微小RNA-23通过靶向调节SRY相关高迁移率族盒蛋白-5的表达显著抑制脑垂体腺瘤细胞的增殖

目的观察微小RNA（miRNA，miR）乞3靶向调控SRY相关高迁移率族盒蛋白-5（SOX5）的表达及其对脑垂体腺瘤细胞增殖的影响。方法将miR-23mimic及阴性对照（NC）采用Lipofectamine脂质体法转染至脑垂体腺瘤细胞，并记为miR-23mimic组和NC组，以未转染的脑垂体腺瘤细胞作为对照组。转染后，采用实时荧光定量聚合酶链反应（VQ．PCR）法检测各组细胞miR-23和SOX5mRNA的表达量，Westernblot检测各组细胞SOX5的蛋白水平，噻唑蓝（MTI）法检测的各组细胞增殖活性，采用荧光素酶报告实验检测miR-23对SOX5的靶向调控作用，过表达SOX5与miR-23mimic共转染后检测细胞增殖活性。结果FQ-PCR检测结果显示，转染48h后miR-23mimic组的miR-23的表达水平（0．54±0．13）低于对照组（1．00，P=0．001）和NC组（1．03±0．09，P=0．000），差异有统计学意义；miR-23mimic组增殖活性与其余两组比较，转染24、48、72、96h后的脑垂体腺瘤细胞的增殖能力均降低（A24h=0．47±0．04，A48h=0．52±0.05，A72 h=0．54±0．05，A96h=0．55±0．06，与对照组比较，P1=0．036，P2=0．019，P=0．006，P4=0．000）。荧光素酶报告基因实验表明miR-23可靶定结合SOX5mRNA3’端非编码区（3’UTR）。PcDNA-SOX5与miR-23mimic共转染后，经细胞增殖检测显示，过表达SOX5可抵抗miR-23mimic引起的细胞增殖抑制作用。结论miR-23可靶向下调SOX5的表达显著抑制脑垂体腺瘤细胞的增殖。

普鲁卡因通过调节SRY相关高迁移率族盒蛋白9抑制乳腺癌细胞增殖并诱导凋亡的机制研究

目的探讨普鲁卡因(PCA)通过调节SRY相关高迁移率族盒蛋白9(SOX9)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的作用机制。方法以不同浓度(0、2.5、5.0、10.0 mmol/L)PCA处理MCF-7细胞,采用MTT法、流式细胞术、实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测细胞增殖、凋亡及细胞中SOX9表达情况。采用MTT法和流式细胞术检测转染SOX9 siRNA对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响。过表达SOX9联合10.0 mmol/LPCA处理48 h,检测细胞增殖和凋亡情况。结果培养48、72 h时,随着PCA浓度增加,MCF-7细胞光密度(OD)490值逐渐下降(P<0.05)。培养48h,细胞凋亡率随PCA浓度的增加而提高,nRNA及SOX9蛋白水平均随着PCA浓度增加而下降(P<0.05)。si-SOX9组MCF-7细胞中SOX9蛋白表达量及OD490值均低于si-con组,凋亡率高于si-con组(P<0.05)。PCA组MCF-7细胞中SOX9蛋白表达量及OD49。值均低于Control组,凋亡率高于Control组(P<0.05)。PCA+pcDNA-SOX9组MCF-7细胞中SOX9蛋白表达量及OD49。值均高于PCA+pcDNA组,凋亡率低于PCA+pcDNA组(P<0.05)。结论 PCA可通过调控SOX9表达抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,同时促进细胞凋亡。

