灰毡毛忍冬SS基因的克隆及表达分析

[目的]克隆灰毡毛忍冬SS基因全长序列,并进行生物信息学和表达模式分析。[方法]提取灰毡毛忍冬花总RNA,通过RT-PCR和RACE技术克隆LmSS基因的全长cDNA序列;运用相关软件对该基因序列进行生物信息学分析;利用qRT-PCR测定灰毡毛忍冬茎、叶和不同花期花中该基因的相对表达量。[结果]克隆的LmSS基因开放阅读框(ORF)长度为1245 bp,编码414个氨基酸,属于亲水性蛋白,定位于细胞质中,具有典型的多聚异戊二烯基合成酶活性结构域,与其他植物SS基因具有较高同源性。LmSS基因在灰毡毛忍冬不同花期和器官中表达有组织特异性。[结论]该研究成功地克隆灰毡毛忍冬中的SS基因,为进一步研究该基因的功能奠定基础,同时为探究灰毡毛忍冬皂苷生物合成和调节机制提供了科学依据。

马铃薯可溶性淀粉合成酶SSⅢ基因克隆及生物信息学分析

用RT-PCR方法从马铃薯中克隆了可溶性淀粉合成酶SSⅢ基因的cDNA片段,序列分析表明该cDNA片段全长为3967bp,开放阅读框为3693bp,编码1230个氨基酸。核酸序列同源性分析表明,该cDNA与已发表的马铃薯SSⅢ基因(X94400)具有99%同源性,氨基酸序列同源性达98%。应用生物信息学软件对SSⅢ基因分析表明:其编码的蛋白质具有多个磷酸化位点;蛋白质二级结构预测显示,有369个氨基酸可能形成α-螺旋结构,249个氨基酸可能形成β折叠,102个氨基酸可能形成β转角,510个氨基酸可能形成无规则卷曲;通过亚细胞定位可知,它是一种含有75个氨基酸的叶绿体转运肽蛋白。

实时荧光定量PCR检测三七SS基因表达的初步实践

运用含有SYBR Green I的Real Time RT-PCR法分析SS基因在一年生三七根、茎、芦头3个部位中转录水平的相对表达差异。统计分析表明SS基因在根中的表达量最高。本研究取得了特异性高、重复性好的结果,标准曲线斜率均在-3.33～-4范围内,扩增效率均在95%～100%之间,熔解曲线分析显示产物特异性的单一峰,为Real Time RT-PCR技术用于三七植物基因的差异表达分析建立了相应的技术平台。

KiSS-1基因在胆管细胞癌的表达及临床意义

目的:研究胆管细胞癌患者Ki SS-1基因mRNA的表达和血清Kisspeptin的水平,并分析其与胆管细胞癌临床病理参数的关系。方法:选择2010年1月至2014年6月期间行胆管细胞癌手术切除的患者32例,同时收集胆管细胞癌患者癌旁组织,以GAPDH基因为参考基因,采用实时荧光定量PCR检测Ki SS-1基因在胆管细胞癌组织及癌旁组织的相对表达量;同时手术前抽取胆管细胞癌患者空腹肘静脉血,采用酶联免疫吸附法检测血清中Kisspeptin的水平,以10例健康体检者空腹肘静脉血Kisspeptin的水平作对照。分析Ki SS-1基因表达量及血清Kisspeptin的水平分别与胆管细胞癌临床病理参数(年龄、性别、发生部位、分化程度、分期、淋巴结转移)之间的关系。同时手术后1个月对患者血清Kisspeptin的水平进行检测。结果:Ki SS-1基因在胆管细胞癌组织的表达量2.47±0.63显著低于癌旁组织的表达量4.36±0.87,差异具有统计学意义(t=5.749,P=0.0007)。胆管细胞癌Ki SS-1mRNA的水平及血清Kisspeptin的水平与年龄、性别及发生部位均无明显关系(P>0.05),但与分化程度、TNM分期及淋巴结转移密切相关,差异具有统计学意义(P<0.05)。胆管细胞癌患者手术前血清Kisspeptin的水平为(1.25±0.16)μg/L,显著低于健康体检者血清Kisspeptin的水平(2.37±0.14)μg/L(t=22.27,P<0.0001),手术后,胆管细胞癌患者血清Kisspeptin的水平上升至(1.91±0.11)μg/L,与手术前相比差异显著(t=22.27,P<0.0001),但仍低于健康体检者Kisspeptin的水平(t=8.684,P<0.0001)。结论:胆管细胞癌中KiS S-1基因及血清Kisspeptin的水平明显降低,并与胆管细胞癌的临床病理参数密切相关,推测其可能促进胆管细胞癌的发生、发展。

