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柑橘苗期SSR鉴定分析体系的优化及初步应用 被引量:4
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作者 韩国辉 魏旭 +3 位作者 向素琼 汪卫星 何波 梁国鲁 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第2期699-702,共4页
本文以柑橘幼苗微量叶片(3~5 mg)为材料,改进柑橘基因组DNA提取方法,并对3种PAGE凝胶浓度和3种银染色方法进行了筛选和优化,建立了一种经济,高效的柑橘苗期SSR分析体系。试验结果表明:该微量叶片提取方法需材少,用时短,所提取基因组DN... 本文以柑橘幼苗微量叶片(3~5 mg)为材料,改进柑橘基因组DNA提取方法,并对3种PAGE凝胶浓度和3种银染色方法进行了筛选和优化,建立了一种经济,高效的柑橘苗期SSR分析体系。试验结果表明:该微量叶片提取方法需材少,用时短,所提取基因组DNA质量好、纯度高,完全适用于SSR-PCR扩增反应。9%的PAGE凝胶浓度最适合柑橘SSR标记的电泳检测,扩增出的条带清晰,分散良好。改进的两种快速银染方法相对于传统的染色方法染色效果较好,且更加经济。初步对两个柑橘杂交幼苗群体进行了遗传鉴定和分析,2对引物从24株沙田柚与强德勒柚杂交幼苗中鉴定出17株杂种,4对引物在沙田柚与红江橙杂交群体中扩增出14条多态性条带,占总条带数的70.0%。表明所建立的SSR优化体系可为柑橘分子辅助育种提供技术参考。 展开更多
关键词 柑橘 苗期 ssr体系 优化
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果梅SSR反应体系的优化 被引量:43
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作者 高志红 章镇 +1 位作者 韩振海 沈志军 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期19-22,共4页
以果梅品种小叶猪肝为试材 ,研究了果梅SSR技术中PCR反应体系的主要成分对SSR扩增结果的影响 ,并比较了采用聚丙稀酰胺凝胶及琼脂糖电泳检测扩增产物多态性的差异。结果表明 :在PCR反应体系中 ,Mg2 + 的最适浓度范围为1 89~ 2 83mmol&... 以果梅品种小叶猪肝为试材 ,研究了果梅SSR技术中PCR反应体系的主要成分对SSR扩增结果的影响 ,并比较了采用聚丙稀酰胺凝胶及琼脂糖电泳检测扩增产物多态性的差异。结果表明 :在PCR反应体系中 ,Mg2 + 的最适浓度范围为1 89~ 2 83mmol·L-1;dNTP最适浓度为 0 2 4mmol·L-1;引物的最适浓度为 0 38μmol·L-1;Taq 聚合酶在 2 6 5 μL反应体系中宜加入 1U。利用此反应体系 ,对 2 4个果梅代表品种进行了SSR反应 ,用 8%的非变性聚丙稀酰胺凝胶电泳检测 ,扩增产物在 10 0~ 2 0 0bp之间 ,不同品种间DNA谱带多态性丰富。 展开更多
关键词 果梅 ssr反应体系 优化 简单重复序列
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苹果SSR反应体系的建立 被引量:26
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作者 徐兴兴 梁海永 +1 位作者 甄志先 杨敏生 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期161-164,共4页
为摸索适宜苹果的SSR反应体系,以金冠苹果为试验材料,研究了苹果SSR技术中PCR反应体系的主要成分对SSR扩增结果的影响。对SSR反应体系中的Mg2+浓度、引物浓度、dNTP浓度、TaqDNA聚合酶浓度、模板浓度以及退火温度进行了探索,确立了适合... 为摸索适宜苹果的SSR反应体系,以金冠苹果为试验材料,研究了苹果SSR技术中PCR反应体系的主要成分对SSR扩增结果的影响。对SSR反应体系中的Mg2+浓度、引物浓度、dNTP浓度、TaqDNA聚合酶浓度、模板浓度以及退火温度进行了探索,确立了适合苹果的SSR反应体系为:在20μL反应体系中,Mg2+、引物和dNTP的最适浓度分别为2.5mmol/L、0.8μmol/L、0.10mmol/L;反应体系中TaqDNA聚合酶宜加入1U,模板DNA应加入15-30ng;引物的最佳退火温度为48.5-52.0℃。并利用该反应体系对10个苹果代表品种进行SSR反应,用8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,不同品种间DNA谱带多态性丰富,证实该体系稳定可靠。 展开更多
关键词 苹果 金冠 ssr反应体系
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珍稀濒危树种毛红椿微卫星DNA分离及SSR反应体系优化 被引量:24
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作者 刘军 孙宗修 +2 位作者 陈益泰 何贵平 吴天林 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期50-55,共6页
以江西宜丰种源毛红椿为材料,成功提取其基因组DNA。利用改良的链亲和素磁珠法亲和捕捉出毛红椿基因组微卫星DNA片段,并构建了富含微卫星的基因组文库。从构建的基因组文库中随机挑选了63个单克隆进行测序,其中50个单克隆成功测序,含有... 以江西宜丰种源毛红椿为材料,成功提取其基因组DNA。利用改良的链亲和素磁珠法亲和捕捉出毛红椿基因组微卫星DNA片段,并构建了富含微卫星的基因组文库。从构建的基因组文库中随机挑选了63个单克隆进行测序,其中50个单克隆成功测序,含有微卫星的单克隆有18个,并根据测序结果设计并合成SSR引物18对。利用所合成的引物优化SSR反应体系,对影响SSR反应的各个因子进行了探讨。确定了模板DNA最适浓度为30ng;dNTP的最适浓度为0.3mmol/L;0.3μmol/L是引物在反应体系中的最合适浓度。建立了重复性好、稳定性好的SSR反应体系,为下一步进行毛红椿群体遗传结构和遗传变异研究提供了技术支持。 展开更多
