孪药ST-11对氧糖剥夺/再灌注致PC12细胞损伤的保护作用及机制

目的研究川芎嗪-灯盏乙素苷元孪药ST-11对氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)致大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤PC12细胞损伤的保护作用及机制。方法将细胞分为空白组、模型组、尼莫地平组(阳性对照,5μmol/L)、ST-11不同浓度组(5、10、20μmol/L)。预先给药干预24 h后,除空白组外的其余各组细胞均以含10 mmol/L Na_(2)S_(2)O_(4)的无糖DMEM培养基缺糖缺氧培养4 h,待复糖复氧培养4 h后,检测各组细胞的存活率,细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量,细胞凋亡率,细胞活性氧(ROS)和线粒体膜电位(MMP)水平,以及B细胞淋巴瘤2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)及胱天蛋白酶3(caspase-3)蛋白的表达情况。结果与空白组比较,模型组的细胞存活率,上清液中CAT、GSH和SOD含量,细胞MMP水平,细胞Bcl-2蛋白的相对表达量和Bcl-2/Bax比值均显著降低(P<0.05),而上清液中LDH、MDA含量,细胞ROS水平,细胞凋亡率,细胞Bax、caspase-3蛋白的相对表达量均显著升高(P<0.05)。与模型组比较,ST-11各浓度组上述指标(5μmol/L ST-11组caspase-3蛋白除外)均显著逆转(P<0.05)。结论ST-11对OGD/R致PC12细胞损伤具有一定的保护作用,且作用可能与减少细胞氧化应激、抑制细胞凋亡有关。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱用于产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌ST11分型的研究

目的探讨基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)用于产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌ST11分型。方法收集2012年10月-2014年10月5所医院的80株产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌菌株。经多位点序列分析(MLST),28株为ST11型,52株为其他分型(other sequence type,OST)。通过MSP dendrogram聚类分析、MALDI Biotyper建立数据库、Clin Pro Tools建立模型3种方法研究ST11分型的可能性。结果 MSP dendrogram聚类分析在距离水平线1000处可将80株菌聚类分析为两类,敏感性为65.78%,特异性为92.85%。MALDI Biotyper数据库验证结果:18株ST11有1株菌分为OST,32株OST有2株菌被分为ST11,敏感性为89.47%,特异性为96.77%。Clin Pro Tools用其余菌株验证模型全部正确,敏感性和特异性均为100%。结论 MALDI-TOF MS可通过3种方法区别ST11与OST,以Clin Pro Tools软件建立模型的方法最可靠。

碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌ST11菌株的基因组学特点分析

目的分析碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)ST11菌株的基因组学特点。方法挑取南京地区流行的3株CRKP-ST11菌株,提取基因组DNA,进行全基因组学测序,获得拼接后的全基因组。同时,从NCBI数据库中下载HS11286(中国上海)、JM45(中国杭州)、ATCC BAA-2146(美国/印度)的基因组为对照菌株,进行基因组GC碱基含量、单核苷酸多态性、亲缘关系及荚膜多糖(CPS)基因簇结构分析。结果CPS基因簇的G+C含量大多<50%,不同于染色体其他部分,是CRKP-ST11的主要单核苷酸多态性位点;进化树分析显示南京地区分离的3株CRKP-ST11菌株与上海、杭州的CRKP-ST11亲缘关系相近,与美国/印度的CRKP-ST11较远。这3株CRKP-ST11的CPS基因簇一致,与杭州、上海及美国/印度的3株CRKP-ST11菌株的差异主要在CPS可变区。结论CPS是CRKP-ST11的主要单核苷酸多态性位点,可能是CRKP-ST11菌株的主要进化区,CRKP-ST11的流行可能与CPS基因簇可变区有关,具有地域特点。

