普鲁卡因通过调节SRY相关高迁移率族盒蛋白9抑制乳腺癌细胞增殖并诱导凋亡的机制研究

目的探讨普鲁卡因(PCA)通过调节SRY相关高迁移率族盒蛋白9(SOX9)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的作用机制。方法以不同浓度(0、2.5、5.0、10.0 mmol/L)PCA处理MCF-7细胞,采用MTT法、流式细胞术、实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测细胞增殖、凋亡及细胞中SOX9表达情况。采用MTT法和流式细胞术检测转染SOX9 siRNA对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响。过表达SOX9联合10.0 mmol/LPCA处理48 h,检测细胞增殖和凋亡情况。结果培养48、72 h时,随着PCA浓度增加,MCF-7细胞光密度(OD)490值逐渐下降(P<0.05)。培养48h,细胞凋亡率随PCA浓度的增加而提高,nRNA及SOX9蛋白水平均随着PCA浓度增加而下降(P<0.05)。si-SOX9组MCF-7细胞中SOX9蛋白表达量及OD490值均低于si-con组,凋亡率高于si-con组(P<0.05)。PCA组MCF-7细胞中SOX9蛋白表达量及OD49。值均低于Control组,凋亡率高于Control组(P<0.05)。PCA+pcDNA-SOX9组MCF-7细胞中SOX9蛋白表达量及OD49。值均高于PCA+pcDNA组,凋亡率低于PCA+pcDNA组(P<0.05)。结论 PCA可通过调控SOX9表达抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,同时促进细胞凋亡。

性别决定区Y相关高迁移率族盒蛋白11在中枢神经系统分化、发育与再生中的作用

性别决定区Y相关高迁移率族盒蛋白11(SOX11)最初被认为是支持干细胞神经元分化和神经前体细胞存活的反式作用因子之一。但深入研究发现,SOX11在神经元发育、重塑及再生中都具有转录调节功能,有望成为神经损伤后再生的重要干预靶点。本文综述了SOX11在中枢神经系统中的生理和病理生理功能及其在神经再生中的作用。

敲减SRY相关高迁移率族盒蛋白9基因下调Wnt/β-连环蛋白信号对气道肉芽组织成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨敲减SRY相关高迁移率族盒蛋白9(SOX9)基因下调Wnt/β-连环蛋白信号对气道肉芽组织成纤维细胞增殖和凋亡的影响。方法应用基因芯片筛选出气道肉芽组织和气道正常黏膜组织差异表达的基因,用R软件进行分析,挑选最显著的差异基因SOX9作为研究对象,并借助逆转录聚合酶链反应技术验证气道肉芽组织及气道正常黏膜组织SOX9的表达。提取气道肉芽组织成纤维细胞,通过构建shRNA-SOX9慢病毒载体转染气道肉芽组织成纤维细胞,稳定感染shRNA-SOX9慢病毒的细胞标记为shRNA-SOX9(shRNA-SOX9组),稳定感染shRNA阴性对照的慢病毒的细胞标记为阴性对照组,无质粒载体加入的细胞设定为空白对照组。利用实时定量逆转录聚合酶链反应、蛋白质印迹法检测细胞内SOX9和Wnt/β-连环蛋白信号通路上下游基因表达情况;使用细胞计数试剂盒8检测成纤维细胞的活力;流式细胞术检测细胞凋亡率,组间做比较。结果SOX9在气道肉芽组织中呈高表达,shRNA-SOX9慢病毒转染气道肉芽组织成纤维细胞后,SOX9和Wnt/β-连环蛋白信号通路相关基因表达均低于阴性对照组和空白对照组;敲减SOX9后,气道肉芽组织成纤维细胞的增殖能力下降,转染24、48、72 h后,shRNA-SOX9组气道肉芽组织成纤维细胞增殖抑制率明显高于阴性对照组和空白对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。shRNA-SOX9组细胞凋亡率高于空白对照组和阴性对照组[(16.9±2.0)%比(9.1±1.2)%、(10.1±1.8)%],3组间差异有统计学意义(F=3.854,P=0.021)。结论敲减SOX9可以通过调节Wnt/β-连环蛋白信号通路抑制气道肉芽组织成纤维细胞的增殖、促进凋亡。

