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微小RNA-199a-5p保护大鼠脑缺血后血-脑屏障完整性
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作者 倪广晓 段春巧 +3 位作者 寇璐璐 孟然 王晓青 王璞 《解剖学报》 CAS CSCD 2024年第4期460-467,共8页
目的探讨微小RNA(miR)-199a-5p保护脑缺血后血-脑屏障(BBB)完整性的机制。方法通过SPF级成年雄性SD大鼠建立永久性大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,48只大鼠随机分为假手术组、模型组、MCAO+miR-199a-5p组和MCAO+miR-199a-5p阴性对照组,每组1... 目的探讨微小RNA(miR)-199a-5p保护脑缺血后血-脑屏障(BBB)完整性的机制。方法通过SPF级成年雄性SD大鼠建立永久性大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,48只大鼠随机分为假手术组、模型组、MCAO+miR-199a-5p组和MCAO+miR-199a-5p阴性对照组,每组12只。应用Ludmila Belayev 12分评分法评估大鼠的神经行为学表现;采用Evans蓝染色检测脑缺血后BBB的完整性;免疫荧光染色检测脑缺血后细胞凋亡;Western blotting技术检测claudin-5、磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基2(PIK3R2)、p-Akt、Akt和血管内皮生长因子(VEGF)-A的蛋白表达;利用Real-time PCR检测脑缺血半暗带、梗死区miR-199a-5p、claudin-5及VEGF-A表达水平。结果MiR-199a-5p mimic干预增强MCAO大鼠本体感觉和运动能力。MiR-199a-5p降低脑缺血后PIK3R2的表达,激活Akt信号通路,并增加缺血半暗带中claudin-5和VEGF-A的表达。此外,miR-199a-5p减轻了脑缺血后的炎症。MiR-199a-5p降低脑缺血后BBB渗透性,减少神经细胞凋亡。结论MiR-199a-5p可降低缺血性脑卒中后PIK3R2的表达,激活Akt信号通路,降低炎性细胞因子的表达,减轻缺血性脑卒中对BBB的破坏。 展开更多
关键词 缺血性脑卒中 血-脑屏障 微小RNA-199a-5p CLAUDIN-5 AKT信号通路 免疫印迹法 实时定量聚合酶链反应 大鼠
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羟基红花黄色素A通过调控环氧合酶2/前列腺素E_(2)信号通路减轻大鼠脑缺血再灌注损伤
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作者 杨迎春 杨莹 +4 位作者 张小良 高赛红 姜庆良 李宇凤 贾书雨 《解剖学报》 CAS CSCD 2024年第4期468-474,共7页
目的观察羟基红花黄色素A(HSYA)对环氧合酶2(COX-2)/前列腺素E_(2)(PGE_(2))信号通路的影响,探讨HSYA对脑缺血再灌注损伤(CIRI)的保护机制。方法90只雄性SD大鼠随机分为假手术组(S组)、手术组(CIRI组)、HSYA组和塞来昔布组(C组),HSYA组... 目的观察羟基红花黄色素A(HSYA)对环氧合酶2(COX-2)/前列腺素E_(2)(PGE_(2))信号通路的影响,探讨HSYA对脑缺血再灌注损伤(CIRI)的保护机制。方法90只雄性SD大鼠随机分为假手术组(S组)、手术组(CIRI组)、HSYA组和塞来昔布组(C组),HSYA组进一步分为HSYA低剂量组(HSYA-L组)、HSYA中剂量组(HSYA-M组)和HSYA高剂量组(HSYA-H组),每组15只。线栓法制备脑缺血再灌注损伤模型。各组大鼠于术前30 min腹腔注射给药,HSYA各组分别给予HSYA 10、15、25 mg/kg,C组给予塞来昔布40 mg/kg,S组和CIRI组给予等量的生理盐水。各组大鼠模型制作苏醒后立刻进行神经功能学评分,再灌注24 h时进行脑梗死体积检测,同时Nissl染色观察神经细胞损伤,Real-time PCR和Western blotting检测COX-2 mRNA和蛋白的变化,ELISA检测PGE_(2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素(IL)-1β的变化。结果与S组比较,CIRI组神经功能学评分显著升高(P<0.05),脑梗死体积显著增加(P<0.05),神经细胞损伤较重,数目显著降低(P<0.05),COX-2 mRNA和蛋白的表达显著增多,同时PGE_(2)、TNF-α和IL-1β的表达也显著增多(P<0.05);与CIRI组比较,HSYA组及C组神经功能学评分明显降低(P<0.05),脑梗死体积明显减少(P<0.05),神经细胞损伤减轻,数目明显增加(P<0.05),COX-2 mRNA和蛋白及PGE_(2)、TNF-α和IL-1β的表达均明显下降(P<0.05),且HSYA各组之间及HSYA-L组和HSYA-M组与C组比较差异均较显著(P<0.05),而HSYA-H组与C组比较差异无显著性(P>0.05)。结论HSYA减轻缺血性脑卒中再灌注损伤可能与抑制COX-2/PGE_(2)信号通路有关。 展开更多
关键词 羟基红花素A 脑缺血再灌注损伤 环氧合酶2/前列腺素E_(2)信号通路 实时定量聚合酶链反应 免疫印迹法 大鼠
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成骨细胞来源的外泌体介导微小RNA-494影响骨质疏松症大鼠骨代谢与骨重建平衡
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作者 林维 李超艺 +1 位作者 唐捷 张丕军 《解剖学报》 CAS CSCD 2024年第3期302-310,共9页