重症监护室患者胃肠道产KPC-2肺炎克雷伯菌ST11株的分布调查及遗传相关性分析

目的分析产KPC-2肺炎克雷伯菌ST11株在南京大学附属鼓楼医院重症监护室(Intensive Care Unit,ICU)住院患者胃肠道的定植情况,并分析bla_(KPC-2)阳性肺炎克雷伯菌ST11菌株之间的遗传相关性。方法采集我院ICU患者的肛拭子,使用含有0.5μg/mL美罗培南的麦康凯平板筛选碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌,K-B法测定其对临床常用抗菌药物的敏感性;采用PCR法和DNA测序技术检测bla_(KPC-2)基因;多位点序列分型技术分析bla_(KPC-2)基因阳性肺炎克雷伯菌的序列分型(sequence type,ST),筛选出ST11菌株。脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)技术分析产bla_(KPC-2)肺炎克雷伯菌ST11菌株之间的遗传相关性。结果共收集肛拭子125份,30株(24.2%)为碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌。其中,27株(90.0%)携带bla_(KPC-2)基因,26株(86.7%)细菌为肺炎克雷伯菌ST11,25株(83.3%)细菌为产KPC-2肺炎克雷伯菌ST11株。PFGE结果显示,19株产KPC-2肺炎克雷伯菌ST11菌株之间有很大的遗传相关性。结论产bla_(KPC-2)肺炎克雷伯菌ST11株在我院ICU患者胃肠道中定植广泛,可能是其感染的主要病原菌,需加强感染控制措施。

首例同时携带bla_(NDM-1)、bla_(KPC-2)、bla_(DHA-1)、bla_(TEM-1)和bla_(OXA-1)基因的ST11肺炎克雷伯菌临床株

目的探讨产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的耐药机制,为医院感染控制提供依据。方法法国VITEK-2Compact对细菌进行鉴定和药敏试验;改良Hodge试验初筛肺炎克雷伯菌是否产碳青霉烯酶;多重PCR对菌株进行β-内酰胺类耐药基因和16SrRNA甲基化酶基因的检测,测序确认基因型;多位点序列分型和脉冲场凝胶电泳实验进行细菌的同源性分析。结果 5株肺炎克雷伯菌多位点序列分型是ST11型,其中4株都同时携带有blaKPC-2、blaTEM-1、blaCTXG9和16SrRNA甲基化酶rmtB基因,另外1株(HD03)肺炎克雷伯菌同时携带blaNDM-1、blaKPC-2、blaDHA-1、blaTEM-1和blaOXA-1基因。脉冲场凝胶电泳显示,除了HD04菌株多一条带外,其余带型5株菌完全一致。结论经检索,肺炎克雷伯菌同时携带blaNDM-1、blaKPC-2、blaDHA-1、blaTEM-1和blaOXA-1基因为国内外首次报道,且该感染者无国外流行病学史。因此,要进一步加强对碳青霉烯类耐药的肠杆菌的医院感染控制和预防。

产NDM-1和产KPC-2耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌临床及分子流行病学特征比较

目的比较产NDM-1和产KPC-2耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的临床及分子流行病学特征。方法回顾性分析2017—2020年某儿童医院非重复儿童住院患者临床分离的CRKP,查阅菌株来源患者的病历资料获得患者的基本临床特征。对CRKP进行药敏试验及多位点序列分型(MLST)分析,比较产NDM-1和产KPC-2的CRKP临床及分子流行病学特征。结果2017—2020年共收集164株CRKP菌株,其中96株携带bla NDM-1,68株携带bla KPC-2,产NDM-1的CRKP主要分布在新生儿科室,产KPC-2的CRKP以非新生儿科室居多,两组在标本来源、患者年龄、科室分布和预后情况方面比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);产NDM-1的CRKP菌株以ST 17型和ST 278型为主,分别为40.63%、18.75%;而产KPC-2的CRKP菌株以ST 11为主,达73.53%。产KPC-2的CRKP分离株对头孢吡肟、氨曲南、亚胺培南、阿米卡星、庆大霉素、呋喃妥因和磷霉素的耐药率均高于产NDM-1的CRKP分离株,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论产NDM-1和产KPC-2的CRKP菌株在临床及分子流行病学方面均存在差异,产KPC-2的CRKP菌株表现出更严重的耐药性,感染KPC-2 CRKP的患者预后较差,应引起临床和感控的重视。