血清核转录因子κB、高迁移率族蛋白B1和热休克蛋白70与热性惊厥患儿脑神经和心肌损伤的相关性分析

目的探讨热性惊厥(FS)患儿血清核转录因子κB(NF‑κB)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和热休克蛋白70(HSP70)水平变化,分析NF‑κB、MGB1、HSP70与脑神经和心肌损伤的关系。方法选取2020年1月至2021年12月徐州医科大学附属医院收治的FS患儿60例,其中单纯型FS患儿37例作为SFS组,复杂型FS患儿23例作为CFS组;选取同期不伴惊厥的发热患儿30例,作为对照组。比较3组患儿NF‑κB、MGB1、HSP70、血清脑源性神经营养因子(BDNF)、肌酸激酶同工酶(CK‑MB)和乳酸脱氢酶(LDH)水平,采用Pearson相关分析探究NF‑κB、MGB1和HSP70与BDNF、CK‑MB和LDH的关系。结果3组BDNF、NF‑κB、MGB1、HSP70、CK‑MB和LDH比较差异均有统计学意义(P<0.05)。NF‑κB、HMGB1和HSP70与BDNF、CK‑MB和LDH均呈正相关(P<0.05)。结论FS患儿血清NF‑κB、MGB1、HSP70水平明显升高,且与患儿脑神经和心肌损伤相关。

性别决定区相关高迁移率族盒蛋白4在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨性别决定区相关高迁移率族盒蛋白4(SOX4)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及临床意义。方法应用荧光定量聚合酶链反应和免疫组化染色测定63例NSCLC患者肿瘤组织及癌旁正常组织中SOX4 mRNA和蛋白表达情况,分析其与临床病理特征之间的关系。结果SOX4 mRNA在NSCLC肿瘤组织和癌旁正常组织中的表达水平分别为1.25±0.72和0.58±0.52,比较差异有统计学意义(t=10.419,P<0.001)。SOX4蛋白在NSCLC肿瘤组织和癌旁正常组织中的高表达率分别为60.3%(38/63)和30.2%(19/63),差异有统计学意义(χ^(2)=11.565,P<0.001)。肿瘤组织中SOX4表达与NSCLC分化程度(χ^(2)=9.839,P=0.007)、临床分期(χ^(2)=10.030,P=0.002)、淋巴结转移(χ^(2)=10.240,P<0.001)有关。结论SOX4在NSCLC肿瘤组织中的高表达,且高表达多见于病情严重患者。

miR-320通过下调SRY相关高迁移率族蛋白4的表达抑制人脐静脉内皮细胞内皮间质转化

目的探讨miR-320对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)内皮间质转化(EndMT)的影响及其调控机制。方法用miR-320 mimics或miR-320 inhibitor处理HUVEC。Western blot检测内皮细胞标记物血小板内皮细胞黏附分子1(CD31)、血管内皮钙黏蛋白(VE-Cadherin)及间质细胞标记物α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)的表达;划痕实验、Transwell实验检测miR-320对HUVEC迁移的影响;罗丹明鬼笔环肽染色检测miR-320对HUVEC细胞骨架的影响;噻唑蓝法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期;Western blot检测miR-320对SRY相关高迁移率族蛋白4(SOX4)表达的影响。结果miR-320 mimics上调HUVEC的VE-Cadherin、CD31表达,下调Vimentin、α-SMA表达;miR-320 mimics使HUVEC细胞骨架微丝变细,应力纤维减少,细胞迁移能力减弱,但增殖能力无明显改变。miR-320 inhibitor下调HUVEC的VE-Cadherin、CD31表达,上调Vimentin、α-SMA表达;miR-320 inhibitor使HUVEC微丝增粗,应力纤维增多,细胞迁移能力增强。miR-320 mimics下调SOX4的表达,miR-320 inhibitor上调SOX4的表达。结论miR-320通过下调SOX4的表达抑制HUVEC的EndMT。