敲减SRY相关高迁移率族盒蛋白9基因下调Wnt/β-连环蛋白信号对气道肉芽组织成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨敲减SRY相关高迁移率族盒蛋白9(SOX9)基因下调Wnt/β-连环蛋白信号对气道肉芽组织成纤维细胞增殖和凋亡的影响。方法应用基因芯片筛选出气道肉芽组织和气道正常黏膜组织差异表达的基因,用R软件进行分析,挑选最显著的差异基因SOX9作为研究对象,并借助逆转录聚合酶链反应技术验证气道肉芽组织及气道正常黏膜组织SOX9的表达。提取气道肉芽组织成纤维细胞,通过构建shRNA-SOX9慢病毒载体转染气道肉芽组织成纤维细胞,稳定感染shRNA-SOX9慢病毒的细胞标记为shRNA-SOX9(shRNA-SOX9组),稳定感染shRNA阴性对照的慢病毒的细胞标记为阴性对照组,无质粒载体加入的细胞设定为空白对照组。利用实时定量逆转录聚合酶链反应、蛋白质印迹法检测细胞内SOX9和Wnt/β-连环蛋白信号通路上下游基因表达情况;使用细胞计数试剂盒8检测成纤维细胞的活力;流式细胞术检测细胞凋亡率,组间做比较。结果SOX9在气道肉芽组织中呈高表达,shRNA-SOX9慢病毒转染气道肉芽组织成纤维细胞后,SOX9和Wnt/β-连环蛋白信号通路相关基因表达均低于阴性对照组和空白对照组;敲减SOX9后,气道肉芽组织成纤维细胞的增殖能力下降,转染24、48、72 h后,shRNA-SOX9组气道肉芽组织成纤维细胞增殖抑制率明显高于阴性对照组和空白对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。shRNA-SOX9组细胞凋亡率高于空白对照组和阴性对照组[(16.9±2.0)%比(9.1±1.2)%、(10.1±1.8)%],3组间差异有统计学意义(F=3.854,P=0.021)。结论敲减SOX9可以通过调节Wnt/β-连环蛋白信号通路抑制气道肉芽组织成纤维细胞的增殖、促进凋亡。

Y染色体上的性别决定区相关高迁移率族盒蛋白-5对骨肉瘤细胞MG63增殖的影响

目的观察骨囊肿与骨肉瘤组织中Y染色体上的性别决定区相关高迁移率族盒蛋白-5（SOX-5）的表达，探讨SOX-5对骨肉瘤细胞MG63增殖的影响。方法通过反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测骨囊肿与骨肉瘤组织中的SOX-5表达，进而通过RNA干扰降低SOX-5在骨肉瘤细胞MG63中的表达，再采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法分别检测干扰后0、24、48、72h的细胞增殖率并分别与对照组比较；流式细胞分析评估细胞周期分布，Westernblot检测干扰组和对照组细胞周期调控蛋白细胞周期蛋白依赖性激酶2（CDK2）和细胞分裂周期蛋白25A（CDC25A）的表达水平。结果与骨囊肿组织比较，SOX-5mRNA在骨肉瘤组织显著上升（P〈0．001）。RNA干扰后的骨肉瘤细胞的增殖明显降低（P〈0．01），SOX-5干扰组的G0／G1期细胞比例从（52．80±1．43）％增加至（66．71±0．62）％（P〈0．01），而S期细胞比例从（30．72±1．72）％下降至（17．27±3．15）％（P〈0．01）。SOX-5干扰组的CDK2和CDC25A表达均显著降低（P〈0．01），SOX-5的低表达降低了G1／S期的细胞周期过渡。结论SOX-5在骨肉瘤细胞中高表达，它能促进肿瘤细胞的增殖。

肝癌组织性别决定区相关高迁移率族盒蛋白4与β-连环蛋白的表达及其对术后早期复发的影响

目的探讨肝癌中性别决定区相关高迁移率族盒蛋白4（SOX4）及β-连环蛋白（β-catenin）的表达相关性及其对肝癌术后早期复发的影响。方法 应用免疫组织化学技术检测40例术后复发和40例无术后早期复发肝癌及20例正常肝脏组织中SOX4及β-catenin的表达；Kaplan-Meier分析SOX4及β-catenin表达水平与肝癌患者的预后。结果SOX4在早期复发肝癌中的表达高于无早期复发肝癌和正常肝组织（65.0%比37.5%，P＝0.014，65.0%比15.0%，P＝0.000）；β-catenin在早期复发肝癌中的表达高于无早期复发肝癌和正常肝组织（70.0%比52.5%，P＝0.041，70.0%比5.0%，P＝0.000）；SOX4（P＝0.037）及β-catenin（P＝0.006）表达水平与肝癌微血管侵犯密切相关；免疫组织化学和Spearman等级非参数相关分析显示，SOX4与β-catenin的表达呈正相关（r＝0.250，P＝0.026）；SOX4及β-catenin表达水平与肝癌术后早期复发密切相关，其表达水平越高，患者的无瘤生存期和生存期越短。结论在早期复发肝癌中SOX4与β-catenin表达明显增高，且两者表达呈正相关，其表达水平与肝癌术后早期复发密切相关。