低钙血症患儿心电图ST／TP比值测定的意义

目的探讨测定低钙血症患儿心电图ST/TP比值的临床意义。方法采用日本福田公司NIHOH KOHDEN CardiofaxQ ECG-9130P电脑心电图系统12导联同步心电图机,对61例低钙血症患儿ST/TP比值进行检测,并与31例同期健康儿童进行对照分析,同时用临床电解质分析仪测定血清离子钙水平。采用SPSS11.5软件进行统计学处理,P<0.05为有统计学意义。结果低钙血症组ST/TP比值、血清离子钙与健康组比较有显著性差异(Pa<0.05),且低钙血症伴抽搐组ST/TP比值血清离子钙与单纯低钙血症组比较有显著性差异(P<0.05)。离子钙水平与ST/TP比值呈负相关。结论在不能检测血清离子钙或患儿采血困难的情况下,快速进行心电图检查,ST/TP段比值可反映低钙血症患儿的病情,指导临床治疗。

灵台、神道穴留针对心绞痛患者心电图ST-T即时效应的影响

目的观察灵台、神道穴留针对冠心病心绞痛患者心电图ST-T即时效应的影响。方法 30例冠心病心绞痛患者均针刺灵台、神道穴,分别实施针刺后留针(A组)和针刺后不留针(B组)。观察两组治疗前后12导联心电图,比较组内和组间治疗前后Ⅱ、Ⅲ、av F导联和V_4、V_5、V_6导联ST段和T波的变化情况。结果 A组治疗后Ⅱ、Ⅲ、av F导联和V_4、V_5、V_6导联ST段与同组治疗前比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。A组治疗后Ⅱ、Ⅲ、av F导联T波与同组治疗前比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。两组治疗后V_4、V_5、V_6导联T波与同组治疗前比较,差异均具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论针刺灵台、神道穴能改善冠心病心绞痛患者心肌缺血症状,在改善心肌下壁及前侧壁缺血程度上,针刺后留针优于针刺后不留针,且对冠心病心绞痛心电图ST-T改变的即时效应更佳。

替罗非班治疗老年急性非ST段抬高型心肌梗死的临床观察

目的观察替罗非班对老年急性非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMI)治疗的疗效及安全性。方法选自2012-2013年在我急诊心血管内科住院的急性非ST段抬高型心肌梗死49例,随机分为两组,常规治疗组和替罗非班组,观察两组病情改善程度(7天内胸痛、胸闷发作次数);肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白I(cTNI)水平;30天主要心脏不良事件发生率;30天出血事件、血小板减少率。结果替罗非班组总有效率(96%)明显高于常规治疗组(75%),出血事件主要发生牙龈出血及皮下出血,未发生颅内出血等大出血事件,在改善心肌损伤标志物方面治疗组也明显优于对照组(P<0.05)。结论替罗非班对老年急性非ST段抬高型心肌梗死患者有积极有效治疗作用,且是安全的。

重组人白细胞介素-11治疗化疗后血小板减少疗效观察

目的:观察重组人白细胞介素11(rhIL11)治疗实体瘤和急性白血病(AL)患者化疗后血小板减少的疗效及安全性。方法:实体瘤患者25例、AL患者20例,于化疗结束后BPC≤30×109/L时予rhIL1150μg/(kg·d)皮下注射,连用7～14天或BPC升高至≥60×109/L时停药,用药期间隔天查血常规1次,观察外周血BPC变化、皮肤出血情况及rhIL11应用的不良反应。以同期未用rhIL11治疗的15例实体瘤和10例AL患者作对照。结果:治疗组用药后1周和2周,BPC在实体瘤患者分别为(67.68±9.3)×109/L、(86.55±12.76)×109/L;在AL患者分别为(69.83±7.68)×109/L、(87.17±8.66)×109/L。治疗组较对照组BPC恢复时间缩短(P<0.05)。常见不良反应为轻度乏力、肌肉疼痛。3例出现短暂房性心律失常,减量或停药后消失。结论:rhIL11治疗实体瘤和AL患者化疗后引起的血小板减少安全有效,可使BPC恢复加快,并有效缓解出血症状。

