通过慢病毒载体构建SSA/Ro52稳定基因沉默细胞系

目的利用慢病毒载体持续表达RNA干扰序列抑制基因表达,建立SSA/Ro52稳定基因沉默细胞系,为进一步研究SSA/Ro52的功能提供有效工具。方法 4条SSA/Ro52特异序列(克隆1为TGGCATGGTCTCCTTCTACAA,克隆2为CTGCCTTCTTTATGGGACTTA,克隆9为TGAG从GTTGGAAGTGGAAAT,克隆1 1为AGTTATCCTATGGTCCTGGGT)和无关对照序列克隆至慢病毒载体pLKO-puro,表达后可形成小发卡结RNA(small hair-pin,shRNA),通过RNA干扰机制抑制特异基因表达。表达SSA/Ro52特异序列的克隆1、2、9、11以及表达无关序列的对照克隆(scramble,S)分别与包装载体pGag-Pol和pVSV-G共同转染293T细胞,收集含病毒颗粒的培养液。用表达SSA/Ro52特异序列和无关对照序列的病毒颗粒感染Hela细胞,抗生素筛选,建立稳定细胞系。以GAPDH为内对照定量实时PCR检测SSA/Ro52 mRNA的表达。免疫印记检测SSA/Ro52蛋白,扫描SSA/Ro52条带与β-actin条带相比为SSA/Ro52蛋白的相对表达水平。克隆1、2、9、11转染细胞中SSA/Ro52的表达水平与对照克隆S的比值为基因表达的抑制程度。结果慢病毒颗粒可以有效感染Hela细胞,含shRNA表达框架的病毒序列可以整合至细胞基因组,形成稳定细胞系。克隆1、2、9、1 1转染细胞在抗生素筛选3 d后,其SSA/Ro52 mRNA表达水平分别是克隆S转染细胞的25.5%、31.2%、13.0%和77.2%;而上述克隆转染细胞SSA/Ro52蛋白表达水平是对照的5%、50%、10%和80%。培养4周后上述克隆SSA/Ro52蛋白表达水平没有明显变化。但用干扰素α刺激细胞后,SSA/Ro52在对照克隆转染细胞中表达增加,而克隆1、2、9、11转染细胞SSA/Ro52的表达是对照的30%、70%、5%和100%。结论克隆1、2、9可以有效抑制SSA/Ro52的表达,通过慢病毒载体转染细胞建立了SSA/Ro52稳定基因静默细胞系。在SSA/Ro52表达被上调时,克隆9仍然可以有效抑制SSA/Ro52的表达,为进一步研究SSA/Ro52的功能打下了基础。

抗SSA/Ro52抗体阳性获得性血友病A1例报告并文献复习

获得性血友病A(AHA)是较少见的血液系统疾病,主要表现为黏膜、肌肉、内脏的出血,并且出血通常具有自发性、突然性、弥漫性和危急性,诊治不及时可造成严重出血,导致患者死亡。本文通过报道1例抗SSA/Ro52阳性AHA患者的临床诊断及治疗过程,旨在加深对于AHA的认识。

HCV感染者抗SSA/Ro52抗体及其IgG亚型检测的意义

目的分析检测HCV感染者抗SSA/Ro52抗体及其Ig G亚型的意义。方法选取2012年1月至2014年8月开封市中心医院收治的临床确诊HCV感染者60例,同期系统性红斑狼疮(SLE)患者56例,干燥综合征患者23例,健康体检者60例,用线性免疫印迹法筛查抗SSA/Ro52抗体,间接ELISA检测抗SSA/Ro52抗体Ig G亚型。结果 HCV感染者抗SSA/Ro52抗体阳性率较SLE以及干燥综合征患者低(P<0.05),HCV感染者的单项阳性率高于SLE以及干燥综合征患者(P<0.05)。HCV感染者、SLE、干燥综合征阳性患者Ig G1亚型阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论单项抗SSA/Ro52抗体阳性是区分HCV感染是否合并干燥综合征的重要指标之一。

抗MDA5抗体和抗SSA/Ro52抗体双阳性皮肌炎的临床分析(附5例报告及文献复习)

目的探讨抗MDA5抗体和抗SSA/Ro52抗体双阳性皮肌炎的临床特征及治疗。方法回顾性分析5例抗MDA5抗体和抗SSA/Ro52抗体双阳性皮肌炎患者的临床资料,结合文献复习进行讨论。结果5例患者中男性1例、女性4例。主要临床表现为典型皮疹及肢体无力,可伴有呼吸困难、关节症状及口干眼干等症状,均诊断为抗MDA5抗体和抗SSA/Ro52抗体双阳性皮肌炎,且合并间质性肺炎;患者平均发病年龄(62.2±6.18)岁,平均病程(4.2±1.64)个月;1例患者血清肌酸激酶升高(472 U·L^-1);诊断明确后5例患者均接受了糖皮质激素与免疫抑制剂联合治疗。结论抗MDA5抗体与抗SSA/Ro52抗体双阳性的皮肌炎临床主要表现为典型皮疹,肢体无力、呼吸困难、关节症状及口干眼干等症状常见,血清肌酸激酶升高不明显,易合并间质性肺病;糖皮质激素与免疫抑制剂联合治疗为主要方案。预后不良。