微小RNA-23通过靶向调节SRY相关高迁移率族盒蛋白-5的表达显著抑制脑垂体腺瘤细胞的增殖

目的观察微小RNA（miRNA，miR）乞3靶向调控SRY相关高迁移率族盒蛋白-5（SOX5）的表达及其对脑垂体腺瘤细胞增殖的影响。方法将miR-23mimic及阴性对照（NC）采用Lipofectamine脂质体法转染至脑垂体腺瘤细胞，并记为miR-23mimic组和NC组，以未转染的脑垂体腺瘤细胞作为对照组。转染后，采用实时荧光定量聚合酶链反应（VQ．PCR）法检测各组细胞miR-23和SOX5mRNA的表达量，Westernblot检测各组细胞SOX5的蛋白水平，噻唑蓝（MTI）法检测的各组细胞增殖活性，采用荧光素酶报告实验检测miR-23对SOX5的靶向调控作用，过表达SOX5与miR-23mimic共转染后检测细胞增殖活性。结果FQ-PCR检测结果显示，转染48h后miR-23mimic组的miR-23的表达水平（0．54±0．13）低于对照组（1．00，P=0．001）和NC组（1．03±0．09，P=0．000），差异有统计学意义；miR-23mimic组增殖活性与其余两组比较，转染24、48、72、96h后的脑垂体腺瘤细胞的增殖能力均降低（A24h=0．47±0．04，A48h=0．52±0.05，A72 h=0．54±0．05，A96h=0．55±0．06，与对照组比较，P1=0．036，P2=0．019，P=0．006，P4=0．000）。荧光素酶报告基因实验表明miR-23可靶定结合SOX5mRNA3’端非编码区（3’UTR）。PcDNA-SOX5与miR-23mimic共转染后，经细胞增殖检测显示，过表达SOX5可抵抗miR-23mimic引起的细胞增殖抑制作用。结论miR-23可靶向下调SOX5的表达显著抑制脑垂体腺瘤细胞的增殖。

微小RNA-139-3p靶向调控性别决定区相关高迁移率族盒蛋白4减轻心肌细胞氧化应激损伤

目的研究微小RNA(miR)-139-3p对H_(2)O_(2)诱导的大鼠心肌细胞系H9c2细胞氧化应激的影响及其可能机制。方法分别将miR-139-3p模拟物(mimics)及其阴性对照(miR-NC)、性别决定区相关高迁移率族盒蛋白4(Sox4)过表达载体(pc-Sox4)及其对照(pcDNA3.1)转染H9c2细胞,细胞共分为6组:对照组、H_(2)O_(2)组、mimic组(转染mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、pcDNA3.1组(转染mimics和pcDNA3.1)和pc-Sox4组(转染mimics和pc-Sox4),除对照组外的其他细胞均在转染后建立H_(2)O_(2)诱导的H9c2细胞氧化应激损伤模型。细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测H9c2细胞活力;比色法检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)的含量;原位缺口末端标记法(TUNEL)染色检测H9c2细胞凋亡;蛋白质印迹法(Western blot)检测Sox4表达;荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-139-3p表达水平;生物信息学网站预测miR-139-3p与Sox4的互补结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证两者之间的靶向关系。各组间差异比较采用方差分析。结果H_(2)O_(2)组H9c2细胞miR-139-3p水平低于对照组(0.28±0.03比1.00±0.01,t=11.484,P<0.05),miR-139-3p过表达后mimics组细胞活力高于miR-NC组(0.71±0.07比0.44±0.04,t=7.348,P<0.05)、LDH水平低于miR-NC组[(48.21±6.38)U/L比(69.76±7.32)U/L,t=4.759,P<0.05]、细胞凋亡率低于miR-NC组[(21.31±4.02)%比(47.28±5.69)%,t=8.851,P<0.05]。使用TargetScan生物预测网站预测和双荧光素酶报告基因实验证实Sox4是miR-139-3p的靶基因,同时miR-139-3p上调使mimic组Sox4蛋白低于miR-NC组(2.54±0.41比5.38±0.73,t=4.212,P<0.05)。Sox4过表达逆转了miR-139-3p对H_(2)O_(2)诱导的细胞损伤的作用,pc-Sox4组Sox4蛋白表达高于pc-DNA3.1组(5.25±0.71比2.61±0.47,t=4.212,P<0.05)、细胞活力低于pc-DNA3.1组(0.45±0.07比0.69±0.08,t=7.788,P<0.05)、LDH水平高于pc-DNA3.1组[(68.62±7.55)U/L比(44.76±5.21)U/L,t=9.368,P<0.05],细胞凋亡率高于pc-DNA3.1组[(41.24±7.36)%比(24.76±4.28)%,t=9.578,P<0.05]。结论H_(2)O_(2)处理的心肌细胞中miR-139-3p表达下调,miR-139-3p表达上调可通过抑制Sox4减轻H_(2)O_(2)诱导的心肌细胞氧化应激损伤。