SOX9通过Wnt/β-catenin途径驱动非小细胞肺癌A549细胞的上皮-间充质转化

目的:探究SRY相关的高迁移率族盒9(SOX9)通过Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)途径促进非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞上皮-间充质转化(EMT)的机制。方法:将A549细胞分为OE-NC组、OE-SOX9组、OE-SOX9+XAV-939组。其中OESOX9组通过转染SOX9pcDNA质粒上调SOX9的表达水平;OE-SOX9+XAV-939组在转染SOX9pcDNA质粒的同时在培养基中加入β-catenin抑制剂XAV-939(1.0μmol/L)。用qPCR检测SOX9 mRNA表达水平,CCK-8法检测A549细胞增殖能力,划痕愈合实验检测A549细胞迁移能力,Transwell小室实验检测A549细胞的侵袭能力,WB实验检测SOX9、β-catenin、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、γ-连环蛋白(γ-catenin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)表达水平。结果:转染后OE-SOX9组和OE-SOX9+XAV-939组的SOX9 mRNA和蛋白的水平显著高于OE-NC组(均P<0.05),且OE-SOX9组和OE-SOX9+XAV-939组比较无显著差异(P>0.05)。OE-SOX9组细胞增殖、侵袭和迁移能力显著高于OE-NC组,而OE-SOX9+XAV-939组显著低于OE-SOX9组(均P<0.05)。OE-SOX9组β-catenin蛋白水平显著高于OE-NC组,而OE-SOX9+XAV-939组β-catenin蛋白的水平低于OE-SOX9组(均P<0.05)。与OE-NC组比较,OE-SOX9组的上皮细胞表型标志物E-cadherin、γ-catenin水平下调并且间充质细胞表型标志物N-cadherin、vimentin上调,而OE-SOX9+XAV-939组E-cadherin、y-catenin高于OE-SOX9组,且N-cadherin、vimentin低于OE-SOX9组(均P<0.05)。结论:SOX9可通过激活Wnt/β-catenin通路促进NSCLCA549细胞的增殖、迁移和EMT。

miRNA-218-5p通过HMGB1信号通路抑制RAW264.7细胞源性泡沫细胞炎症反应

目的:探讨微小RNA-218-5p(miRNA-218-5p)通过调节高迁移率族盒蛋白1(HMGB1)信号通路对RAW264.7细胞源性泡沫细胞炎症反应的影响。方法:将RAW264.7细胞分为对照组、模型组、miRNA mimics组及miRNA NC组。对照组细胞正常培养;模型组细胞采用80 mg/L氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导24 h建立泡沫细胞模型;miRNA mimics组及miRNA NC组分别转染miRNA-218-5p mimics及miRNA mimics control 24 h后再用80mg/L ox-LDL诱导24 h建立泡沫细胞模型。应用油红O染色检测各组细胞内脂质变化;试剂盒检测各组细胞中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达量;qPCR检测各组细胞中miRNA-218-5p表达量;Western Blot检测各组细胞中HMGB1、Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)p65及p-NF-κB p65蛋白水平;通过双萤光素酶报告基因实验检测miRNA-218-5p对HMGB1的靶向作用。结果:与对照组比较,模型组细胞的泡沫化程度增加,细胞中miRNA-218-5p表达量显著下降(P<0.05),细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α、HMGB1、TLR4和p-NF-κB p65水平显著上升(P<0.05);与模型组细胞相比,miRNA mimics组细胞的泡沫化程度降低,细胞中miRNA-218-5p表达量显著上升(P<0.05),细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α、HMGB1、TLR4和p-NF-κB p65水平显著下降(P<0.05)。双萤光素酶报告基因实验结果表明,miRNA-218-5p能与HMGB1 mRNA的3’端非翻译区(3’UTR)结合,抑制萤光素酶的活性。结论:miRNA-218-5p能抑制ox-LDL诱导的RAW264.7细胞泡沫化,还可通过调节HMGB1信号通路抑制RAW264.7细胞源性泡沫细胞的炎症反应。