抗SSA、抗SSB、抗Ro52抗体在自身免疫性疾病中的临床价值探讨

目的研究抗SSA、抗SSB和抗Ro52抗体在自身免疫性疾病(autoimmune diseases,AID)诊断中的临床意义,探讨在SLE、SS、RA中相关实验室项目结果在抗SSA/SSB/Ro52抗体的单阳性组和多阳性组间是否存在差异。方法选取抗SSA/SSB/Ro52抗体结果为阳性的患者,分析他们的相关实验室检测结果与临床最终诊断。结果抗SSA/SSB/Ro52抗体不同阳性组合之间AID和非AID诊断的构成比具有显著差异,并且随着抗体阳性的增多AID所占的百分比也随着增加,各组百分比按大小排列为SSA+SSB+Ro52+>SSA+SSB+/SSA+Ro52+/SSB+R052+>SSA+/SSB+/Ro52+;SLE患者Ig G的升高、RA淋巴细胞的降低、SS患者球蛋白Ig G的升高以及C3的降低在单阳性组与多阳性组间有显著差异。结论抗SSA、抗SSB、抗Ro52抗体可作为AID的筛选指标,阳性抗体越多AID确诊的可能性越大。在SLE、RA、SS患者中,部分实验结果在单阳性组与多阳性组间有显著差异,提示多抗体阳性可能与疾病的活动性或严重程度有关。

抗Ro52抗体和抗Ro60抗体的临床应用价值探讨

目的探讨抗SSa抗体(包括抗Ro52抗体和抗Ro60抗体)在临床疾病诊断中的价值。方法回顾性总结2009年1月-2013年12月23 145例抗核抗体结果阳性并同时进行抗可提取性核抗原(ENA)抗体谱(包括抗Sm、抗Ro52、抗Ro60、抗SSb、抗RNP、抗Scl-70、抗Jo-1及抗Rib-P抗体)的患者,分析抗Ro52、抗Ro60分别与其他检测结果及临床信息的关系。结果 23 145例患者中抗Ro60抗体阳性率为35.19%(8 145/23 145),抗Ro52抗体阳性率为13.16%(3 046/23 145)。且抗Ro60抗体在抗SSb、抗RNP、抗Sm及抗Rib-P阳性患者中的阳性率较抗Ro52高(P<0.05);抗Ro52抗体阴性而抗Ro60抗体阳性(Ro52-Ro60+)结果在自身免疫性疾病、非自身免疫性疾病及症状患者组中所占比例较抗Ro52抗体阳性而抗Ro60抗体阴性(Ro52+Ro60-)结果均较高(P<0.05)。结论抗Ro60抗体在自身免疫性疾病及非自身免疫性疾病的阳性率较抗Ro52抗体高,抗Ro60抗体的检测敏感度及自身免疫性疾病预示价值较抗Ro52抗体高,但两者的诊断特异性均较差,临床疾病诊断价值有限。

结缔组织病血液系统损害与自身抗体及免疫学指标的相关性分析

目的探讨结缔组织病(CTD)患者血液系统损害与自身抗体及免疫学指标的相关性。方法回顾性分析137例CTD患者血液系统损害情况,同时对伴与不伴血液系统损害的CTD患者自身抗体及免疫学指标检测结果进行对比分析。结果 CTD患者出现血液系统损害的阳性率,分别为系统性红斑狼疮(SLE)75%、原发性干燥综合征(p SS)54%、类风湿关节炎(RA)39%、未分化结缔组织病(UCTD)63%。SLE三系损害发生率最高(50%),与p SS、RA、UCTD三系损害发生率比较差异有统计学意义。p SS与RA均以单系损害为主,比例分别为58%、85%;p SS以白细胞、血小板下降为主,RA以血红蛋白下降为主。UCTD单系与多系损害比例无明显差异。伴与不伴血液系统损害的CTD患者一般情况及免疫学指标之间比较差异无统计学意义;自身抗体之间比较显示,抗SSA/Ro60抗体、抗SSA/Ro52抗体阳性差异有统计学意义。结论 CTD患者发生血液系统损害概率高,其中以SLE发生率最高,SLE三系损害最常见。自身抗体中抗SSA/Ro60抗体、抗SSA/Ro52抗体与结缔组织病血液系统损害具有相关性。

两种方法检测146例抗核抗体结果的差异分析

目的探讨间接免疫荧光法(IIF)和免疫印迹法(LIA)检测抗核抗体(ANA)的结果差异及临床价值。方法收集146例ANA检测IIF(-)与LIA(+)的标本,并进行乙型肝炎病毒(HBV)抗原、抗体和丙型肝炎病毒(HCV)抗体的检测。结果 (1)在146例IIF(-)LIA(+)的标本中,单独出现抗Ro52抗体、抗SS-A、抗AMA-M2抗体阳性的标本数分别为69例、42例、15例,抗RNP抗体、抗PCNA抗体、PM-Scl抗体阳性的标本数分别为3例、5例、2例,有两项阳性的共8例。(2)单Ro52抗体阳性标本中,乙肝小三阳:HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+),乙肝大三阳:HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)及丙型肝炎患者患者例数分别为51例、4例、7例,非肝炎患者7例。(3)单SSA抗体阳性标本中,乙型肝炎患者6例,非乙肝的患者36例。结论 IIF检测ANA容易漏检Ro52抗体、SSA抗体,Ro52抗体与乙肝小三阳有一定关系。