番茄ss基因的连锁分析及其种子发芽特性

证明控制番茄种皮表现为海绵状的基因ss符合孟德尔遗传规律 ,并与幼苗绿茎基因ah连锁 ,位于第 9条染色体上 ,使种皮表现为灰白色。来自 95 14 8×红 10 0的F2 代分离群体的种子 ,含有ah基因的无花青素单株个体较有花青素个体普遍表现为前期 (39或 5 1h)发芽率较高 ,而第 10天的平均总发芽率却呈现下降趋势 ;不同单株个体间差异较大 ,总发芽率变化幅度为 5 4 %～ 10 0 % ,表明虽然ah基因可促进番茄种子的前期发芽 ,但还受种子基因型 ,尤其是胚或胚乳基因型的影响。番茄种子种皮褐色色素的积累和ah、aw、aa等基因无关。种皮颜色和茸毛等性状可以作为明显的形态标记 。

东方泽泻实时荧光定量PCR内参基因的筛选及AoSS基因的组织表达特性分析

【目的】筛选适用于东方泽泻实时荧光定量PCR(qRT-PCR)的内参基因,并分析其鲨烯合酶基因(AoSS)的表达特性,为后续研究东方泽泻原萜烷型三萜生物合成调控及诱导机制打下基础。【方法】从东方泽泻转录组中选取内参基因18S rRNA、EF1α、GAPDH、ACT、UBQ和UBC,应用qRT-PCR检测其在不同组织和激素处理下的表达情况,并借助Delta CT、GeNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFinder对其表达稳定性进行分析评价。以筛选到的内参基因分析AoSS基因在不同组织中的表达情况。【结果】18S r RNA、GAPDH和EF1α基因在东方泽泻不同组织的表达稳定性较高,但18S rRNA、UBC和EF1α基因在不同激素处理下的表达稳定性均较高。以18S rRNA、GAPDH和EF1α基因为内参分析AoSS基因在东方泽泻不同组织中的表达量情况,结果显示,AoSS基因在东方泽泻不同组织中均有表达,其表达情况基本一致,均在东方泽泻块茎中表达量最高,其次是叶柄和叶,而在根中表达量最低。【结论】18S rRNA、GAPDH和EF1α基因是研究东方泽泻不同组织中基因表达分析的首选内参基因;18S rRNA、EF1α和UBC基因是研究激素处理下基因表达的首选内参基因。AoSS基因的表达具有组织特异性,其可能在东方泽泻的生长发育中发挥重要的调控功能。

Ss-A/Ro核蛋白60 ku亚单位在胃癌多药耐药中的作用

目的:对Ro 60在胃癌多药耐药中的功能进行研究．方法:克隆Ro 60编码基因,构建Ro 60编码基因的正义真核表达载体,将其转导入SGC7901 细胞,应用半定量RT-PCR技术,对基因转染细胞进行鉴定,通过MTT法进行体外药物敏感性分析,借助流式细胞仪检测细胞内蓄积的阿霉素．结果:成功构建了Ro 60正义真核表达载体, 应用脂质体介导法将其转导入SGC7901,Ro 60真核表达载体转染SGC7901细胞后其表达量明显增加,体外药物敏感性试验提示其对长春新碱、5-氟尿嘧啶、丝裂霉素、顺铂、阿霉素的敏感性减低,SGC7901细胞的IC50值 (mg/L)与未转染细胞和转染空白载体细胞相比,显著增加(2．28±0．11 vs 0．45±0．04,0．65 ±0．05;2．89±0．14 vs 0．61±0．21,0．90±0．11; 1．92±0．03 vs 0．54±0．03,0．75±0．21;1．41± 0．06 vs 0．45±0．03,0．54±0．03;0．28±0．03 vs 0．14±0．01,0．14±0．01;均P<0．01),细胞内阿霉素蓄积显著减少(56．30±2．49 mg/L vs 92．83 ±3．63,87．38±2．94 mg/L,P<0．01)．结论:Ro 60真核表达载体转染SGC7901细胞后显示了一些多药耐药的特性,提示Ro 60在胃癌多药耐药中发挥了一定的作用．