关键词 毛红椿 微卫星 链亲和素磁珠 ssr反应体系
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椰子SSR反应体系的建立和优化 被引量:8
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作者 柳晓磊 汤华 +3 位作者 李东栋 王茜 周蓉 林艳青 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期676-679,共4页
为摸索适宜椰子的SSR反应体系,分析了PCR反应体系中的Mg2+浓度、引物浓度、dNTP浓度、TaqDNA聚合酶浓度、模板浓度以及退火温度对扩增结果的影响,建立了适合椰子的SSR反应体系。研究结果表明:在20μL反应体系中,Mg^2+、引物和dNTP的... 为摸索适宜椰子的SSR反应体系,分析了PCR反应体系中的Mg2+浓度、引物浓度、dNTP浓度、TaqDNA聚合酶浓度、模板浓度以及退火温度对扩增结果的影响,建立了适合椰子的SSR反应体系。研究结果表明:在20μL反应体系中,Mg^2+、引物和dNTP的最适浓度分别为2.5 mmol/L、0.3μmol/L、0.2 mmol/L;TaqDNA聚合酶的最佳使用量为1 U,模板DNA应加入50 ng,引物最佳退火温度比Tm值较小者低2-3℃。在参数优化的基础上,应用标记分析该反应体系对24个海南不同地区高种椰子样品进行SSR分析,不同样品间DNA谱带多态性丰富,本研究建立的分析体系将为今后椰子资源的SSR分析奠定良好的研究基础。 展开更多
关键词 椰子(Cocosnucifera L.) ssr反应体系 优化
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基于SSR分子标记的杜仲遗传多样性体系建立 被引量:12
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作者 黄海燕 杜红岩 +1 位作者 乌云塔娜 朱高浦 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2013年第6期795-799,共5页
杜仲(Eueommia ulmoides Oliver)属杜仲科(Eu.commiaceae),单科单属单种,为第四纪冰川侵袭后残留下的古老树种,仅存于中国,属国家二级保护植物。杜仲的适应性极强,分布在我国亚热带至温带的27个省(市、区),美国、法国、日... 杜仲(Eueommia ulmoides Oliver)属杜仲科(Eu.commiaceae),单科单属单种,为第四纪冰川侵袭后残留下的古老树种,仅存于中国,属国家二级保护植物。杜仲的适应性极强,分布在我国亚热带至温带的27个省(市、区),美国、法国、日本、韩国等都有引种。杜仲是我国特有的优质天然橡胶和中药资源,杜仲的皮、叶、雄花、果实等具有很高的药用价值及经济效益,尤其是杜仲富含天然橡胶一杜仲胶,是国家战略性储备资源。 展开更多
关键词 杜仲 种质资源 ssr—PCR反应体系 引物筛选
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硅胶干燥野扁桃叶片制备DNA样品及其SSR反应体系的建立 被引量:8
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作者 曾斌 罗淑萍 +2 位作者 李疆 程运江 廖康 《经济林研究》 2009年第1期1-6,共6页
对硅胶干燥保存制备新疆野扁桃DNA样品和SSR反应体系优化进行了研究。结果表明:在室温下贮存3个月、6个月、9个月、1年和2年的硅胶干燥的同一野扁桃叶片材料中采用改进的CTAB法提取了高质量的基因组总DNA,较好的克服了野扁桃叶片中含... 对硅胶干燥保存制备新疆野扁桃DNA样品和SSR反应体系优化进行了研究。结果表明:在室温下贮存3个月、6个月、9个月、1年和2年的硅胶干燥的同一野扁桃叶片材料中采用改进的CTAB法提取了高质量的基因组总DNA,较好的克服了野扁桃叶片中含有较高的多糖、多酚、色素以及单宁等次生物质的影响。通过A260/A280琼脂糖凝胶电泳和PCR—SSR扩增结果分析对提取的基因组DNA进行了鉴定,2年内不同保存时期的同一材料对于DNA提取没有明显差异,提取的DNA用于SSR扩增所得的扩增产物也均无明显差异;确立野扁桃最佳的PCR--SSR反应体系是30-50ngDNA模板,0.5UTaqDNA聚合酶,2.0mmol·L^-1OMgCl2,0.2mmol·L^-1dNTPs,0.2mmol·L^-1的引物,10×Taq酶酉己套缓冲液(pH8.0)。反应终体积20μL,引物最佳退火温度为54~57℃。利用40个野扁桃随机叶样验证此反应体系,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果显示,扩增产物在200~600bp,多态性高,且反应体系的稳定性和可重复性好。 展开更多
关键词 新疆野扁桃 硅胶保存 基因组DNA ssr反应体系
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云南栘[木衣]总DNA提取方法比较及SSR反应体系优化 被引量:5
8
作者 张新洛 彭劲谕 +1 位作者 王玉昌 王大玮 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1064-1070,共7页
【目的】从云南栘[木衣]叶片中提取高质量的总DNA,并建立稳定的SSR-PCR反应体系。【方法】以云南栘[木衣]幼嫩叶片为材料,采用尿素法、改良尿素法、SDS法、CTAB法、MAGEN试剂盒法和磁珠试剂盒法提取总DNA,从中筛选提取云南栘[木衣]总DN... 【目的】从云南栘[木衣]叶片中提取高质量的总DNA,并建立稳定的SSR-PCR反应体系。【方法】以云南栘[木衣]幼嫩叶片为材料,采用尿素法、改良尿素法、SDS法、CTAB法、MAGEN试剂盒法和磁珠试剂盒法提取总DNA,从中筛选提取云南栘[木衣]总DNA的最佳方法;利用L_(16)(4^(5))的正交设计试验优化影响云南栘[木衣]SSRPCR扩增体系的影响因子,建立云南栘[木衣]SSR-PCR反应体系。【结果】改良尿素法为云南栘[木衣]总DNA的最佳提取方法,提取的总DNA质量浓度、总量和A_(260)/A_(280)分别为382.64 ng/μL、38.26μg和1.87,且琼脂糖凝胶电泳的条带清晰明亮,说明DNA完整性好、质量浓度高。优化后的SSR-PCR扩增反应体系为:模板DNA 30 ng,Taq DNA聚合酶0.5 U,引物1.25μmol/L,Mg^(2+)2.0 mmol/L,dNTPs 2.5 mmol/L,10×PCR buffer 2.5μL,补水至25μL。【结论】改良尿素法能够从云南栘[木衣]中提取高质量的总DNA,所建立的SSR-PCR反应体系为云南栘[木衣]的遗传多样性分析和分子标记辅助育种等研究提供了技术支持。 展开更多
