基质辅助激光解析电离飞行时间质谱用于产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌ST11分型的研究

目的探讨基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)用于产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌ST11分型。方法收集2012年10月-2014年10月5所医院的80株产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌菌株。经多位点序列分析(MLST),28株为ST11型,52株为其他分型(other sequence type,OST)。通过MSP dendrogram聚类分析、MALDI Biotyper建立数据库、Clin Pro Tools建立模型3种方法研究ST11分型的可能性。结果 MSP dendrogram聚类分析在距离水平线1000处可将80株菌聚类分析为两类,敏感性为65.78%,特异性为92.85%。MALDI Biotyper数据库验证结果:18株ST11有1株菌分为OST,32株OST有2株菌被分为ST11,敏感性为89.47%,特异性为96.77%。Clin Pro Tools用其余菌株验证模型全部正确,敏感性和特异性均为100%。结论 MALDI-TOF MS可通过3种方法区别ST11与OST,以Clin Pro Tools软件建立模型的方法最可靠。

猪源ST11型艰难梭菌TcdB毒素受体结合域双抗体夹心ELISA的建立

艰难梭菌是一种重要的人兽共患肠道病原菌,广泛存在于人和多种动物体内。ST11型艰难梭菌是国际上流行最广泛、危害最大的亚型之一。我国作为养猪业大国,猪源艰难梭菌的检测方法欠缺,给猪场艰难梭菌的防控留下隐患。本研究旨在建立一种特异、敏感的双抗体夹心ELISA,为猪源ST11型艰难梭菌流行病学调查提供血清学检测方法。首先采用原核表达并纯化出97 kDa的受体结合域(receptor binding domain, RBD)蛋白,并利用杂交瘤技术成功筛选出能稳定分泌针对RBD蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞AE2D3,经检测其抗体亚型为IgG2b(κ)。其次以针对RBD蛋白的单克隆抗体为检测抗体、兔多克隆抗体为捕获抗体,运用棋盘法确定了捕获抗体和检测抗体的配对浓度、抗原包被条件、封闭条件、检测抗体和待检样品的孵育条件、羊抗小鼠IgG/HRP和TMB显色液反应条件。经测定,此方法的临界值OD_(450)为0.152,与13株非ST11型的艰难梭菌无交叉反应,对RBD蛋白的最低检测浓度为8.83 ng/mL。这一特异、敏感、可用于兽医临床检测猪源ST11型艰难梭菌的双抗体夹心ELISA,为养猪业ST11型艰难梭菌流行病学调查提供了可靠的血清学检测方法。