目的探讨成骨细胞来源的外泌体(Exo)中微小RNA(miR)-494对骨质疏松症(OP)大鼠骨代谢与骨重建平衡的影响及其机制。方法从MC3T3-E1成骨细胞系中分离鉴定Exo,并将miR-494电转至Exo,Real-time PCR测定miR-494表达水平。40只SD大鼠随机分为... 目的探讨成骨细胞来源的外泌体(Exo)中微小RNA(miR)-494对骨质疏松症(OP)大鼠骨代谢与骨重建平衡的影响及其机制。方法从MC3T3-E1成骨细胞系中分离鉴定Exo,并将miR-494电转至Exo,Real-time PCR测定miR-494表达水平。40只SD大鼠随机分为对照组、模型组、miR-494模拟剂(miR-494)组和miR-494抑制剂组,每组10只。除对照组外,其余3组大鼠切除卵巢构建OP模型。模型制作成功后,miR-494组与miR-494抑制剂组分别接受含相应miRNA的Exo尾静脉注射,剂量为3×10^(9)个微粒。4周后,Micro-CT检测各组大鼠的骨参数,ELISA测定血清骨标志物,HE染色观察骨组织病理变化,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)染色检测破骨细胞数量,Western blotting测定骨重建相关蛋白及Toll样受体4(TLR4)相关通路蛋白表达水平。结果成功从MC3T3-E1细胞中分离得到典型杯状或圆形,直径约100 nm的Exo,其含有CD63、CD9、肿瘤易感性基因101(TSG101)、热休克蛋白70(HSP70)蛋白,且能被MC3T3-E1细胞摄取。经电转处理后,miR-494模拟剂和miR-494抑制剂的Exo中miR-494的相对表达量明显升高和降低(P<0.05)。与模型组相比,miR-494组大鼠骨参数降低,血清骨标志物骨钙蛋白(BGP)、TRACP、Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)升高,骨保护蛋白(OPG)、Ⅰ型前胶原N端肽(PⅠNP)降低,骨小梁结构紊乱,破骨细胞增加,骨组织内骨形态发生蛋白2(BMP-2)、Runt相关转录因子2(RUNX2)下调,核因子κB受体激活剂配体(RANKL)上调,TLR4、核因子κB(NF-κB)p65及髓样分化主要响应蛋白88(MyD88)上调(P<0.05)。而miR-494抑制剂组情况则相反,骨参数和OPG、PⅠNP升高,BGP、TRACP、CTX-Ⅰ降低,骨结构恢复正常,破骨细胞减少,骨组织内BMP-2、RUNX2上调,RANKL下调,TLR4、NF-κB p65及MyD88下调(均P<0.05)。结论Exo传递miR-494可加重OP大鼠骨代谢异常,并抑制骨重建平衡,推测其作用机制可能与调控TLR4通路有关。 展开更多
关键词 骨质疏松症 微小RNA-494 外泌体 骨代谢 骨重建平衡 实时定量聚合酶链反应 免疫印迹法 大鼠
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Expression of Lung Surfactant Proteins SP-B and SP-C and Their Modulating Factors in Fetal Lung of FGR Rats 被引量:6
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作者 邓飞涛 欧阳为相 +2 位作者 葛良芳 张莉 柴新群 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2015年第1期122-128,共7页
This study investigated the expression of lung surfactant proteins SP-B and SP-C, and their modulating factors TTF-1 and PLAGL2 in the fetal lung of rats with fetal growth restriction(FGR). The rat FGR model was est... This study investigated the expression of lung surfactant proteins SP-B and SP-C, and their modulating factors TTF-1 and PLAGL2 in the fetal lung of rats with fetal growth restriction(FGR). The rat FGR model was established by prenatal hypoxia in the first stage of pregnancy, 180 rats for experiment served as hypoxia group, and 197 healthy rats served as normal control group. The FGR incidence in hypoxia was compared with that in normal control group. The histological changes in the fetal lung were observed under the light microscope and electronic microscope in two groups. The SP-B, SP-C, TTF-1 and PLAGL2 proteins were determined in the fetal lung of two groups immunohistochemically. The expression levels of SP-B, SP-C, TTF-1 and PLAGL2 protein and m RNA in the fetal lung of two groups were detected by using Western blotting and RT-PCR respectively. The FGR rat model was successfully established by using hypoxia. Pathologically the fetal lung developed slowly, and the expression levels of SP-B, SP-C, TTF-1 and PLAGL2 protein and mR NA in the fetal lung were significantly reduced in hypoxia group as compared with those in normal control group. It was suggested that maternal hypoxia in the first stage of pregnancy could induce FGR, and reduce the expression of SP-B and SP-C, resulting in the disorder of fetal lung development and maturation. 展开更多
关键词 SP-B SP-C PLAGL2 TTF-1 fetal growth restriction lung development real-time pcr western blot immunohistochemistry
