SS31肽改善快速老化小鼠SAMP8认知功能及相关机制的研究

目的 探讨SS31肽对快速老化小鼠SAMP8认知的改善作用以及对海马区神经元的线粒体形态及氧化应激产物的影响。方法 将8个月龄SAMP8小鼠随机分为3组:5mg SS31腹腔注射组(SS31组),生理盐水腹腔注射组(SAMP8-V组),模型组(SAMP8组)。以8个月龄SAMR1小鼠作为空白对照组。连续腹腔注射给药8w后,采用透射电镜方法检测各组小鼠海马区线粒体的形态,免疫组化检测各组小鼠海马区内4-羟基壬烯醛(4-hydroxynonenal,4-HNE)的含量,Western blot法检测各组小鼠海马区内线粒体分裂相关蛋白1 (fission1,Fis1)的表达。结果 与SAMP8组和SAMP8-V组相比,SS31干预组小鼠认知功能得到明显改善,海马区内线粒体形态无明显肿胀,嵴量较多,内部结构完整,Fis1蛋白表达明显下降,4-HNE表达明显降低(P<0.05)。结论 SS31肽可能主要通过减轻海马区神经元内的氧化应激反应及减少线粒体分裂达到改善AD模型小鼠SAMP8的认知功能的作用。

线粒体靶向肽SS31及RIP抑制剂Necrostatin-1(Nec-1)对H2O2诱导的氧化应激损伤ARPE-19细胞的保护作用

目的探讨线粒体靶向肽SS31及RIP抑制剂Necrostatin-1(Nec-1)对H2O2诱导的氧化应激损伤ARPE-19细胞的保护作用。方法选择400μmol·L-1 H2O2构建氧化应激损伤模型;根据MTT结果筛选出1μmol·L-1 SS31、40μmol·L-1 Nec-1作为实验最佳浓度。将培养的细胞分为对照组、SS31+Nec-1组、H2O2组、SS31+H2O2组、SS31+Nec-1+H2O2组、Nec-1+H2O2组。利用MTT测定细胞存活率,双氯荧光素染色测定细胞活性氧自由基(ROS)水平,JC-1染色测定线粒体膜电位,AnnexinV/PI双染检测细胞PI阳性率,Western blot法检测RIP3蛋白表达水平。结果与对照组相比,H2O2组细胞存活率明显降低(P<0.05)。SS31+H2O2组、Nec-1+H2O2组细胞存活率高于H2O2组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。荧光显微镜下双氯荧光素染色结果显示,与H2O2组相比,SS31+H2O2组、Nec-1+H2O2组绿色荧光明显减弱,细胞内ROS含量明显减少。流式细胞仪结果显示与对照组相比,H2O2组线粒体膜电位降低的细胞比例升高,差异有统计学意义(P<0.05);与H2O2组相比,SS31+H2O2组、Nec-1+H2O2组线粒体膜电位降低的细胞比例降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。AnnexinV/PI双染色结果显示与对照组相比,H2O2组PI阳性率增加;与H2O2组相比,SS31+H2O2组、Nec-1+H2O2组PI阳性率均明显降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。Western blot检测结果显示,与对照组相比,H2O2组RIP3蛋白表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与H2O2组相比,SS31+H2O2组、Nec-1+H2O2组RIP3蛋白表达上调作用显著减弱,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论SS31及Nec-1对H2O2诱导的ARPE-19细胞氧化应激损伤具有明显的保护作用。