一株罕见不携带rmpA、rmpA2的多药耐药高毒力肺炎克雷伯菌临床分离株

肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)是一种臭名昭著的机会致病菌,尤以高毒力肺炎克雷伯菌(Hypervirulent K.pneumoniae,hvKp)为重。幸运的是,多数hvKp对抗生素敏感。然而,近年来,多药耐药hvKp(multidrug-resistant hvKp,MDR-hvKp)引发病症的报告剧增,威胁着全世界人民的健康和安全。本研究报告了一例感染了不携带rmpA和rmpA2的MDR-hvKp的92岁慢性阻塞性肺疾病患者的病例。患者在住院后第8天去世。对患者痰液中分离得到的肺炎克雷伯菌21072329进行表型实验和全基因组测序,结果显示,21072329属于ST11-KL47 MDR-hvkp,该菌株对大蜡螟具有较高的致死率。同时,21072329有着较强的粘性,难以将其完全离心。21072329携带ESBL(extended spectrum beta-lactamase)基因(blaCTX-M-65,blaSHV-158,和blaTEM-1)和碳青霉烯酶基因(blaKPC-2),其对碳青霉烯类抗生素和第三代、第四代头孢菌素耐受。21072329虽具有hvKp的特征,但在其基因组中未发现rmpA和rmpA2。此外,它只携带了一种铁载体耶尔森菌素(yersinabactin)。这表明可能存在其他促进hvKp形成的高毒力因子。MDR-hvKp已经给全球医疗保健带来了巨大负担,携带未知高毒力因子的肺炎克雷伯菌则带来了新的威胁,因此迫切需要进行预防和深入研究。

天突、气舍针刺安全的临床解剖研究

目的:探讨天突、气舍穴局部解剖与针刺安全的关系。方法:采用小号克氏针标定法和层次解剖法在46具正常成人尸体上、左右共92侧解剖观测了天突和气舍穴针刺途径的局部解剖特点。结果:50·0%的标本胸骨柄后的两侧胸膜返折部相交在胸骨角平面,6·5%的标本两侧胸膜返折部相交在第1肋平面;天突针刺途径的局部解剖观测结果为43·5%的标本左头臂静脉上缘平齐或接近胸骨柄上缘,56·5%的标本左头臂静脉上缘平齐于胸骨柄中部;在气舍穴的钢针穿刺中观察到有68侧标本颈内静脉被刺穿,占73·9%,有24侧标本的左颈总动脉被刺损,占26·1%;并有约50侧标本的迷走神经被钢针触及,占54·3%。结论:天突和气舍的针刺操作不仅仅易伤及上部胸膜腔,更易伤及上纵隔及颈根部的大血管、迷走神经等要害结构,应引起重视与警惕。

北京首例输入性ST-11 complex C群流脑死亡病例流行病学及病原学分析

目的了解北京首例输入性ST-11 complex C群流行性脑脊髓膜炎(流脑)死亡病例流行病学特征及分离的ST-11 complex C群脑膜炎奈瑟菌株病原学特征。方法采集疑似病例的血液标本,进行脑膜炎奈瑟菌的分离培养、细菌学鉴定,确定为脑膜炎奈瑟菌;对分离菌株进行血清学分群、实时荧光定量PCR核酸鉴定,同时对鉴定的菌株进行多位点序列分型(MLST)分析、外膜蛋白PorA、fetA基因检测和体外药物敏感试验。结果经细菌学、血清学和实时荧光定量PCR鉴定,该菌株为脑膜炎奈瑟菌C血清群;porA为P1.5-1,10-8,fetA为F3-6;多位点序列分型分析表明,该菌株基因序列型(ST)为ST-2724,属于ST-11/ET-37克隆系;该菌株对氨苄西林和复方新诺明为中等耐药,对其他10种抗菌药物均敏感。结论该菌株为脑膜炎奈瑟菌C:P1.5-1,10-8:F3-6,序列型是ST-2724,属ST-11/ET-37克隆系,对常用抗菌药物尚未出现耐药现象。这是我国首次分离到的ST-11/ET-37克隆系C群脑膜炎奈瑟菌株,为输入性,提示应加强流脑病原学监测。