胰腺神经内分泌肿瘤和实性假乳头状肿瘤中INSM1和SOX11的表达及意义

目的:探讨胰岛素瘤相关蛋白1(insulinoma associated protein 1,INSM1)和SRY相关高迁移率族盒蛋白11(SRY-related high-mobility group box 11,SOX11)在胰腺神经内分泌肿瘤(pancreatic neuroendocrine tumor,PNET)和实性假乳头状肿瘤(solid pseudopapillary neoplasm,SPN)中的表达及意义。方法:采用免疫组织化学方法在56例PNET、42例SPN、16例导管腺癌(ductal adenocarcinoma,DACC)和8例腺泡细胞癌(acinar cell carcinoma,ACC)中检测INSM1、SOX11、Syn、CgA、CD56、β-catenin和CD99,比较INSM1和SOX11的组合与传统标记物(Syn、CgA、CD56、β-catenin和CD99)在诊断和鉴别诊断PNET和SPN中的应用价值。结果:(1)56例PNET中,INSM1表达于肿瘤细胞及胰岛细胞核,其在肿瘤组织中的阳性表达率为91.07%(51/56);42例SPN、16例DACC和8例ACC均未见INSM1的阳性信号。INSM1在PNET中的阳性表达率与SPN、DACC和ACC相比,差异均有统计学意义(P<0.001)。(2)42例SPN中,SOX11的阳性信号位于肿瘤细胞核,其阳性表达率为92.86%(39/42);56例PNET中,SOX11的阳性表达率为8.93%(5/56),其阳性信号位于3例G 1型和2例G 3型PNET;16例DACC、8例ACC及肿瘤旁的正常胰腺组织均未见SOX11阳性信号;SOX11在SPN中的阳性表达率与PNET、DACC和ACC相比,差异均有统计学意义(P<0.001)。(3)INSM1(+)/SOX11(-)免疫表型对PNET的敏感度为85.71%,与CD56(57.14%)相比差异有统计学意义(P=0.001),与Syn(80.36%)和CgA(71.43%)相比差异无统计学意义(P>0.05);其特异度为100.00%,与Syn(42.86%)和CD56(47.62%)相比差异有统计学意义(P<0.001),与CgA(92.86%)相比差异无统计学意义(P>0.05)。INSM1(-)/SOX11(+)免疫表型对SPN的敏感度为92.86%,与β-catenin(90.48%)和CD99(85.71%)相比差异无统计学意义(P>0.05);其特异度为96.43%,与CD99(48.21%)相比差异有统计学意义(P<0.001),与β-catenin(100.00%)相比差异无统计学意义(P>0.05)。(4)在PNET和SPN中,INSM1和SOX11的表达情况与临床病理参数(患者年龄、性别、肿瘤大小、部位、分级及转移)无关(P均>0.05)。结论:在PNET和SPN中,INSM1和SOX11分别呈阳性的表达模式有助于区分两种肿瘤,两者组合在敏感度和特异度方面优于一些传统的免疫组织化学标记物。

