SSA/Ro60自身抗原的基因克隆与表达纯化

目的 克隆人SSA/Ro60自身抗原并表达纯化,为辅助诊断自身免疫提供物质基础。方法 采用RT-PCR技术扩增SSA/Ro60基因,定向插入pPICZ表达载体,转入毕赤酵母表达系统,将获得的重组蛋白行SDS-PAGE和Western blotting鉴定。结果 扩增出约1.5kb的SSA/Ro60全长序列,获得相对分子质量60×103的重组蛋白,经鉴定具有SSA/Ro60抗原性。结论成功克隆并表达SSA/Ro60,为诊断自身免疫疾病奠定基础。

线性免疫印迹法检测抗60 kD Ro/SSA IgG抗体的对比分析

目的评价5个不同厂家自身抗体谱线性免疫印迹法(LIA)试剂中的抗60 k D Ro/SSA Ig G抗体项目的一致性及符合率。方法收集本院54例自身免疫性疾病病人和10份2013年卫生部临检中心室间质评血清及30例健康人血清,同时使用酶联免疫吸附(ELISA)法和5个不同品牌LIA法试剂对血清中的抗60 k D Ro/SSA Ig G抗体进行检测,比较5个不同品牌LIA法试剂检测60 k D Ro/SSA Ig G抗体的一致性及总体符合率。结果 ELISA法试剂盒检测94例血清中阳性标本37例,阴性标本57例,同时进行的5种不同品牌LIA法抗核抗体谱试剂检测抗60 k D Ro/SSA Ig G抗体结果的总体符合率均超过90%,吻合系数均>0.8,说明一致性很好,但5种品牌均出现不相一致的阳性和阴性。结论 LIA法的抗核抗体谱检测试剂盒在检测抗60 k D Ro/SSA Ig G抗体项目中一致性很好,但检测结果可疑时应使用天然抗原包被的ELISA法试剂或双向扩散法进行复测。