电针大肠合穴下合穴配穴治疗功能性肠病双向调节效应的临床研究

目的:通过运用电针刺激大肠合穴下合穴配穴(曲池、上巨虚),观察针刺对于2种不同状态(便秘、腹泻)的功能性肠病的临床疗效,为探求针刺治疗的双向调节作用机制,扩大针灸主治范围,探索针灸配穴组合疗效提供有效的临床依据。方法:选取2013年8月至2015年12月湖南中医药大学第一附属医院收治的符合相应纳入标准的功能性肠病患者132例(便秘型72例、腹泻型60例),将2型患者各自分为2个电针组,2个药物组,分别为便秘电针组(36例)、便秘药物组(36例)、腹泻电针组(30例)、腹泻药物组(30例)。2电针组均采用针刺双侧曲池、上巨虚后,采用20 Hz电流、连续波刺激30 min。治疗期为4周,共完成16次治疗,第1~2周治疗5次/周,第3~4周治疗3次/周。腹泻药物组口服盐酸洛哌丁胺胶囊,2 mg/次,3次/d,连服4周。便秘药物组口服枸橼酸莫沙必利片,5 mg/次,3次/d,连服4周。各组于治疗前、治疗第2周末、治疗完成后(第4周末)、治疗结束后1个月随访时,分别记录患者周排便次数和大便性状,评估其治疗期间及随访期的心理状态(SAS、SDS),并对数据进行统计与分析。结果:经治疗后,2电针组的周排便次数、大便性状、SAS、SDS均得到有效改善。组内比较中,治疗前后比较差异有显著统计学意义(P<0.01)。随访4周与治疗4周比较,差异无统计学意义(P>0.05),但与治疗前比较,差异有显著统计学意义(P<0.01)。组间比较中,2电针组的临床疗效与同型的药物组比较,其差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:电针大肠合穴下合穴配穴能够治疗不同状态(便秘、腹泻)下的功能性肠病,并能产生稳定的、具有一定持续性的双向调节效应。

全球产KPC肺炎克雷伯菌的KPC分布与序列分型分析

目的分析全球产肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)的肺炎克雷伯菌的序列分型数据,探讨KPC-2、KPC-3与主要流行克隆之间的关系。方法从NCBI中下载全球肺炎克雷伯菌的基因组,分析KPC的分布情况。对产KPC肺炎克雷伯菌基因组进行多位点序列分析,确定其序列分型(sequence type,ST)。分析KPC在不同克隆菌株中的分布情况,以及在主要流行克隆ST11、ST258及ST512中KPC变异体KPC-2和KPC-3的流行率差异。结果全球肺炎克雷伯菌的基因组中产KPC 1943株,有KPC变异体14种,以KPC-2(959/1943,49.4%)和KPC-3(952/1943,49.0%)为主;有115种ST型,以ST258(996/1943,51.3%)、ST11(285/1943,14.7%)和ST512(259/1943,13.3%)为主。959株KPC-2菌株分布在87种ST中,以ST258(413/959,43.1%)和ST11(274/959,28.6%)为主;952株KPC-3菌株分布在45种ST中,以ST258(570/952,59.9%)和ST512(259/952,27.2%)为主。KPC-2在ST11菌株中的流行率(274/285,96.1%)显著高于在ST258中的流行率(414/996,41.6%),差异有统计学意义(χ^(2)=43.819,P=0.000);KPC-3在ST512中的流行率(259/259,100%)显著高于在ST258中的流行率(570/996,57.2%),差异有统计学意义(χ^(2)=206.645,P=0.000)。结论从全球范围来看,KPC的流行以KPC-2和KPC-3为主,KPC-2的流行克隆菌株以ST11和ST258为主,KPC-3的流行克隆菌株以ST258和ST512为主,加强该类细菌的监测对于预防院内感染控制具有重要作用。