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Spatio-temporal expression of inducible nitric oxide synthase in and surrounding a region of rat frontal lobe damaged with a sharp instrument
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作者 Zhixian He Zhijun Zhang +3 位作者 Yulin Dong Guangming Lü Ting Wang Hengjian Ni 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2009年第2期123-128,共6页
BACKGROUND: Inducible nitric oxide synthase (iNOS) cannot be detected in the neurons and glial cells of normal rats, but iNOS can be found in some neurons and glial cells of rats following ischemic, traumatic, neur... BACKGROUND: Inducible nitric oxide synthase (iNOS) cannot be detected in the neurons and glial cells of normal rats, but iNOS can be found in some neurons and glial cells of rats following ischemic, traumatic, neurotoxic or inflammatory damage. OBJECTIVE: To investigate iNOS expression and iNOS-positive cell types at various time points following damage to the rat frontal lobe using a sharp instrument. DESIGN: A nerve molecular biology, randomized, controlled study. TIME AND SETTING: This experiment was performed at the Department of Human Anatomy, Institute of Neurobiology, Medical School of Nantong University, between April 2006 and December 2007. MATERIALS: Rabbit anti-iNOS antibody (Santa Cruz, USA), biotin labeled goat anti-rabbit antibody (Sigma, USA), reverse transcription kit (Biouniquer, Hong Kong, China) and horseradish peroxidase labeled goat anti-rabbit antibody (Pierce, USA) were used for this study. METHODS: A total of 112 healthy rats aged 3 months were randomly assigned into a sham operation group (n = 28) and a damage group (n = 84). Rat models of frontal lobe damage were induced in the damage group using a sharp instrument to make an incision in the frontal lobe cortex. In the sham operation group, the rat bone window was opened but brain tissues were left intact. MAIN OUTCOME MEASURES: Parameters were measured at 3, 6, 12, 24, 72, 120 and 168 hours following damage in both groups. Pathological changes were observed using Nissl staining and hematoxylin-eosin staining. Expression of iNOS mRNA, iNOS protein and iNOS-positive cells were examined by RT-PCR, Western blot analysis and immunohistochemistry, respectively. RESULTS: A large number of inflammatory cells infiltrated the damaged region 12 and 24 hours following damage, iNOS mRNA and iNOS protein expression increased in and around the damaged region 3 hours following damage, reached a peak at 24 hours, and then gradually decreased. The changes in iNOS-positive cell number reflected the changes in iNOS mRNA and iNOS protein expression after damage, iNOS was mainly found in neural cells at 3 and 6 hours, in macrophages at 12 and 24 hours, and in glial cells at 72 and 120 hours after damage. iNOS-positive cells were few in and surrounding the damaged region at 168 hours. There were a few iNOS-positive neural cells in the rat frontal lobe cortex in the sham operation group. CONCLUSION: Neurons, macrophages and glial cells can express iNOS following rat frontal lobe damage caused by a sharp instrument. The levels of iNOS expression, and the cell types expressing iNOS, change with time. 展开更多
