探讨流式HLA-B27平均荧光强度用于原发强直性脊椎炎及继发性脊椎炎的鉴别诊断

目的探讨B27平均荧光强度用于原发性强直性脊椎炎(AS)及继发性脊椎炎鉴别诊断的可能性及B27 DNA亚型差异对流式B27平均荧光强度的影响;对流式(FCM)B27/B7双标法用于AS患者B27表达情况的测定进行评估。方法采用FCM双标法、微量淋巴细胞毒试验(CDC)及引物特异性多聚酶链反应(SSP-PCR),对76例正常人、57例原发AS病和106例继发性脊椎炎进行B27测定;并用寡核苷酸探针杂交(SSOPH)对50例B27血清学阳性原发AS进行B27 DNA分型。结果原发性AS及继发性脊椎炎患者B27平均荧光强度差异无统计学意义(P>0.05);HLA B27 04型和HLA B27 05型的流式B27平均荧光强度差异无统计学意义(P>0.05);CDC、SSP-PCR和FCM双标法特异性和敏感性分别为76.3%和78.5%、88.4%和86.3%、86.8%和88.85%。结论FCM B27平均荧光强度尚不能用于原发性AS及继发性脊椎炎患者鉴别诊断;不同B27 DNA亚型的B27平均荧光强度可能无差异;FCM HLA-B 27/B7双标法是一种快捷、简便、高效的HLA-B27检测方法。

HLA-DR_3基因与胰岛素依赖型糖尿病相关性研究

目的 探讨HLA -DR3 基因与胰岛素依赖型糖尿病相关性。方法 对 10 0例汉族正常无血缘关系的个体和按WHO糖尿病诊断标准确诊的 5 4名汉族胰岛素依赖型糖尿病 (IDDM )患者 ,采用非放射同位素地高辛标记的DR3 基因碱基序列特异性寡核苷酸探针 (DRB10 30 1,0 30 2 ) ,进行斑点杂交 (Dot,blot)。结果 结果显示正常对照组DR3 基因 (DRB10 30 1)携带者为 6 % ,而IDDM病人高达 5 3 6 % ,RR =18 17(P <0 0 0 1)。结论 通过本研究表明HLA -DR3基因与胰岛素依赖型糖尿病密切相关 ,该基因可能就是我国汉族人群胰岛素依赖型糖尿病的易感基因之一。

地高辛配基标记DNA探针检测HLAⅡ类基因技术的建立

本文报道了采用序列特异性寡核苷酸探针杂交(SSOPH)检测HLAⅡ类基因(DRB、DQB)多态性的方法。实验包括少量全血提取模板DNA、PCR基因扩增基因多态性区域片断、尼龙膜点样、特异性寡核苷酸探针合成及地高辛配基(DIG-11-ddUTP)标记、探针杂交;条件洗涤、化学发光显影等一系列步骤。该实验方法具有用血量少、结果精确稳定、操作简便安全、不污染环境等优点。作者对模板DNA的提取、杂交缓冲液制备、标记探针的使用剂量以及条件洗涤等多个环节作了改良,使实验方法和结果进一步优化。

中国南方汉族人群HLA-DQA1位点多态性与系统性红斑狼疮易感性分析

应用多聚酶链反应/序列特异寡核苷酸探针杂交(PCR/SSOPH)方法,探讨了我国东南沿海汉族人群HLA-DQA1等位基因多态性与系统性红斑狼疮(SLE)的易感性关系。对50例SLE患者和67例健康人对照血样本分析,表明SLE患者具有显著高的DQA1*0102等位基因频率,OR=46.04,P<0.001,可能是一易感等位基因;而DQA1*0501在病例与对照中呈相反结果,OR=0.042,P=0.003,可能为一拮抗等位基因。