石柱参人参皂苷合成酶基因SS的克隆与序列分析

以石柱参近缘种野生山参的人参皂苷合成酶基因SS为模板,利用NCBI中的primer-BLAST设计特异性引物,应用PCR技术从石柱参叶片基因组DNA克隆了SS基因。序列分析显示,克隆的基因片段为1285 bp,能够编码25个氨基酸以上的ORF(Open Reading Frame)有10个,其中最长能够编码295个氨基酸。NCBI序列对比显示,该基因与人参的人参皂苷合成酶基因SS的同源性为97.05%,与西洋参的人参皂苷合成酶基因SS的同源性为96.63%。这些数据表明,从石柱参克隆的基因为其人参皂苷合成酶基因SS。

光周期对红鳍东方鲀脑组织中GH和SS基因表达水平和昼夜表达模式的影响

为研究光周期对红鳍东方鲀Takifugu rubripes脑组织中生长激素(Growth hormone,GH)基因、生长激素抑制素(Somatostatin,SS)基因表达水平和昼夜表达模式的影响,采用初始体质量为(7.89±0.42)g的红鳍东方鲀幼鱼为研究对象,养殖在试验桶(直径80 cm、深50 cm)中,海水温度为19~23℃,盐度为31~32,共设置5种光周期8L∶16D、12L∶12D、16L∶8D、20L∶4D、24L∶0D,每个处理组设3个平行,每桶放60尾鱼,试验周期为30 d,试验结束后全天取样,测定脑组织中GH、SS基因表达水平。结果表明:8L∶16D光周期处理组红鳍东方鲀脑组织中GH基因相对表达量显著高于其他光周期处理组(P<0.05);8L∶16D光周期处理组SS基因相对表达量显著高于24L∶0D组(P<0.05),其他处理组SS基因相对表达量无显著性差异(P>0.05);GH和SS基因表达水平分别在12L∶12D和8L∶16D光照条件下呈现昼低夜高的特点。研究表明,结合GH和SS基因在不同光周期下的表达量及昼夜表达特点,长时间光照(16~24 h/d)并不利于红鳍东方鲀幼鱼生理节律的维持,本试验条件下最佳光照时长为8~12 h/d。

Ss-A/Ro 60 ku亚单位变异体1在胃癌多药耐药中的作用

目的:对Ro 60变异体1在胃癌多药耐药中的功能进行研究.方法:克隆Ro 60变异体1编码基因,构建Ro 60变异体1编码基因的正义真核表达载体,将其转导入SGC7901细胞,应用半定量RT-PCR技术,对基因转染细胞进行鉴定,通过MTT法进行体外药物敏感性分析,借助流式细胞仪检测细胞内蓄积的阿霉素.结果:成功构建Ro 60变异体1正义真核表达载体:应用脂质体介导法将其转导入SGC7901,其表达量明显增加;体外药物敏感性试验提示,与SGC7901和SGC7901-pcDNA3.1细胞相比,转染细胞对长春新碱(IC_(50):2.87±0.10 mg/L vs 0.47±0.07 mg/L,0.63±0.08 mg/L,P<0.01)、5-氟尿嘧啶(IC_(50):3.89±0.12 mg/L vs 0.59±0.17 mg/L,0.92±0.12 mg/L,P<0.01)、丝裂霉素(IC_(50):1.02±0.06 mg/L vs 0.50±0.04 mg/L,0.73±0.09 mg/L,P<0.05)、顺铂(IC_(50):1.15±0.06 mg/L vs 0.46±0.04 mg/L.0.52±0.05 mg/L,P<0.01)、阿霉素(IC_(50):0.45±0.03 mg/L vs 0.15±0.03 mg/L,0.16±0.02 mg/L,P<0.01)的敏感性减低;流式细胞仪检测结果显示,转染细胞内阿霉素的蓄积减少(50.39±2.09 mg/L vs 94.99±4.07 mg/L,88.06±2.67 mg/L,P<0.01).结论:Ro 60变异体1真核表达载体转染SGC7901细胞后,显示多药耐药特性.