电针不同部位单穴对大鼠胃运动双向调节效应特征的研究

目的探讨不同部位穴位对胃运动异常大鼠的双向调节效应特征。方法通过在大鼠胃内安置球囊的方法记录胃内压,观察电针天枢、大肠俞、曲池、上巨虚对胃运动异常模型大鼠胃内压的影响。结果在正常生理状态及胃运动增强和胃运动抑制的病理状态下,电针曲池、上巨虚均以促进胃运动为主(P<0.05);而电针天枢均以抑制胃运动为主(P<0.01);电针大肠俞只有在正常及心得安所造成的胃运动兴奋状态下,以抑制胃运动为主(P<0.05);其他状态无明显方向倾向。结论腹部和四肢单穴对胃运动的调节很可能具有定向效应的特征,穴位的双向调节作用并不一定是同一穴位对不同病理状态下内脏器官的双向调节。

基于r-fMRI技术观察电针曲池、上巨虚对功能性肠病患者大脑的即刻效应

目的以静息态功能性磁共振成像(r-f MRI)技术观察电针曲池、上巨虚穴对功能性肠病患者大脑功能活动模式的改变,为探索曲池、上巨虚穴治疗功能性肠病发挥效应的中枢机制提供影像学依据。方法选择功能性便秘患者20例为便秘组,功能性腹泻患者20例为腹泻组。便秘组采用电针上巨虚治疗,腹泻组采用电针曲池治疗,次日两组均取相关非经非穴点进行电针治疗。采集两组电针前后的静息态功能磁共振数据,以功能连接为观察指标,以右侧岛叶为种子点,运用MATLAB、DPARSF和REST等软件得到两组与种子点存在功能连接的脑区图像,进而分析两组自身经电针刺激前后脑功能连接的差异。结果电针刺激功能性便秘患者上巨虚穴可正激活左侧小脑后叶小脑山坡、左侧枕叶舌回、左侧枕叶枕中回、右侧枕叶、右侧顶叶缘上回、右侧穹窿回扣带回、左侧顶叶楔前叶;负激活右侧额叶Sub-Gyral、右侧岛叶、左侧岛叶。电针功能性腹泻患者曲池穴有显著差异的脑区为左侧小脑后叶山顶和左侧边缘叶后扣带回。结论电针曲池、上巨虚穴可引起功能性肠病患者大脑部分内脏高敏相关脑区功能连接的变化,提示针刺对功能性肠病患者的改善效应可能与此有关。