高迁移率族盒转录因子1与乳腺癌相关性的生物信息学分析

目的分析高迁移率族(high-mobility group,HMG)盒转录因子1(HMG-box transcription factor 1,HBP1)与乳腺癌的相关性。方法通过生物信息学方法分析HBP1基因在乳腺癌中的突变情况、HBP1基因表达量及其与乳腺癌预后的相关性、HBP1基因共表达基因及其与HBP1基因表达的相关性。结果乳腺癌中HBP1基因整体突变率为0.00%,HBP1表达水平明显低于正常组织(P<0.01),且表达水平与乳腺癌预后呈正相关(P<0.001),与HBP1共同发挥生物学功能的相关基因有BTG1、CREBBP和SH3BGRL,在乳腺癌中,HBP1与BTG1、CREBBP表达呈正相关(P<0.01),与SH3BGRL3表达呈负相关(P<0.01)。结论HBP1基因的表达影响乳腺癌的发生发展,并与乳腺癌预后呈正相关。

HMGA2、Ki-67和MMP-9在恶性星形细胞瘤中的表达及其相关性

目的:探讨HMGA2、Ki-67和MMP-9在恶性星形细胞瘤中的表达及其与肿瘤细胞侵袭性的关系。方法:选取2010年3月至2013年4月在我院神经外科手术切除且保存完整的原发性脑星形细胞瘤标本86例,同时选取10例正常脑组织作为对照,采用免疫组化SP法对组织中HMGA2、Ki-67和MMP-9蛋白表达情况进行检测,利用RT-PCR定量检测HMGA2、Ki-67和MMP-9基因m RNA表达情况。结果:HMGA2、Ki-67和MMP-9蛋白均随病理级别增加阳性表达率增加,病理级别越高,阳性表达率越高,差异均具有统计学意义(P<0.05);Spearman相关分析显示,HMGA2蛋白阳性表达与Ki-67和MMP-9表达均呈正相关(r1=0.397,r2=0.463,P<0.05),与星形细胞瘤病理级别呈正相关(P<0.01);HMGA2、Ki-67和MMP-9基因在正常脑组织和不同病理级别星形细胞瘤中表达水平比较差异均具有统计学意义(P<0.05),经LSD-t组间两两比较,各组之间差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:MGA2、Ki-67和MMP-9基因与星形细胞瘤恶性程度和细胞侵袭力密切相关,可以作为判定患者预后的敏感指标。

肝癌组织性别决定区相关高迁移率族盒蛋白4与β-连环蛋白的表达及其对术后早期复发的影响

目的探讨肝癌中性别决定区相关高迁移率族盒蛋白4（SOX4）及β-连环蛋白（β-catenin）的表达相关性及其对肝癌术后早期复发的影响。方法 应用免疫组织化学技术检测40例术后复发和40例无术后早期复发肝癌及20例正常肝脏组织中SOX4及β-catenin的表达；Kaplan-Meier分析SOX4及β-catenin表达水平与肝癌患者的预后。结果SOX4在早期复发肝癌中的表达高于无早期复发肝癌和正常肝组织（65.0%比37.5%，P＝0.014，65.0%比15.0%，P＝0.000）；β-catenin在早期复发肝癌中的表达高于无早期复发肝癌和正常肝组织（70.0%比52.5%，P＝0.041，70.0%比5.0%，P＝0.000）；SOX4（P＝0.037）及β-catenin（P＝0.006）表达水平与肝癌微血管侵犯密切相关；免疫组织化学和Spearman等级非参数相关分析显示，SOX4与β-catenin的表达呈正相关（r＝0.250，P＝0.026）；SOX4及β-catenin表达水平与肝癌术后早期复发密切相关，其表达水平越高，患者的无瘤生存期和生存期越短。结论在早期复发肝癌中SOX4与β-catenin表达明显增高，且两者表达呈正相关，其表达水平与肝癌术后早期复发密切相关。