回交重组自交系中SSⅢ-1、SBE3和PUL基因对稻米蒸煮食味品质的影响

该研究利用颗粒结合淀粉合成酶基因(Wxb)与可溶性淀粉合成酶Ⅱa基因(SSⅡ-3)均相同的籼型光温敏核不育系‘广占63S’和潜力恢复系CG173R为亲本,经过回交和多代自交,以构建的回交重组自交系(BILs)BC1F10代株系为供试材料,分析各株系的基因型组成及其蒸煮食味品质(ECQs)和RVA谱,以解析与品质相关微效基因的遗传效应。结果显示:(1)双亲在焦磷酸化酶大亚基基因(AGPlar)、分支酶基因Ⅲ(SBE3)、脱分支酶基因(PUL)、可溶性淀粉合成酶Ⅰ基因(SSⅠ)和可溶性淀粉合成酶SSⅢ-1基因(SSⅢ-1)的基因位点存在差异。(2)SSⅢ-1、SBE3和PUL基因分别在BC1F10代株系中存在单基因分离,SSⅢ-1和SBE3基因、SSⅢ-1和PUL基因在BC1F10代株系中均存在双基因的分离。(3)不同基因型及其互作与蒸煮食味品质(ECQs)中的表观直链淀粉含量(AAC)、胶稠度(GC)以及RVA谱的部分特征值存在显著或极显著的效应。(4)SSⅢ-1单基因只对AAC有极显著影响;SBE3基因和SSⅢ-1基因互作对AAC有极显著影响,对峰值时间(PeT)、成糊温度(PaT)、GC有显著性影响;PUL基因和SSⅢ-1基因互作对PeT、PaT和回复值(CSV)有极显著影响,对最高粘度(PKV)、热浆粘度(HPV)、崩解值(BDV)、冷浆粘度(CPV)、消减值(SBV)、AAC和GC有显著影响。研究表明,在Wxb和SSⅡ-3基因背景下,参与淀粉合成的微效基因SSⅢ-1与SBE3和SSⅢ-1的互作效应极显著影响水稻AAC,SBE3和SSⅢ-1的互作效应与PUL和SSⅢ-1的互作效应显著影响GC,PUL和SSⅢ-1的互作效应极显著影响PaT,这些发现将对改良稻米品质和加快水稻优质育种具有重要意义。

Phylogenetic studies of four species of ciliate inferred from 16s-like small subunit rRNA gene sequences

The phylogenetic relationships of four ciliate genera （Urostyla, Euplotes, Stylonychia and Pseudokeronopsis）, which also are the important environment inspection species, were analyzed by the comparison of small subunit ribosomal RNA gene sequences. Euplotes appeared as an early branching group whose divergence from the hypotrichous line at a deep level was strongly supported by parsimony and matrix analyses. The analyses also supported the hypothesis that there were closely relationship between species in Urostyla and Holosticha. The sibling species Stylonychia mytilus and S. lemnae could be separated by the evolutionary analyses. Furthermore, Pseudokeronopsis rubra had relatively more closely relationship with the species in Holostichidae than that in Urostylidae based on the evolutionary distance value.

