组水凝胶提取的软骨细胞,免疫荧光染色检测ColⅡ蛋白表达,PCR检测ColⅡ、SOX9、TRPV4、MMP9、MMP13的mRNA表达水平,Western blot检测ColⅡ、SOX9、TRPV4的蛋白表达水平。结果:①免疫荧光染色观察显示,与空白组相比,模型组ColⅡ蛋白表达较少;与模型组相比,ARG组和抑制剂组ColⅡ蛋白表达明显增多。②与空白组相比,模型组ColⅡ、SOX9、TRPV4的mRNA表达量显著降低(P<0.01),MMP9和MMP13的mRNA表达量均显著增高(P<0.01);与模型组相比,ARG组和抑制剂组ColⅡ、SOX9、TRPV4的mRNA表达量显著增高(P<0.01),MMP9和MMP13的mRNA表达量均显著降低(P<0.01)。③与空白组相比,模型组ColⅡ和SOX9蛋白表达水平显著降低(P<0.01),TRPV4蛋白表达无明显变化;与模型组相比,ARG组和抑制剂组ColⅡ和SOX9蛋白表达水平显著增高(P<0.01),TRPV4蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论:模拟步行压力可导致软骨细胞发生趋向于软骨退化的代谢反应。模拟步行压力下,ARG和TRPV4抑制剂对软骨细胞具有保护作用,其机制可能与上调ColⅡ、SOX9表达,抑制TRPV4、MMP9和MMP13的表达有关。