Y染色体上的性别决定区相关高迁移率族盒蛋白-5对骨肉瘤细胞MG63增殖的影响

目的观察骨囊肿与骨肉瘤组织中Y染色体上的性别决定区相关高迁移率族盒蛋白-5（SOX-5）的表达，探讨SOX-5对骨肉瘤细胞MG63增殖的影响。方法通过反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测骨囊肿与骨肉瘤组织中的SOX-5表达，进而通过RNA干扰降低SOX-5在骨肉瘤细胞MG63中的表达，再采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法分别检测干扰后0、24、48、72h的细胞增殖率并分别与对照组比较；流式细胞分析评估细胞周期分布，Westernblot检测干扰组和对照组细胞周期调控蛋白细胞周期蛋白依赖性激酶2（CDK2）和细胞分裂周期蛋白25A（CDC25A）的表达水平。结果与骨囊肿组织比较，SOX-5mRNA在骨肉瘤组织显著上升（P〈0．001）。RNA干扰后的骨肉瘤细胞的增殖明显降低（P〈0．01），SOX-5干扰组的G0／G1期细胞比例从（52．80±1．43）％增加至（66．71±0．62）％（P〈0．01），而S期细胞比例从（30．72±1．72）％下降至（17．27±3．15）％（P〈0．01）。SOX-5干扰组的CDK2和CDC25A表达均显著降低（P〈0．01），SOX-5的低表达降低了G1／S期的细胞周期过渡。结论SOX-5在骨肉瘤细胞中高表达，它能促进肿瘤细胞的增殖。

高迁移率族蛋白1及基质金属蛋白酶-9在子宫内膜癌中的阳性表达率及相关性分析

目的探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在子宫内膜癌中的阳性表达率,并分析其相关性。方法选取2015年2月-2016年10月的子宫内膜癌患者60例,取其癌变组织作为子宫内膜癌组,同时取其癌旁正常组织作为癌旁组。另选取同期行子宫切除术的单纯性子宫内膜增生症患者60例作为对照组。检测3组HMGB1及MMP-9阳性表达率并进行比较,分析子宫内膜癌患者HMGB1及MMP-9阳性表达率与年龄、肿瘤直径、是否绝经、FIGO分期、淋巴结转移、分化程度、病理类型和浸润程度的关系,分析HMGB1表达及MMP-9表达的相关性。结果 3组HMGB1和MMP-9阳性率比较差异均有统计学意义(P<0.05)。子宫内膜癌组HMGB1阳性表达率显著高于癌旁组和对照组(P<0.05),子宫内膜癌组MMP-9阳性表达率显著高于癌旁组和对照组(P<0.05)。子宫内膜癌组HMGB1及MMP-9阳性表达率与年龄、肿瘤直径、是否绝经无关(P>0.05),与FIGO分期、淋巴结转移、分化程度、病理类型和浸润程度有关(P<0.05)。经Spearman统计分析,HMGB1表达及MMP-9表达在子宫内膜癌患者中呈正相关(r=0.558,P=0.021)。结论 HMGB1及MMP-9在子宫内膜癌患者中呈高表达,二者可能参与了子宫内膜癌的发生和发展。子宫内膜癌患者HMGB1及MMP-9阳性表达率与FIGO分期、淋巴结转移、分化程度、病理类型和浸润程度有关,HMGB1表达及MMP-9表达在子宫内膜癌患者中呈正相关。