关键词 云南栘[木衣] DNA提取 改良尿素法 ssr体系
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樟子松SSR反应体系优化 被引量:7
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作者 方攀 张运城 +2 位作者 袁虎威 刘玉林 李伟 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期413-419,共7页
从模板DNA、Taq酶含量、dNTP浓度、引物浓度、退火温度、循环次数6个方面,分别设置单因素多水平试验,观察条带的亮度及清晰度,以确定合适的反应体系。然后利用L16(45)正交试验,对DNA模板浓度、Taq酶含量、dNTP浓度、引物浓度这4个因素在... 从模板DNA、Taq酶含量、dNTP浓度、引物浓度、退火温度、循环次数6个方面,分别设置单因素多水平试验,观察条带的亮度及清晰度,以确定合适的反应体系。然后利用L16(45)正交试验,对DNA模板浓度、Taq酶含量、dNTP浓度、引物浓度这4个因素在4个水平上做进一步优化。建立了樟子松SSR最佳反应体系:25μL的反应体系中包含模板DNA50ng,Taq酶1.0U,dNTP0.3mmol/L,引物0.15μmol/L,10×TaqBuffer(含Mg2+)2.5μL。樟子松SSR反应体系的优化,有助于对樟子松SSR分子标记的研究,为分析樟子松天然群体和人工群体的遗传结构多样性,构建遗传图谱和定位功能基因奠定了基础。 展开更多
关键词 樟子松 ssr反应体系 正交试验
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Optimization of SSR-PCR Reaction System and Screening of Polymorphic Primers for RIL Parents
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作者 程江 郑常祥 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2013年第11期1566-1568,1631,共4页
[Objective] This study aimed to establish a high-efficiency and stable SSR amplification system and screen polymorphic primers in order to further compare the tri-group probability analysis method and traditional QTL ... [Objective] This study aimed to establish a high-efficiency and stable SSR amplification system and screen polymorphic primers in order to further compare the tri-group probability analysis method and traditional QTL mapping method. [Method] In this study, we preliminarily screened the 605 pairs of primers evenly distributed on the 12 chromosomes through investigating their polymorphism performance in amplification, and established an optimized SSR-PCR reaction system. [Result] A 10μL SSR-PCR reaction system suitable for rice was set up as fol ows: 2 μl of 10 × Buffer, 2.0 mmol/L Mg2+ (final concentration), 0.5 mmol/L dNTPs, 1.0 μmol/L primers (final concentration), 1 μl of DNA template, 0.15 U Taq DNA polymerase. Among the SSR primers distributed over the genome, 142 pairs that were polymorphic upon the parents were screened. [Conclusion] This study lays a good foundation for sub-sequent QTL mapping studies. 展开更多
关键词 Ricei ssr Optimization of ssr-PCR reaction system Primer screening
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甜菜SSR—PCR反应体系优化及基于DNA混合池的SSR引物快速筛选 被引量:1
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作者 刘乃新 吴玉梅 张福顺 《中国甜菜糖业》 2014年第4期16-19,共4页