生长抑素在动物生产上研究进展

本文综述了生长抑素的特点及影响动物生长、生产性能的作用机理 ,并对其耗竭剂、基因工程疫苗及主、被动免疫的研究、应用状况进行了总结、分析。生长抑素是通过抑制动物体内多种激素 (生长激素、胰岛素等 )、消化酶 (胃蛋白酶、胰液、胃酸等 )的分泌和胃肠道的运动而抑制动物的生长的。生长抑素的耗竭剂目前研究的有 :半胱胺和大豆黄酮。生长抑素的主、被动免疫在促进动物生长、改善动物的生产性能方面 ,已被大多数人接受 ,但报道结果不尽一致 ,另外也存在着一些问题 ,象激素及其代谢产物残留、过敏反应等。因此要在实践中广泛应用 ,仍需要做大量的研究。

水稻广亲和基因S5-n的功能标记开发及其应用

广亲和基因S5-n是能够恢复籼、粳杂种育性的基因,利用常规育种方法回交转育广亲和基因需要通过配组杂种F1,根据F1的育性判断和选择S5-n,选育周期长,方法繁琐。因此,在广亲和遗传改良和聚合育种中需要寻找一种快速、简便的广亲和基因检测方法。本研究根据水稻广亲和基因和籼粳S-5等位基因序列存在136bp缺失的特征,设计了InDel标记S5136。前人研究已经明确02428、Dualr、CPSLO17具有S5-n,分子标记S5136 PCR扩增这3个材料的带型为缺失带型,而不携带广亲和基因S5-n的材料的带型为非缺失带型。利用该标记对3037与02428的F2群体分析表明,该标记能准确区分S5-n、S5-i纯合及杂合基因型,标记基因型符合1∶2∶1比例,没有发生偏分离现象。利用该标记从554份水稻品种资源(O.sativa L.)和27份普通野生稻(O.rufipogen Griff.)以及24份江淮流域杂草稻资源中筛选出具有缺失带型的资源材料13份,并对其PCR产物测序证实为S5-n,对Kasalath的广亲和性进行了初步验证;从20份02428的高世代育种材料中,筛选到携带广亲和基因S5-n的恢复系2份。该标记可以用于S5-n基因资源筛选、分子标记辅助选择育种和培矮64S为母本的杂交种种子纯度鉴定。

旋唇纲纤毛虫系统发育分子树构建的影响因素

以36种旋唇类高等类群纤毛虫的核糖体小亚基核苷酸(Small subunit ribosomal RNA,SS rRNA)基因序列为素材,比较研究了不同条件(包括外类群、内类群的选择,同一基因不同序列长度的组合,不同建树方法和不同分析软件的使用)对纤毛虫分子系统树构建结果的影响。结果表明,上述因素均可不同程度地影响拓扑结构。结果同时提示,在利用有限数据进行相关研究,特别是在对未明类群的系统关系分析中,必须充分考虑因建树条件的不同所带来的影响。作者同时也建议,在当前可用的分子信息欠充分的前提下,对于纤毛虫任何类群的分子系统学探讨而言,慎重形成结论并尽可能地结合和参照形态学、发生学等资讯,仍是需优先考虑的工作路线。

南海有毒塔玛亚历山大藻的分子地理标记分析

采用聚合酶键扩增反应（PCR）和限制性片段长度多态性分析（RFLP）方法，对1992年5月和1994年间月采自中国南海大鹏湾、大亚湾、香港海域的赤潮有毒甲藻塔玛亚历山大藻8个不同地理株的核糖体小亚基RNA基因（Ss－rDNA）进行分析，并与北美、西欧等地的比较。结果表明，中国南海的塔玛亚历山大藻缺少B基因，这与北美等地的塔玛亚历山大藻（包括有毒和无毒株）不同，而与西欧、澳洲等地的有毒和无毒株相似，提示B基因的存在可以作为一种分子地理标记而不是藻种有毒的标记。