结直肠癌组织中HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白表达及其临床意义

目的探讨结直肠癌组织中高迁移率族蛋白B2(HMGB2)、黑色素瘤相关抗原-A9(MAGE-A9)、DNA错配修复基因(MMR)蛋白表达情况,以及其在评估患者预后中的临床价值。方法选取52例结直肠癌患者作为研究对象,术中采集所有患者肿瘤标本及癌旁组织标本,检测HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白表达水平,并分析各指标表达情况与病理特征、预后间的关系。结果肿瘤组织内HMGB2、MAGE-A9、MMR阳性表达高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤分期Ⅲ期、分化程度低分化、淋巴结转移患者HMGB2、MAGE-A9、MMR阳性表达率高于Ⅰ期、Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移患者,差异有统计学意义(P<0.05)。随访3年,52例患者存活率为71.15%(37/52);HMGB2阳性组存活率[61.76%(21/34)]低于HMGB2阴性组[88.89%(16/18)],差异有统计学意义(χ^(2)=4.219,P=0.040);MAGE-A9阳性组存活率[58.62%(17/29)]低于MAGE-A9阴性组[86.96%(20/23)],差异有统计学意义(χ^(2)=5.018,P=0.025);MMR阳性组存活率[52.00%(13/25)]低于MMR阴性组[88.89%(24/27)],差异有统计学意义(χ^(2)=8.606,P=0.003)。结论HMGB2、MAGE-A9、MMR在结直肠癌中呈高表达状态,其表达与肿瘤分期、分化程度、淋巴结转移关系密切,且不同表达患者存活率存在较大差异,可作为评估预后的重要指标。

Myo、Gas6、SOX9 mRNA在AMI患者中的表达意义及在PCI术后联合检测对预后的评估价值

目的探讨肌红蛋白(Myo)、生长停滞特异性蛋白6(Gas6)、SRY相关高迁移率族蛋白9(SOX9)在急性心肌梗死(AMI)患者中的表达意义,同时将患者预后经皮冠状动脉介入治疗(PCI)联合检测评估价值。方法选择2020年1月至2021年6月期间接收的AMI患者,共计166例,并将其纳入研究组,同时选取健康志愿者,将其纳入对照组,共计90例。酶联免疫吸附法测定血清Myo、Gas6水平,SOX9 mRNA分离试剂盒提取RNA检测;根据患者住院期间是否发生心血管不良事件(MACCE)将研究组患者分为MACCE组和非MACCE组;对比研究组和对照组Myo、Gas6、SOX9 mRNA表达情况;对比Myo、Gas6、SOX9 mRNA在AMI患者PCI术前后中表达情况;单因素/多因素分析MACCE组和非MACCE组资料临床差异;分析Myo、Gas6、SOX9 mRNA联合对AMI预后评估价值。结果相较于对照组,研究组Myo和Gas6明显较高,SOX9 mRNA表达明显较低(P<0.05);术后,研究组患者Myo、Gas6表达明显降低,SOX9 mRNA明显升高(P<0.05);MACCE组Myo和Gas6明显高于非MACCE组,SOX9 mRNA表达明显低于非MACCE组(P<0.05)。Logistic回归模型结果显示年龄大、术后出血、Myo和Gas6表达高、SOX9 mRNA表达低是影响经PCI治疗AMI患者发生MACCE独立危险因素(P<0.05)。Myo、Gas6、SOX9 mRNA联合评估AMI预后受试者工作特征(ROC)曲线下面积为0.936,具有较高的特异度以及敏感度,且显著高于单独Myo、Gas6、SOX9 mRNA检测ROC曲线下面积为0.706、0.696和0.711(Z=2.261,P<0.05)。结论对于AMI患者而言,其Myo和Gas6表达明显较高,SOX9 mRNA表达明显降低,而经PCI术治疗可有效改善患者Myo、Gas6和SOX9 mRNA水平;三者联合对PCI术后发生MACCE具有明显评估作用,尽早为患者提供诊疗方案,值得在临床推广应用。