关键词 frontal lobe damage inducible nitric oxide synthase RT-pcr western-blot IMMUNOHISTOCHEMISTRY rats
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Effect of simvastatin on pro-inflammatory cytokines after myocardial in farction in rats
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作者 JinyingZhang YuhuaLiao +1 位作者 XiangCheng BaojunLu 《Journal of Nanjing Medical University》 2005年第2期76-80,共5页
Objective: To study the effect of simv astatin on mRNA expression of inflammatory cytokines, including TNF-α, IL-1β, IL-6, and IL-10, after myocardial infarction (MI) in rats. Methods: The experimental rats were di... Objective: To study the effect of simv astatin on mRNA expression of inflammatory cytokines, including TNF-α, IL-1β, IL-6, and IL-10, after myocardial infarction (MI) in rats. Methods: The experimental rats were di vided into three groups: Sham operation group (Sham), the rats were performed a left thoracotomy with no ligation of left descending coronary artery (LAD); Myoc ardial infarction control group (MI-C), the rats were performed a left thoracot omy with ligation of LAD; Simvastatin group (MI-S), the rats were performed a l eft thoracotomy with ligation of LAD, and given simvastatin 40 mg/kg body weight per day through gavage, while the other two groups were given equal normal sali ne by gavage. All animals were caged to feed four weeks. After finished, the rat s were killed, and the hearts were harvested and cut into two equal parts at the level of the papillary muscle: one was used to determine mRNA expression of myo cardial cytokines by RT-PCR, and the other was used to measure cytokines by Wes tern blotting and immunohistochemical staining. Results: All the pro-inflammatory cytokines mentioned above showed few expression in Sham opera tion group. In the MI groups (including MI-C and MI-S groups), mRNA expression of each of these cytokines markedly increased compared with the Sham operation group (P<0.01). Compared with MI-C group, the mRNA expression of TNF- α, IL-1β and IL-6 in the MI-S group significant ly reduced (P<0.01), and mRNA expression of IL-10 obviously increased ( P<0.01). Cytokines principally located in cardiomyocytes of non-infarcted ar ea and survived cardiomyocytes of infarcted area, simvastatin could decrease TNF -α, IL-1β, and IL-6 and increase IL-10 by confirmation of immunohistochemical staining. Conclusion: Simvas tatin markedly lowers pro-inflammatory cytokines, and increases inflammatory pr otective cytokine. Its mechanism needs to be elucidated. 展开更多
关键词 SIMVASTATIN rat myocardial infarction CYTOKINES PT-pcr western blotting i mmunohistochemistry
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连翘酯苷对鸡IFN-α和JAK-STAT信号通路相关因子的影响 被引量:4