CDX2、SOX2在浆液性卵巢癌组织中的表达及其临床意义

目的:探究卵巢浆液性肿瘤组织中尾型同源盒转录因子2(CDX2)、Y染色体性别决定区相关的高迁移率族盒蛋白2(SOX2)表达水平及其与预后关系。方法:选取2012年6月-2015年6月本院收治的卵巢浆液性癌患者84例、卵巢交界性浆液性肿瘤患者52例、卵巢良性浆液性肿瘤(卵巢浆液性囊腺瘤)患者63例,收集术中卵巢浆液性癌患者癌组织及癌旁正常组织(距病灶>5 cm),卵巢交界性浆液性肿瘤组织及卵巢良性浆液性肿瘤组织,免疫组织化学染色法检测组织中CDX2、SOX2蛋白表达;Kaplan-Meier生存曲线分析卵巢浆液性癌组织中CDX2、SOX2蛋白表达与患者预后关系;Cox回归模型分析浆液性卵巢癌患者预后影响因素。结果:癌旁正常组织、卵巢良性浆液性肿瘤组织、卵巢交界性浆液性肿瘤组织、卵巢浆液性癌组织中CDX2蛋白高表达率依次降低,SOX2蛋白高表达率依次升高(P<0.05)。与FIGO分期Ⅰ-Ⅱ期、组织学分级G1、无淋巴结转移、无远处转移、未复发患者比较,FIGO分期Ⅲ-Ⅳ期、组织学分级G2-G3、淋巴结转移、远处转移、复发患者癌组织中CDX2蛋白高表达率降低、SOX2蛋白高表达率升高(P<0.05)。卵巢浆液性癌组织中CDX2与SOX2蛋白表达呈负相关(P<0.05)。5年累积生存率,CDX2低表达患者(32.9%)低于高表达患者(71.4%),SOX2低表达患者(68.8%)高于SOX2高表达患者(21.2%)(P<0.05)。Ⅲ-Ⅳ期FIGO分期、淋巴结转移、远处转移及CDX2低表达、SOX2高表达是影响卵巢浆液性癌患者不良预后发生的独立危险因素(P<0.05)。结论:卵巢浆液性癌组织中CDX2蛋白低表达、SOX2蛋白高表达,二者可能在肿瘤进展中存在相互作用,与患者FIGO分期、组织学分级升高及复发、死亡等预后不良发生密切相关。

苦豆碱对白细胞介素-1β诱导软骨细胞损伤的作用及其机制

目的 探讨苦豆碱(aloperine,ALO)对白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导软骨细胞损伤的作用及其机制。方法 将软骨细胞随机分为(1)空白对照(Con)、IL-1β、IL-1β+ALO-L(25 mg/L)、IL-1β+ALO-M(50 mg/L)、IL-1β+ALO-H(100 mg/L)组;(2)Con、IL-1β、IL-1β+miR-NC、IL-1β+miR-16-5p组;(3)Con、IL-1β、IL-1β+si-NC、IL-1β+si-SOX5组。IL-1β组细胞加入10 ng/mL的IL-1β,Con组不进行任何处理。qRT-PCR法检测软骨细胞中miR-16-5p和SOX5基因mRNA转录水平;ELISA法检测IL-6、TNF-α和IL-1β含量;Western blot法检测Bcl-2、Bax、SOX5蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 与IL-1β组比较,IL-1β+ALO-L、IL-1β+ALO-M、IL-1β+ALO-H组软骨细胞中IL-6、TNF-α、IL-1β含量显著降低(t=5.002~20.653,P均<0.001),细胞凋亡率显著降低(t=5.473~17.371,P均<0.001),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(t=7.800~16.100,P均<0.001),Bax蛋白表达水平显著降低(t=4.993~14.311,P均<0.001);miR-16-5p基因mRNA转录水平显著升高(t=6.688~16.545,P均<0.001),SOX5基因mRNA转录水平及其蛋白表达水平均明显降低(t=4.609~15.393,P均<0.001)。与IL-1β+miRNC组比较,IL-1β+miR-16-5p组min-16-5p基因mRNA转录水平明显升高(t=17.106,P <0.001),IL-6、TNF-α、IL-1β含量显著降低(t=15.030~20.013,P均<0.001),细胞凋亡率明显降低(t=12.273,P <0.001),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(t=15.652,P <0.001),Bax蛋白表达水平显著降低(t=12.999,P <0.001)。与IL-1β+si-NC组比较,IL-1β+si-SOX5组SOX5蛋白表达水平显著降低(t=13.444,P <0.001),IL-6、TNF-α、IL-1β含量显著降低(t=14.087~17.103,P均<0.001),细胞凋亡率明显降低(t=11.991,P <0.001),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(t=13.864,P <0.001),Bax蛋白表达水平显著降低(t=11.818,P <0.001)。结论 ALO可抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡,从而降低软骨细胞损伤,其机制可能是通过调节软骨细胞中miR-16-5p和SOX5表达水平及炎症因子的分泌水平实现的。