SOX9调控肝星状细胞活化与增殖促进肝纤维化进展

目的探究SOX9基因对肝星状细胞活化与增殖的影响。方法通过每周三次腹腔注射15%的四氯化碳或玉米油构建肝纤维化及对照小鼠模型。HE染色、Masson染色观察小鼠肝纤维化造模情况,qPCR检测小鼠肝脏SOX9、α-SMA、Col1基因表达。用TGFβ1细胞因子诱导LX2细胞活化,qPCR检测LX2细胞活化状态及敲减SOX9基因后SOX9、α-SMA、Col1、CyclinD1、PCNA基因mRNA表达。结果HE、Masson染色表明肝纤维化模型成功构建。qPCR结果表示肝纤维化标志基因α-SMA(造模组:2.568±0.726,对照组:1.000±0.272,t=4.518,P=0.002)与Col1表达明显上升(造模组:3.125±0.775,对照组:1.000±0.398,t=5.454,P=0.001)。SOX9基因在纤维化的小鼠肝脏中也显著上升(造模组:1.986±0.634,对照组:1.000±0.288,t=3.126,P=0.014)。在活化的LX2细胞中SOX9基因表达显著上调(活化组:1.718±0.395,对照组:1.000±0.155,t=3.783,P=0.005),敲减SOX9基因后胶原合成基因α-SMA(敲减组:0.621±0.142,对照组:1.000±0.188,t=3.590,P=0.007)与Col1(敲减组:0.558±0.170,对照组:1.000±0.130,t=4.608,P=0.002)以及增殖相关基因CyclinD1(敲减组:0.614±0.106,对照组:1.000±0.166,t=4.392,P=0.002)和PCNA(敲减组:0.525±0.138,对照组:1.000±0.234,t=3.897,P=0.005)表达明显下降,肝星状细胞活化与增殖被明显抑制。结论SOX9基因在肝纤维化小鼠肝脏中表达明显上升,敲减SOX9基因可以明显减轻肝星状细胞的活化,可能成为治疗肝纤维化的靶点。

SOX9通过Wnt/β-catenin途径驱动非小细胞肺癌A549细胞的上皮-间充质转化

目的:探究SRY相关的高迁移率族盒9(SOX9)通过Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)途径促进非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞上皮-间充质转化(EMT)的机制。方法:将A549细胞分为OE-NC组、OE-SOX9组、OE-SOX9+XAV-939组。其中OESOX9组通过转染SOX9pcDNA质粒上调SOX9的表达水平;OE-SOX9+XAV-939组在转染SOX9pcDNA质粒的同时在培养基中加入β-catenin抑制剂XAV-939(1.0μmol/L)。用qPCR检测SOX9 mRNA表达水平,CCK-8法检测A549细胞增殖能力,划痕愈合实验检测A549细胞迁移能力,Transwell小室实验检测A549细胞的侵袭能力,WB实验检测SOX9、β-catenin、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、γ-连环蛋白(γ-catenin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)表达水平。结果:转染后OE-SOX9组和OE-SOX9+XAV-939组的SOX9 mRNA和蛋白的水平显著高于OE-NC组(均P<0.05),且OE-SOX9组和OE-SOX9+XAV-939组比较无显著差异(P>0.05)。OE-SOX9组细胞增殖、侵袭和迁移能力显著高于OE-NC组,而OE-SOX9+XAV-939组显著低于OE-SOX9组(均P<0.05)。OE-SOX9组β-catenin蛋白水平显著高于OE-NC组,而OE-SOX9+XAV-939组β-catenin蛋白的水平低于OE-SOX9组(均P<0.05)。与OE-NC组比较,OE-SOX9组的上皮细胞表型标志物E-cadherin、γ-catenin水平下调并且间充质细胞表型标志物N-cadherin、vimentin上调,而OE-SOX9+XAV-939组E-cadherin、y-catenin高于OE-SOX9组,且N-cadherin、vimentin低于OE-SOX9组(均P<0.05)。结论:SOX9可通过激活Wnt/β-catenin通路促进NSCLCA549细胞的增殖、迁移和EMT。