应用L16(4^4)正交设计对影响甜菜SSR—PCR的主要参数进行优化,建立适于甜菜的SSR反应体系和扩增程序。20ul反应体系中含有模板70ngDNA,150umol/LdNTP,0.7umol/LSSR引物,0.5TaqDNA聚合酶/U,10×PCRBuffer(含Mg^2+)2.... 应用L16(4^4)正交设计对影响甜菜SSR—PCR的主要参数进行优化,建立适于甜菜的SSR反应体系和扩增程序。20ul反应体系中含有模板70ngDNA,150umol/LdNTP,0.7umol/LSSR引物,0.5TaqDNA聚合酶/U,10×PCRBuffer(含Mg^2+)2.0ul。以选择的87对SSR引物为对象,对10个甜菜基因组DNA样品等量混合,进行PCR扩增筛选引物,结果表明,与常规筛选方法相比,DNA混合池方法大幅度缩短了实验周期,显著减少了实验资源的消耗,可用于大量甜菜SSR引物的快速高效筛选。 展开更多
关键词 甜菜 ssr—PCR反应体系优化 引物筛选 基因组DNA混合池
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Genetic diversity of oil-tea camellia germplasms revealed by ISSR analysis 被引量:1
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作者 Lan-Ying Zhou Xiang-Nan Wang +2 位作者 Li-Ping Wang Yong-Zhong Chen Xiao-Cheng Jiang 《International Journal of Biomathematics》 2015年第5期331-354,共24页
Genetic diversity of 51 oil-tea camellia germplasms was analyzed using the optimized inter-simple sequence repeat (ISSR)-PCR reaction system with 22 primers screened from a set of 100 ISSR primers. The results showe... Genetic diversity of 51 oil-tea camellia germplasms was analyzed using the optimized inter-simple sequence repeat (ISSR)-PCR reaction system with 22 primers screened from a set of 100 ISSR primers. The results showed that 493 discernible loci with distinct elec- trophoretic bands were obtained, of which, 478 loci (96.78%) were polymorphic. This indicated that oil-tea germplasms possess abundant genetic diversities. By clustering analysis performed using softwares of NTSYS 2.10 and Winboot, 51 oil-tea germplasms were divided into two groups: Group I had 48 lines of Camellia oleifera Abel, while Group II had three C. oleifera Abel related species and their similarity coefficient was 0.62. Group I was further divided into Group I-1 and Group I-2, and their similarity coefficient (Gs) was 0.634. All members of Group I-1 originated from Hunan Province, while Group I-2 included the rest of Hunan lines and those originated from other regions of China. Analyzed by software POPGENE 1.32, the Shannon's information index (I*) of genetic polymorphism was 0.3852, the genetic diversity among different region popula- tions (Ht) was 0.2537, the genetic diversity within populations (Hs) was 0.15545, the dif- ferentiation coefficient of genetic diversity among populations (Gst) was 0.3967, and the gene flow among populations (Nm*) was 0.8262. The Nei's genetic distances between the Hunan population and the populations originated from other regions of China implied that geographic isolation strongly influenced genetic differentiation among populations. Meanwhile, seedling rootstock grafting and high grafting for tree crown produced genetic variations among clonal offsprings. 展开更多
关键词 Oil-tea camellia Issr genetic diversity grafting.
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