青蒿鲨烯合酶基因打靶研究

目的通过代谢途径工程调整代谢流向,试图增大转基因青蒿Artemisia annua植株中的青蒿素产量。方法利用青蒿鲨烯合酶(SS)基因、绿色荧光蛋白(GFP)基因和胞嘧啶脱氨酶(CodA)基因构建基因打靶载体,并通过冻融法将载体导入根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens。以叶盘法转化青蒿,采用"分段选择法"筛选转基因再生植株。结果对表达GFP基因后发出绿色荧光的转基因植株,采用PCR及PCR产物杂交法,在1棵转基因植株中检测到外源GFP基因,而未检测到内源SS基因。初步证据显示,在转基因青蒿植株中,突变型SS基因已取代野生型SS基因。结论青蒿鲨烯合酶基因打靶已取得初步成功。

健脾与补肾对脾虚模型大鼠脑内生长抑素水平和受体基因表达的影响

目的比较健脾与补肾对脾虚模型大鼠脑内生长抑素(SS)水平和受体基因表达的影响。方法采用苦降泻下、饮食失节加劳倦过度法建立脾虚大鼠模型,以免疫组化和原位杂交法检测下丘脑腹侧核、海马CA1区、前额叶皮层SS及生长抑素受体1(SSR1)mRNA基因表达变化。结果模型组上述脑区SS免疫阳性反应物及SSR1 mRNA表达阳性反应物明显降低,与正常组比较差异显著;健脾组与补肾组上述脑区的SS免疫阳性反应物及SSR1 mRNA表达阳性反应物明显升高,与模型组比较差异显著,与正常组比较无显著差异。结论脾虚模型大鼠脑内对学习记忆有促进作用的SS水平和SSR1 mRNA基因表达有变化,健脾与补肾可能通过调节SS水平和SSR1基因表达而影响学习记忆能力。

游仆目纤毛虫(纤毛门,旋唇纲)的分子系统学研究

在最新GenBank分子信息的汇集、分析基础上,利用小亚基单位核糖体RNA基因序列分别构建了最大简约树、距离树、最大似然树及贝叶斯树,对长期存在争议的游仆目纤毛虫的系统关系进行了探讨和修订。工作显示:1)游仆目不是1个单源发生系;2)盘头虫类从游仆目中较早分化出来,呈现与排毛类、寡毛类平行的进化关系;3)腹棘虫科内的腹棘虫和拟游仆虫体现了密切的亲缘关系;4)游仆虫科、舍太虫科、纤虫科在所有分子树中均表现了十分稳定的拓扑结构;5)游仆虫属内可以细分为7个亚类群;6)尾刺虫科在游仆目内分化较早,支持前人有关其在系统演化时序中处于原始阶段的论断。

悬浮物对褐牙鲆肌肉抗氧化酶活性及相关基因表达的影响

为探究褐牙鲆(Paralichthys olivaceus)幼鱼在悬浮物胁迫下的耐受机制,以两种规格褐牙鲆为实验材料,在悬浮物质量浓度为5 000,10 000mg/L胁迫下,研究了褐牙鲆肌肉中总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽转移酶(GST)、过氧化氢酶(CAT)酶活力及SOD2、GST、CAT的mRNA转录水平的变化情况。实验结果显示:T-SOD酶活力具有一定的变化趋势,B幼鱼T-SOD酶活力呈现先升高、再降低、再升高的趋势,SOD2基因相对表达量在第48小时达到峰值(P<0.05),两种幼鱼T-SOD基因相对表达变化趋势在第72小时和第96小时相反;CAT酶活力呈现先升高、再降低的趋势,A幼鱼及5 000mg/L实验组B幼鱼CAT基因相对表达与CAT酶活力变化趋势一致;B幼鱼GST酶活力实验组低于对照组(P<0.05),GST基因相对表达量在第24小时和第48小时实验组高于对照组(P<0.05)、在第72小时和第96小时实验组与对照组无显著差异。研究结果表明:悬浮物对褐牙鲆抗氧化酶活力及相关基因的表达具有一定的影响;不同体长规格的褐牙鲆抗氧化酶活力及相关基因的表达存在差异;TSOD酶活力、GST酶活力与相关基因表达量变化趋势不一致,CAT酶活力与相关基因表达量变化趋势一致。本研究可为揭示褐牙鲆应对悬浮物胁迫的耐受机制及褐牙鲆耐悬浮物品种选育提供基础数据。