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作者 李华伟 张羽璐 +3 位作者 张中文 夏楠 郭玮 吴国娟 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第18期3903-3908,共6页
【目的】探讨连翘酯苷作用于鸡胚肾(CEK)细胞后,IFN-α的表达变化及JAK-STAT通路相关因子mRNA的表达变化,及连翘酯苷对IFN-α和JAK-STAT信号通路的影响。【方法】将连翘酯苷设为3个浓度(100、200和400μg.mL-1),采用荧光定量RT-PCR,检测... 【目的】探讨连翘酯苷作用于鸡胚肾(CEK)细胞后,IFN-α的表达变化及JAK-STAT通路相关因子mRNA的表达变化,及连翘酯苷对IFN-α和JAK-STAT信号通路的影响。【方法】将连翘酯苷设为3个浓度(100、200和400μg.mL-1),采用荧光定量RT-PCR,检测IFN-α和JAK-STAT通路相关因子的mRNA表达变化;用western blotting检测IFN-α的蛋白表达情况。【结果】与正常组相比,连翘酯苷不仅显著提高了IFN-α的表达量(P<0.05);而且明显上调了STAT1、JAK1、IFNAR1、IFNAR2、IRF1、IRF7的表达。【结论】连翘酯苷能够在鸡胚肾细胞(chicken embryo kidney cells,CEKs)上诱导IFN-α的表达,且能够正向调节JAK-STAT信号通路传导。 展开更多
关键词 连翘酯苷 鸡胚肾细胞 IFN-Α JAK-STAT real-time pcr western blotTING
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过氧化物酶体增殖物活化的受体γ特异配体罗格列酮对肝星状细胞生物学特性的影响 被引量:26
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作者 郭晏同 冷希圣 +3 位作者 李涛 宋盛晗 秦致中 熊亮发 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期150-153,共4页
目的 研究过氧化物酶体增殖物活化的受体γ(PPARγ)特异配体罗格列酮对肝星状细胞(HSC)PPARγ 表达以及对HSC生物学特性的影响。 方法 设立空白对照组、3μmol L罗格列酮组、10μmol L罗格列酮组;分别 用RT PCR、Western印迹、... 目的 研究过氧化物酶体增殖物活化的受体γ(PPARγ)特异配体罗格列酮对肝星状细胞(HSC)PPARγ 表达以及对HSC生物学特性的影响。 方法 设立空白对照组、3μmol L罗格列酮组、10μmol L罗格列酮组;分别 用RT PCR、Western印迹、免疫细胞化学方法检测PPARγ的表达;用Western印迹和免疫细胞化学方法检测α 平滑肌 肌动蛋白(α SMA)及Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达;四甲基偶氮唑盐(methythiazolyltetrazolium,MTT)法检测细胞增殖;流式细胞 仪分析细胞凋亡。 结果 10μmol L罗格列酮组HSC的PPARγmRNA表达明显高于对照组(t=10.87,P<0.01), PPARγ蛋白表达也明显高于对照组(t=4.627,P<0.01);10μmol L罗格列酮组HSC的增殖活性显著低于对照组(t ≥5.542,P<0.01),其α SMA及Ⅰ型胶原表达明显低于对照组(t≥4.627,P<0.01),其凋亡发生率显著高于对照组 (χ2=16.682,P<0.01)。 结论 PPARγ特异配体罗格列酮通过增加PPARγ的表达,能够抑制激活的HSC表达α SMA及Ⅰ胶原,抑制激活的HSC增殖,诱导激活的HSC凋亡。 展开更多
关键词 过氧化物酶体增殖物 罗格列酮 细胞生物学特性 配体 特异 western印迹 受体 活化 免疫细胞化学方法 星状细胞(HSC) α-平滑肌肌动蛋白 PPARγ mol/L 四甲基偶氮唑盐 流式细胞仪分析 α-SMA RT-pcr mRNA表达 对照组
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何首乌饮对衰老大鼠睾丸组织细胞Rb/p53信号转导通路的影响 被引量:10
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作者 郭凯华 高福禄 +2 位作者 牛嗣云 王小杰 陈龙 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期435-439,共5页
目的通过检测Rb、p16、p53、p19、p21在衰老大鼠睾丸组织中的表达,探讨何首乌饮抗大鼠睾丸组织衰老的机制。方法选用8周龄SD雄性大鼠84只,随机分为正常组、模型组、何首乌饮高、中、低剂量组、何首乌丸剂组、自然恢复组,每组12只,采用D... 目的通过检测Rb、p16、p53、p19、p21在衰老大鼠睾丸组织中的表达,探讨何首乌饮抗大鼠睾丸组织衰老的机制。方法选用8周龄SD雄性大鼠84只,随机分为正常组、模型组、何首乌饮高、中、低剂量组、何首乌丸剂组、自然恢复组,每组12只,采用D-半乳糖连续腹腔注射建立亚急性衰老大鼠模型。采用免疫组织化学、Western blotting和RT-PCR法检测磷酸化Rb蛋白(pRb)、p16、p53、p19、p21在大鼠睾丸组织的表达差异。结果模型组大鼠睾丸组织Rb、p53、p16、p19、p21表达明显增加,pRb表达明显减少(P<0.05);何首乌饮、何首乌丸组能显著提高pRb的表达,降低Rb、p53、p16、p19、p21表达(P<0.05),何首乌饮高剂量组调节作用大于其他各组(P<0.05)。结论何首乌饮通过调节睾丸组织Rb/p53信号转导通路相关基因和蛋白表达起到延缓衰老的作用。 展开更多
关键词 何首乌饮 RB p53 睾丸 衰老 免疫印迹法 反转录-聚合酶链式反应 大鼠
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中药何首乌饮抗大鼠卵巢组织衰老的机理 被引量:8
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作者 张娜 李亚丽 +4 位作者 牛嗣云 高福禄 陈雪 郭丽娜 赵素英 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期187-192,共6页