小干扰RNA SOX5对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

[目的]探讨Y染色体上的性别决定区相关高迁移率族盒蛋白-5(SOX5)的小干扰RNA(siRNA)对胃癌细胞BGC823增殖及凋亡的影响。[方法]通过qRT-PCR和Western-blot分别检测胃癌细胞系(SGC7901,BGC823,AGS,HGC27)及正常胃上皮细胞GES-1中SOX5 mRNA和蛋白的表达情况;取对数生长周期的胃癌细胞BGC823,通过Lipofiectamine2000将设计合成的SOX5的特异性siRNA以及NC转染BGC823细胞,作为siSOX5组和NC组,不做任何处理的细胞作为空白对照组。qRT-PCR检测各组细胞中SOX5 mRNA的表达情况;Western-blot检测各组SOX5及CyclinD1、P21、Bax、Bcl-2蛋白的表达;MTT检测转染12 h、24 h、48 h、72 h后,各组细胞的增殖情况;流式细胞仪检测转染72 h后各组细胞的凋亡情况。[结果]与正常胃上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞SGC7901,BGC823,AGS,HGC27中SOX5 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05);转染siSOX5后,siSOX5组SOX5 mRNA及蛋白表达降低(P<0.05);MTT结果显示:与空白对照组和NC组相比,siSOX5组细胞增殖受到抑制,且CyclinD1蛋白表达水平显著下降,p21蛋白表达显著升高(P<0.05);流式细胞检测结果显示:与空白对照组和NC组相比,siSOX5组细胞凋亡率升高,且Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达下降(P<0.05)。[结论]干扰SOX5能够降低胃癌BGC823细胞中SOX5的表达,抑制BGC823细胞的增殖并促进凋亡。

牛蒡子苷元基于机械敏感离子通道对软骨细胞转录因子和胶原蛋白表达的影响

目的:基于机械敏感离子通道探讨牛蒡子苷元(ARG)对软骨细胞SRY相关高迁移率族盒蛋白转录因子9(SOX9)、Runt相关转录因子2(RUNX2)和胶原蛋白表达的影响。方法:分离并培养原代小鼠软骨细胞。将细胞分为空白组(常规培养基)、ARG组(10μmol/L)、瞬时受体电位香草素亚家族4(TRPV4)抑制剂组(GSK2193874,10 nmol/L)、ARG+抑制剂组(10μmol/L ARG+10 nmol/L GSK2193874)和TRPV4激动剂组(GSK1016790A,10 nmol/L),各组给予相应干预。细胞培养24 h后,免疫荧光染色检测Ⅱ型胶原蛋白(ColⅡ)表达,PCR检测Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)和ColⅡ的mRNA表达水平,Western blot检测转录因子SOX9、RUNX2及ColⅠ、ColⅡ的蛋白表达水平。结果:①免疫荧光染色观察显示,与空白组相比,ARG组、抑制剂组和ARG+抑制剂组ColⅡ蛋白表达更显著,而激动剂组较弱。与ARG组或抑制剂组相比,ARG+抑制剂组ColⅡ蛋白表达更显著。②与空白组相比,ARG组、抑制剂组和ARG+抑制剂组ColⅡmRNA表达量显著增高(P<0.05,P<0.01),ColⅠmRNA表达量明显降低(P<0.01),而激动剂组ColⅡmRNA表达量显著降低(P<0.01)。与ARG组相比,抑制剂组和ARG+抑制剂组细胞的ColⅡ和ColⅠ的mRNA表达量均显著增高(P<0.05,P<0.01),而激动剂组ColⅠmRNA表达量增高(P<0.01),ColⅡmRNA表达量降低(P<0.01)。与抑制剂组相比,ARG+抑制剂组ColⅡ和ColⅠ的mRNA表达量均显著增高(P<0.05)。③与空白组相比,ARG组ColⅡ蛋白表达量显著上调(P<0.01),ColⅠ、SOX9和RUNX2蛋白表达量降低(P<0.05,P<0.01);抑制剂组ColⅡ蛋白表达量亦明显增多(P<0.01),ColⅠ和RUNX2蛋白表达量明显降低(P<0.01);ARG+抑制剂组细胞的ColⅡ蛋白表达量显著升高(P<0.01),SOX9蛋白表达量显著降低(P<0.05),ColⅠ和RUNX2蛋白表达无明显变化(P>0.05);激动剂组ColⅡ和SOX9蛋白表达量明显降低(P<0.01),RUNX2蛋白表达量明显增高(P<0.01),ColⅠ蛋白表达量无明显变化(P>0.05)。④与ARG组相比,抑制剂组ColⅡ和ColⅠ蛋白表达量均显著增高(P<0.05,P<0.01);ARG+抑制剂组细胞的ColⅡ、ColⅠ和RUNX2蛋白表达量均明显增高(P<0.01);激动剂组ColⅡ蛋白表达量降低(P<0.01),ColⅠ和RUNX2蛋白表达量升高(P<0.01)。与抑制剂组相比,ARG+抑制剂组细胞的ColⅡ、ColⅠ和RUNX2蛋白表达量均显著增多(P<0.05),SOX9蛋白表达量明显降低(P<0.05)。结论:ARG可上调软骨细胞ColⅡ表达,抑制ColⅠ表达,调节转录因子SOX9和RUNX2,促进软骨细胞分化成熟。其作用与TRPV4抑制剂相似,两者合用对ColⅡ的调控作用更显著。