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药机制及呼吸机相关性感染的流行病学分析

目的:探讨碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(Carbapenem-resistant Klebsiella pneumonia,CRKP)耐药机制及临床分离株与呼吸机分离株之间的遗传相关性。方法:收集41株碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌,其中28株为临床分离株,13株为呼吸机分离株。改良Hodge试验检测碳青霉烯酶,亚胺培南/EDTA结合(DDTs)及协同(DDST)试验检测金属酶,双纸片增效试验检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),纸片扩散法检测药敏试验,E-test检测肺炎克雷伯菌对替加环素的MIC。PCR检测耐药基因,产物测序,确定其基因型。采用多位点序列分型(MLST)对CRKP进行分子遗传学分析。结果:所有菌株改良Hodge试验均阳性,基因检测均为blaKPC-2;只检测到一株菌产金属酶,基因型为bla NDM-1;未检测出blaGES、bla VIM、bla SPM、bla IMP及blaOXA等其它碳青霉烯酶基因。ESBLs检出率为43.90%,但所有菌株均携带β-内酰胺酶基因,以blaCTXM-24为主(92.68%,38/41),其次为bla SHV-12(78.05%,32/41)。38株携带bla TEM中,其中35株为广谱bla TEM-1,只有3株为超广谱blaTEM-104。所有菌株均检测出外膜蛋白ompk35基因,95.12%的菌株有外膜蛋白ompk36基因。28株临床分离株大部分来自ICU病房(67.86%,19/28),其中有24例感染患者使用了呼吸机;41株CRKP对临床常用的18种抗菌药物中100%耐药的有9种,耐药率最低的为四环素类,分别为替加环素(2.44%,1/41),米诺环素(7.32%,3/41)和四环素(14.63%,6/41)。MLST结果显示,所有呼吸机分离株均属ST11型,28株临床分离株有25株也属ST11型,2个新的ST型已被Pasteur MLST数据库确认收录并分别命名为ST1854和ST1855。结论:CRKP多重耐药情况非常严重,携带bla KPC-2基因是其碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因,存在ST11型肺炎克雷伯菌播散,且与呼吸机传播有关。

猪源ST11型艰难梭菌TcdB毒素受体结合域双抗体夹心ELISA的建立

艰难梭菌是一种重要的人兽共患肠道病原菌,广泛存在于人和多种动物体内。ST11型艰难梭菌是国际上流行最广泛、危害最大的亚型之一。我国作为养猪业大国,猪源艰难梭菌的检测方法欠缺,给猪场艰难梭菌的防控留下隐患。本研究旨在建立一种特异、敏感的双抗体夹心ELISA,为猪源ST11型艰难梭菌流行病学调查提供血清学检测方法。首先采用原核表达并纯化出97 kDa的受体结合域(receptor binding domain, RBD)蛋白,并利用杂交瘤技术成功筛选出能稳定分泌针对RBD蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞AE2D3,经检测其抗体亚型为IgG2b(κ)。其次以针对RBD蛋白的单克隆抗体为检测抗体、兔多克隆抗体为捕获抗体,运用棋盘法确定了捕获抗体和检测抗体的配对浓度、抗原包被条件、封闭条件、检测抗体和待检样品的孵育条件、羊抗小鼠IgG/HRP和TMB显色液反应条件。经测定,此方法的临界值OD_(450)为0.152,与13株非ST11型的艰难梭菌无交叉反应,对RBD蛋白的最低检测浓度为8.83 ng/mL。这一特异、敏感、可用于兽医临床检测猪源ST11型艰难梭菌的双抗体夹心ELISA,为养猪业ST11型艰难梭菌流行病学调查提供了可靠的血清学检测方法。

中国2017-2019年耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因及流行克隆特征

目的探讨耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)在我国流行的克隆及分子流行病学特征,为临床追踪、实时监控CRKP医院感染及防控提供实际数据支持。方法通过文献检索收集2017-2019年全国CRKP菌株相关文献,纳入可提供菌株采集地,采用聚合酶链反应(PCR)方法检测耐药基因和多位点序列分型(MLST)分析得出ST型别的文献进行回顾分析,并使用BioNumerics创建最小生成树。结果最终纳入40篇文献,共2094株CRKP菌株,分布在全国6个地区(东北、华北、华东、华南、华中、西南)共15个省市,其中1631株(77.89%)CRKP携带产KPC酶耐药基因,检出亚型主要为KPC-2型(1014株,62.17%)。2094株CRKP共检出12种耐药基因,其中KPC耐药基因在6个地区的检出占比均超过50%。859株CRKP经MLST,主要优势序列型别为ST11型(659/859,76.72%),且在全国6个地区均有分布。产KPC-2酶的ST11型菌株(581/659,88.16%)为我国流行的最主要类型。结论携带耐药基因的CRKP菌株在全国散播流行迅速,目前已遍布全国6个地区,应建立应对CRKP的综合防控措施,避免CRKP在医院内暴发流行。