目的探讨何首乌饮抗大鼠卵巢组织衰老的机理。方法36只SD大鼠随机分为3组:正常组、模型组、预防组。采用D-半乳糖连续腹腔注射法制造雌性大鼠亚急性衰老模型,预防组在造模的同时以中药方剂何首乌饮灌胃。应用逆转录聚合酶连反应(RT-PCR... 目的探讨何首乌饮抗大鼠卵巢组织衰老的机理。方法36只SD大鼠随机分为3组:正常组、模型组、预防组。采用D-半乳糖连续腹腔注射法制造雌性大鼠亚急性衰老模型,预防组在造模的同时以中药方剂何首乌饮灌胃。应用逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)方法检测各组大鼠卵巢组织p53、p19ARF、Rb及p16基因的表达,用Western blotting方法检测各组大鼠卵巢组织Rb及p16蛋白的表达情况。结果何首乌饮明显抑制了衰老大鼠卵巢组织中p53、p19ARF、Rb以及p16基因表达的上调趋势(P<0.05),且明显降低了衰老大鼠卵巢组织中Rb及p16蛋白的表达(P<0.05)。结论何首乌饮抑制衰老途径中关键的调节因子p53、p19ARF、Rb及p16的表达,从而起到抗大鼠性腺衰老的作用。 展开更多
关键词 何首乌饮 衰老 P53 RB 逆转录聚合酶连反应 免疫印迹法 大鼠
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托吡酯对遗传性癫痫大鼠脑内GAT-1和GAT-3表达的影响 被引量:6
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作者 毛小元 程振国 +7 位作者 俞军龄 闵冬雨 郭凤 刘睿 吴坤灿 张宇轩 谢妮 蔡际群 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1069-1074,共6页
目的探讨托吡酯对TRM大鼠脑内GAT-1和GAT-3 mRNA和蛋白表达的影响。方法分别应用实时定量PCR法和Western blot方法检测Wistar正常组、TRM组、TPM40组和TPM80组脑内GAT-1和GAT-3 mRNA和蛋白表达。结果 GAT-1、GAT-3和β-actin标准曲线相... 目的探讨托吡酯对TRM大鼠脑内GAT-1和GAT-3 mRNA和蛋白表达的影响。方法分别应用实时定量PCR法和Western blot方法检测Wistar正常组、TRM组、TPM40组和TPM80组脑内GAT-1和GAT-3 mRNA和蛋白表达。结果 GAT-1、GAT-3和β-actin标准曲线相关性良好,基因特异性强。GAT-1 mRNA在TRM组的海马高于正常组(P<0.01);与TRM组比较,TPM80组海马中GAT-1 mRNA明显降低(P<0.05);GAT-3 mRNA在TRM组海马中的表达高于正常组(P<0.05);GAT-1蛋白表达在TRM组的海马高于正常组(P<0.01);与TRM组比较,TPM80组海马中GAT-1蛋白明显降低(P<0.01);GAT-3蛋白在TRM组海马中的表达高于正常组(P<0.05)。结论 TRM组海马内GAT-1及GAT-3的表达增加可能促进了癫痫的发生。托吡酯的抗癫痫作用可能是通过降低海马内GAT-1的表达来实现的,这种调节存在剂量依赖性。 展开更多
关键词 GAT-1 GAT-3 TRM大鼠 癫痫 托吡酯 实时定量pcr western blot
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慢性复合应激增强大鼠海马Doublecortin的表达 被引量:5
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作者 周艳玲 刘能保 +4 位作者 张敏海 李晓恒 陈鸿伟 洪小平 孙臣友 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期18-22,共5页
目的探讨慢性复合应激性学习记忆增强大鼠海马齿状回(DG)新生神经元数量变化以及Doublecortin(DCX)在海马组织中表达的变化及其意义。方法成年雄性大鼠随机分为复合应激组和正常对照组。复合应激组动物每天交替暴露于复合应激原中达6周... 目的探讨慢性复合应激性学习记忆增强大鼠海马齿状回(DG)新生神经元数量变化以及Doublecortin(DCX)在海马组织中表达的变化及其意义。方法成年雄性大鼠随机分为复合应激组和正常对照组。复合应激组动物每天交替暴露于复合应激原中达6周。实验结束后,所有动物分别进行3d的Morris水迷宫测试,记录其学习和记忆成绩。运用免疫细胞化学方法观察海马DG新生神经元数量的变化,同时运用Westernblotting和RT-PCR技术分别检测DCX在海马的表达及其mRNA水平的变化。结果与对照组相比,复合应激组动物的学习与记忆成绩优于对照组(P<0.05);其海马DG新生神经元数明显增多(P<0.05);海马DCX蛋白的表达明显增加(P<0.05);海马DCX mRNA水平明显上调(P<0.05)。结论慢性复合应激致大鼠的学习与记忆能力增强,海马DG内DCX阳性细胞数增多,提示新生神经元数量增加是导致大鼠学习记忆能力增强的原因之一。 展开更多
关键词 慢性复合应激 学习与记忆 海马 DOUBLECORTIN 免疫细胞化学 免疫印迹 RT-pcr 大鼠
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外周炎症性疼痛刺激诱导大鼠中脑导水管周围灰质胶质细胞激活及细胞因子的表达 被引量:9
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作者 郁晓燕 倪衡建 高永静 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期460-465,共6页
目的观察完全弗氏佐剂(CFA)外周刺激后,大鼠中脑导水管周围灰质(PAG)中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、小胶质细胞标记物(Iba)以及细胞因子IL-β、TNF-α的表达变化。方法结合行为学检测,反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、Western blotting以... 目的观察完全弗氏佐剂(CFA)外周刺激后,大鼠中脑导水管周围灰质(PAG)中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、小胶质细胞标记物(Iba)以及细胞因子IL-β、TNF-α的表达变化。方法结合行为学检测,反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、Western blotting以及免疫组织化学的方法,观察了大鼠后爪注射CFA后疼痛感觉的变化,并检测了PAG中上述标记物和细胞因子在基因水平和蛋白水平的表达变化。结果注射CFA后,注射侧后爪出现热痛过敏和机械性触诱发痛;大鼠的热痛过敏14d基本恢复正常,但机械性触诱发痛持续到21d时仍未恢复正常;星形胶质细胞标记物GFAP在急性期和慢性期有显著增加;小胶质细胞的标记物CD14、细胞因子(IL-β、TNF-α)在急性期、亚急性期和慢性期均有增加。结论小胶质细胞的激活可能与炎性疼痛的起始相关,而星形胶质细胞可能与疼痛的维持相关,细胞因子表达的增加可能对痛觉过敏的发生起重要作用。 展开更多