模拟步行压力下牛蒡子苷元对软骨细胞的保护机制研究

目的:探讨模拟步行压力对软骨细胞的作用及压力负荷下牛蒡子苷元(ARG)对软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白(ColⅡ)、SRY相关高迁移率族盒蛋白转录因子9(SOX9)、瞬时受体电位香草素亚家族4(TRPV4)、基质金属蛋白酶(MMPs)的影响。方法:分离并培养小鼠原代软骨细胞,制备3D培养软骨细胞水凝胶。将制备的水凝胶分为空白组、模型组、ARG组和抑制剂组。空白组不进行压力干预,使用常规培养基换液。其他3组均给予模拟步行压力(正弦波,1 Hz,20 kPa)干预2 h。压力干预同时,ARG组和抑制剂组分别给予10μmol/L ARG和10 nmol/L TRPV4抑制剂GSK2193874。收集干预后各组水凝胶提取的软骨细胞,免疫荧光染色检测ColⅡ蛋白表达,PCR检测ColⅡ、SOX9、TRPV4、MMP9、MMP13的mRNA表达水平,Western blot检测ColⅡ、SOX9、TRPV4的蛋白表达水平。结果:①免疫荧光染色观察显示,与空白组相比,模型组ColⅡ蛋白表达较少;与模型组相比,ARG组和抑制剂组ColⅡ蛋白表达明显增多。②与空白组相比,模型组ColⅡ、SOX9、TRPV4的mRNA表达量显著降低(P<0.01),MMP9和MMP13的mRNA表达量均显著增高(P<0.01);与模型组相比,ARG组和抑制剂组ColⅡ、SOX9、TRPV4的mRNA表达量显著增高(P<0.01),MMP9和MMP13的mRNA表达量均显著降低(P<0.01)。③与空白组相比,模型组ColⅡ和SOX9蛋白表达水平显著降低(P<0.01),TRPV4蛋白表达无明显变化;与模型组相比,ARG组和抑制剂组ColⅡ和SOX9蛋白表达水平显著增高(P<0.01),TRPV4蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论:模拟步行压力可导致软骨细胞发生趋向于软骨退化的代谢反应。模拟步行压力下,ARG和TRPV4抑制剂对软骨细胞具有保护作用,其机制可能与上调ColⅡ、SOX9表达,抑制TRPV4、MMP9和MMP13的表达有关。