胆囊良恶性病变组织中HMGA2和CD9表达及意义

目的研究胆囊良恶性病变组织中HMGA2和CD9表达水平及其临床病理意义。方法 108例胆囊腺癌、46例癌旁组织、15例腺瘤和35例慢性胆囊炎手术切除标本常规制作石蜡包埋切片,HMGA2和CD9染色方法为EnVision免疫组化法。结果胆囊腺癌HMGA2表达阳性率明显高于癌旁组织(χ2=16.13,P<0.01)、腺瘤性息肉(χ2=8.19,P<0.01)和慢性胆囊炎(χ2=21.41,P<0.01);胆囊腺癌CD9表达阳性率明显低于癌旁组织(χ2=8.76,P<0.01)、腺瘤性息肉(χ2=3.96,P<0.05)和慢性胆囊炎(χ2=14.31,P<0.01);HMGA2表达阳性和(或)CD9表达阴性的良性病例的胆囊上皮均呈中至重度不典型增生。高分化、肿块最大径<2 cm、无淋巴结转移、未侵犯周围组织的病例HMGA2表达阳性率明显低于低分化、肿块最大径≥2 cm、淋巴结转移和侵犯周围组织的病例(P<0.05或P<0.01);高分化腺癌、肿块最大径<2 cm、无淋巴结转移和未侵犯周围组织的病例CD9表达阳性率明显高于低分化腺癌、肿块最大径≥2 cm、淋巴结转移和侵犯周围组织病例(P<0.05或P<0.01)。经Kaplan-Meier生存分析发现HMGA2表达阳性病例术后生存期明显低于阴性表达病例(P=0.020),但CD9表达阳性病例术后生存期明显高于阴性表达病例(P=0.019);Cox多变量回归分析显示HMGA2阳性表达和(或)CD9表达阴性是反映胆囊腺癌预后不良的一个重要指标。结论 HMGA2和CD9表达与胆囊腺癌发生、临床生物学行为及预后有密切关系。

MMP3与Sox9基因对人椎间盘退变髓核细胞调控作用

目的探讨基质金属蛋白酶3(MMP3)基因与性别决定相关高迁移率簇蛋白盒基因9(Sox9)调控在人椎间盘退变髓核细胞中的作用。方法构建MMP3与Sox9慢病毒表达载体,感染人退变髓核细胞,按照处理方式不同分为4组,分别为空白对照组(A组)、MMP3沉默转染组(B组)、Sox9过表达组(C组)以及MMP3沉默+Sox9过表达共转组(D组),各组髓核细胞置于恒温培养箱中培养,定期换液。72h后,通过荧光定量PCR方法检测转染人退变髓核细胞Ⅱ型胶原、蛋白多糖mRNA的表达,通过Western Blot方法检测转染人退变髓核细胞Ⅱ型胶原、蛋白多糖蛋白的表达。结果 B、C、D组蛋白多糖、Ⅱ型胶原蛋白及mRNA表达水平与A组比较明显增高,差异具有显著性(F=84.50~413.09,q=4.57~49.13,P<0.01);D组蛋白多糖、Ⅱ型胶原蛋白及mRNA表达水平与B、C组比较,差异具有显著性(q=13.72~30.24,P<0.01)。结论 MMP3基因沉默、Sox9基因过表达可以促进人退变髓核细胞蛋白多糖、Ⅱ型胶原的分泌,延缓椎间盘退变,且二者之间具有协同作用。

慢性乙型肝炎患者外周血SOX4基因表达水平与临床特征及预后之间的相关性分析

目的:研究慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血性别决定区相关高迁移率族盒蛋白4(SOX4)基因表达水平与临床特征及预后之间的相关性。方法:选取2017年9月-2018年10月于本院收治的97例慢性乙型肝炎患者作为病例组,另外选同期体检健康者30例为正常组,随访2年,比较两组的SOX4、核转录因子阴阳1(YY1)表达水平,采用Spearman法分析CHB患者外周血SOX4 mRNA与临床特征的相关性,采用Cox风险模型分析SOX4表达与CHB患者临床病理特征的关系,采用Kaplan-Meier法分析CHB患者2年生存率曲线。结果:病例组SOX4阳性表达率为41.24%,高于正常组的16.67%(P<0.05);病例组的SOX4 mRNA、YY1 mRNA水平均高于正常组(P<0.05);不同肝功能的CHB患者SOX4、YY1 mRNA水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);CHB患者YY1、Child-Pauh分级均与SOX4水平呈正相关(r=0.562,0.438,P<0.05);不同病理分期、病理分级、肝硬化和YY1表达水平的CHB患者的SOX4阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05);肝硬化(RR=1.610)、SOX4高表达(RR=1.473)是影响CHB患者2年疾病进展的独立因素(P<0.05);SOX4低表达患者的2年生存率高于高表达患者(χ^(2)=4316,P=0.038)。结论:SOX4在CHB患者的表达高于健康人群,且高表达SOX4的CHB患者2年生存率低于低表达患者,单因素、多因素的分析结果均显示SOX4高表达是影响CHB患者预后的危险因素,提示SOX4可能参与CHB的发生、发展过程。