关键词 完全弗氏佐剂 胶质细胞 细胞因子 痛觉过敏 中脑导水管周围灰质 反转录-聚合酶链式反应 免疫印迹 大鼠
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NGF及其受体P75在四氯化碳中毒性大鼠肝组织中表达增强 被引量:6
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作者 陈新 姜慧卿 +2 位作者 贺战国 王玉珍 扈彩霞 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2007年第7期802-805,共4页
目的观察四氯化碳中毒时神经生长因子(NGF)及其受体P75在大鼠肝组织的表达变化,探讨NGF在肝纤维化发生机制中的可能作用。方法用四氯化碳致大鼠肝中毒模型,用RT-PCR法和Western blot法,分别检测NGF及其受体P75在大鼠肝组织中的表达。结... 目的观察四氯化碳中毒时神经生长因子(NGF)及其受体P75在大鼠肝组织的表达变化,探讨NGF在肝纤维化发生机制中的可能作用。方法用四氯化碳致大鼠肝中毒模型,用RT-PCR法和Western blot法,分别检测NGF及其受体P75在大鼠肝组织中的表达。结果与对照组大鼠肝组织中NGFmRNA及其受体P75蛋白表达量比较,造模组24 h显著增高(P<0.01,n=6),造模48 h和72 h迅速回降,但仍显著高于对照组(P<0.05,n=6)。结论在四氯化碳中毒性大鼠的肝组织中,NGF及其受体P75的表达可能与肝纤维化的形成密切相关。 展开更多
关键词 NGF RT-pcr westernblot 肝纤维化 大鼠
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何首乌饮对衰老大鼠生精细胞线粒体凋亡通路关键基因表达的影响 被引量:5
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作者 安福丽 王玉娟 +4 位作者 刘昊坤 杜云帆 秦瑄希 牛嗣云 高福禄 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期287-295,共9页
目的探讨何首乌饮对衰老大鼠睾丸生精细胞线粒体凋亡通路关键基因表达的影响。方法选用12月龄Wistar雄鼠45只,随机分为3组:青年对照组、自然衰老组、何首乌饮组,每组15只,何首乌饮组和自然衰老组于16个月开始分别灌胃何首乌饮和等量蒸馏... 目的探讨何首乌饮对衰老大鼠睾丸生精细胞线粒体凋亡通路关键基因表达的影响。方法选用12月龄Wistar雄鼠45只,随机分为3组:青年对照组、自然衰老组、何首乌饮组,每组15只,何首乌饮组和自然衰老组于16个月开始分别灌胃何首乌饮和等量蒸馏水,连续60d。青年对照组于12月龄,其余两组于18月龄分别进行实验,通过Real-time PCR、免疫荧光染色和免疫印迹法,观察各组大鼠睾丸组织线粒体凋亡通路关键基因DR6、BAX、Caspase-3、Cyt-C、14-3-3σ的表达变化。结果自然衰老大鼠线粒体凋亡通路关键基因14-3-3σ表达明显低于青年对照组,DR6、BAX、Caspase-3、Cyt-C表达明显高于青年对照组;而何首乌饮用药后能明显逆转上述现象。结论何首乌饮提高衰老大鼠精子质量与线粒体凋亡通路有关。 展开更多
关键词 何首乌饮 睾丸 线粒体凋亡通路 实时定量聚合酶链反应 免疫荧光 免疫印迹法 衰老 大鼠
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骨髓间充质干细胞分离鉴定及在糖尿病大鼠肾脏保护中的机制研究 被引量:2
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作者 康岩 李志杰 +3 位作者 王丽娜 郭玉卿 刘璠 张洁 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期673-678,共6页
目的:观察骨髓间充质干细胞分离、鉴定方法及在糖尿病大鼠肾脏保护中的机制。方法:取大鼠31只,1只大鼠采用贴壁培养法分离大鼠骨髓间充质干细胞,利用相差显微镜观察细胞形态,Real-time PCR检测培养细胞表面分子量。30只大鼠采用链脲佐... 目的:观察骨髓间充质干细胞分离、鉴定方法及在糖尿病大鼠肾脏保护中的机制。方法:取大鼠31只,1只大鼠采用贴壁培养法分离大鼠骨髓间充质干细胞,利用相差显微镜观察细胞形态,Real-time PCR检测培养细胞表面分子量。30只大鼠采用链脲佐菌素腹腔注射构建糖尿病大鼠模型。根据处理方法不同分为对照组(n=15)和干细胞治疗组(n=15)。对照组大鼠采用胰岛素联合普罗布考治疗,干细胞治疗组植入干细胞治疗,治疗前、后检测2组大鼠空腹血糖、24 h尿蛋白排泄、肌酐清除率、肾重比体重;采用PAS染色观察2组肾组织情况;采用Western blot检测肾脏组织相关基因和蛋白水平。结果:原代骨髓间充质干细胞培养24 h后换液时可见细胞分布不均匀,在培养瓶呈分片聚集,形态不规则。培养7 d后细胞集落多,细胞规则,呈长梭形、椭圆形,折光性强,细胞间相互融合铺满瓶底;骨髓间充质干细胞传代培养后细胞形态均一,呈长梭形,轮廓清除,折光性强,生长迅速,部分细胞呈漩涡状;Real-time PCR检测结果显示:SH2、CD44、CD31呈阳性表达,CD34呈阴性表达;观察组治疗后空腹血糖、24 h尿蛋白排泄、肌酐清除率、肾重比体重,显著低于对照组(P<0.05);干细胞治疗组大鼠肾脏组织PAS染色结果显示:肾小球结构清晰,形态规则,肾小球内细胞排列规则,基底膜和包曼氏囊清晰。对照组大鼠肾小球体积增大,系膜区增宽,基质明显增多;干细胞治疗组治疗后Bcl-2蛋白水平得到显著提高,Bax和Caspase-3蛋白水平得到显著下降。对照组Bcl-2蛋白水平得到显著降低,Bax和Caspase-3蛋白水平得到提高(P<0.05)。2组治疗前氧化应激ROS、MDA、SOD指标差异无统计学意义(P>0.05);干细胞治疗组治疗后氧化应激ROS、MDA、SOD指标,低于对照组(P<0.05)。结论:利用贴壁培养法能分离大鼠骨髓间充质干细胞并利用绿色荧光蛋白进行体外标记,植入骨髓间充质干细胞能保护机体肾脏,抑制糖尿病肾脏的氧化应激反应。 展开更多
关键词 糖尿病肾病 骨髓间充质干细胞 肾脏保护 相链脲佐菌素 PAS染色 real-time pcr western blot
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遗传性癫痫大鼠海马内GAT-1和GAT-3表达上调 被引量:4
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作者 毛小元 俞军龄 +6 位作者 闵冬雨 郭凤 刘睿 吴坤灿 张宇轩 谢妮 蔡际群 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期629-633,共5页
目的探讨遗传性癫痫大鼠(TRM)海马内GAT-1和GAT-3mRNA与蛋白的表达。方法应用RT-PCR技术检测GAT-1和GAT-3mRNA的表达;应用Westernblot方法检测GAT-1和GAT-3蛋白的表达;应用免疫组化方法定位GAT-1和GAT-3蛋白的分布。结果TRM大鼠海马内GA... 目的探讨遗传性癫痫大鼠(TRM)海马内GAT-1和GAT-3mRNA与蛋白的表达。方法应用RT-PCR技术检测GAT-1和GAT-3mRNA的表达;应用Westernblot方法检测GAT-1和GAT-3蛋白的表达;应用免疫组化方法定位GAT-1和GAT-3蛋白的分布。结果TRM大鼠海马内GAT-1mR-NA和蛋白表达均高于正常Wistar大鼠(P<0.01);GAT-3mRNA表达高于正常Wistar大鼠(P<0.05);GAT-3蛋白表达亦高于正常Wistar大鼠(P<0.01);免疫组化结果显示GAT-1在TRM和Wistar大鼠海马的CA1、CA3和DG区均有明显分布,且在TRM鼠海马的CA1、CA3和DG区中均比在正常Wistar鼠中明显;而GAT-3蛋白只在TRM和Wistar大鼠海马的CA1区中表达丰富,同时,和正常Wistar鼠比较,TRM鼠海马CA1区中GAT-3蛋白的表达明显增加。结论TRM大鼠海马内GAT-1和GAT-3表达上调可能促进了癫痫的发生,可能是癫痫治疗的靶点。 展开更多
关键词 GAT-1 GAT-3 TRM大鼠 癫痫 RT-pcr 免疫组化 western blot
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创伤后应激障碍大鼠前额叶内侧皮质糖皮质激素受体表达增高 被引量:6
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作者 张景华 李慢 +1 位作者 石玉秀 韩芳 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期151-154,共4页
目的观察创伤后应激障碍(PTSD)大鼠前额叶内侧皮质(mPFC)神经元糖皮质激素受体(GR)表达的变化。方法采用单一连续应激(SPS)方法建立PTSD大鼠模型,取成年健康雄性Wistar大鼠90只,随机分为PTSD模型1d、7d、14d、28d和正常对照组。采用免... 目的观察创伤后应激障碍(PTSD)大鼠前额叶内侧皮质(mPFC)神经元糖皮质激素受体(GR)表达的变化。方法采用单一连续应激(SPS)方法建立PTSD大鼠模型,取成年健康雄性Wistar大鼠90只,随机分为PTSD模型1d、7d、14d、28d和正常对照组。采用免疫组织化学、免疫印迹和RT-PCR方法分别进行各组mPFC神经元GR表达变化的观察及检测,进行图像分析和统计学处理。结果 PTSD大鼠mPFC神经元GR的表达高于对照组,SPS后14d最高,SPS后28d恢复性下调,但仍然高于对照组(P<0.05)。结论 PTSD模型大鼠经SPS处理后,mPFC区域出现GR表达的增高。 展开更多
关键词 创伤后应激障碍 前额叶内侧皮质 糖皮质激素受体 免疫组织化学 免疫印迹法 反转录-聚合酶 链反应 大鼠
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FATP4在大鼠非酒精性脂肪肝中的作用 被引量:7
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作者 冯爱娟 王军 陈东风 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第19期1726-1728,共3页
目的 研究脂肪酸转运蛋白 (fattyacidtransportprotein4,FATP4)基因在大鼠非酒精性脂肪肝形成中的作用。方法 建立高脂饮食脂肪肝模型 ,用半定量逆转录聚合酶链反应 (reversetranslationpolymerasechainreaction ,RT PCR)与蛋白质印迹... 目的 研究脂肪酸转运蛋白 (fattyacidtransportprotein4,FATP4)基因在大鼠非酒精性脂肪肝形成中的作用。方法 建立高脂饮食脂肪肝模型 ,用半定量逆转录聚合酶链反应 (reversetranslationpolymerasechainreaction ,RT PCR)与蛋白质印迹 (Westernblot)方法测定脂肪肝肝组织中FATP4表达变化。结果 高脂饮食脂肪肝大鼠肝脏中FATP4于 2周时其mRNA及蛋白表达增强 ,于 12周时表达最为明显 ,与正常组比较相差显著 (P <0 0 5 )。结论 高脂饮食引起FATP4表达增强 ,最初是一种适应性反应 ,随着FATP4表达进一步增强 ,导致脂肪酸代谢失衡 ,可能引起脂肪肝的发生。 展开更多
关键词 大鼠 非酒精性脂肪肝模型 脂肪酸转运蛋白 逆转录聚合酶链反应 蛋白质印迹
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mGluR1在自发性癫痫大鼠海马中的表达 被引量:4
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作者 王清华 杨丹 +1 位作者 蔡际群 孙凤 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1143-1146,共4页
目的检测自发性癫痫大鼠海马中mGluR1的表达情况。方法RT-PCR技术检测鼠海马中mGluR1基因的表达;利用免疫组化和Western blot方法检测鼠海马中mGluR1总蛋白的表达。结果自发性癫痫大鼠海马中mGluR1基因总水平下降(P<0.05),免疫组化... 目的检测自发性癫痫大鼠海马中mGluR1的表达情况。方法RT-PCR技术检测鼠海马中mGluR1基因的表达;利用免疫组化和Western blot方法检测鼠海马中mGluR1总蛋白的表达。结果自发性癫痫大鼠海马中mGluR1基因总水平下降(P<0.05),免疫组化显示海马DG区和CA3区的mGluR1蛋白表达均下降(P<0.05),CA1区无变化(P>0.05),mGluR1阳性的神经细胞其密度较正常鼠增强;Western blot检测mGluR1蛋白总量下降(P<0.05)。结论自发性癫痫大鼠海马中总mGluR1表达下调,单一细胞表达增强。 展开更多
关键词 MGLUR1 RT—pcr 免疫组化 western blot 自发性癫 痫大鼠
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