大肠癌相关基因ST13的原核表达及鉴定

目的 :原核表达大肠癌相关基因 ST1 3 ,并予以鉴定。方法 :将 ST1 3 c DNA经 PCR扩增和亚克隆 ,与 GST原核表达载体 p GEX-4T-2重组 ,转化 E.coli INVαF′菌表达 ,经 GlutathioneSepharose 4B亲和层析 GST-ST1 3融合蛋白 ,再以凝血酶切得到 ST1 3蛋白。结果 :限制性酶切和DNA测序表明 ,ST1 3 c DNA ORF正确克隆于 p GEX-4T-2多克隆位点。经 IPTG诱导表达的GST-ST1 3融合蛋白主要存在于可溶性上清 ,表达量占大肠杆菌总蛋白 2 0 %。经亲和层析 ,每升诱导菌回收融合蛋白 2 .5mg,纯度为 91 .3 %。 Western-blot证实 ,原核表达的 ST1 3蛋白、细胞中天然 ST1 3蛋白的 1 0 % SDS-PAGE表观分子量 ,约 50 k D。结论 :成功构建了 ST1 3基因原核表达质粒 ,并大量表达和纯化了 ST1 3蛋白。

大肠癌相关基因ST13转录启动区的增强子研究

目的 :探讨大肠癌相关基因 ST13上游 5 '近端调控区 (- 5 95～ + 74 )中增强子碱基序列。方法 :设计系列缺失 PCR引物 ,扩增 ST13基因 5 '近端碱基序列片段 ,p GEMT- EASY克隆、测序 ,再亚克隆到 p GL 2系列瞬间报告载体上 ,等量转染 SW6 2 0细胞 ,检测荧光酶活性。结果 :系列扩增碱基序列片段 6 6 9bp、2 6 3bp、16 3bp对p GL2 - Basic中的荧光素酶基因均具有较强的启动表达作用 ,片段 10 1bp、4 7bp则几乎没有启动下游基因表达的作用。而 10 1bp片段与系列报告载体 p GL 2重组的分子 ,在其中含有启动子的报告基因表达载体中具有明显的增强作用 (P<0 .0 1) ,但作用强度小于阳性对照 p GL2 - Control(P<0 .0 5 )。结论 :位于 ST13基因上游 5 '近端调控区的碱基序列 10 1bp片段 (- 5 95～ - 494 ) 。

大肠癌相关新基因ST13单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定

目的 研制抗 ST13蛋白单克隆抗体 ,建立检测方法 ,探讨 ST13基因的生物学特性。方法 按淋巴细胞杂交瘤技术制备抗 ST13蛋白单克隆抗体 ,并以亲和层析法纯化单抗 ,将此单抗作探针用 Western- Blot和免疫组化检测标本。结果 获得 3个抗 ST13蛋白单抗的杂交瘤细胞株 ,杂交瘤细胞培养上清和腹水中单抗的 EL ISA效价为 10 4～ 10 5。以 ST13单抗作 Westerb- Blot和免疫组化证实该单抗具有高度特异性 ,可用于检测组织表达的ST13蛋白。结论 制备了具有高度特异性和高效价的抗 ST13蛋白单抗 ;建立了 Western- Blot及免疫组化检测组织表达的 ST13蛋白的方法。

人组织中大肠癌负相关基因ST13的蛋白表达研究(英文)

目的原核表达大肠癌负相关基因ST13，制备ST13蛋白单克隆抗体，研究人大肠等组织中表达的STl3蛋白的生物学特性。方法将ST13ORF克隆至GST融合蛋白表达质粒，原核表达并以Glutathione纯化GST-ST13蛋白，以凝血酶切得到ST13蛋白。以GST-ST13融合蛋白免疫小鼠，以ST13蛋白筛选杂交瘤细胞株，按杂交瘤技术制备STl3蛋白单克隆抗体，并以ST13蛋白亲和层析纯化单抗。以该单抗作Western-blot及免疫组化检测临床标本。结果蛋白表达和纯化以SDS-PAGE证实。融合蛋白表达量占大肠杆菌总蛋白20％，每升培养物回收融合蛋白2．5mg，纯度为91．3％。建立了3个ST13蛋白单抗的杂交瘤细胞株，腹水中单抗的ELISA效价达104～105，并具有对STl3蛋白的高度特异性。Westem-blot证实组织细胞中天然ST13蛋白的SDS-PAGE表观分子量约50KD，比其计算分子量大约10KD，但无糖基化修饰。免疫组化表明该蛋白均匀分布于SW480细胞及大肠上皮细胞浆，计算机分析系亲水性分子。免疫组化还表明该蛋白可表达于大肠、胃及肝等多种组织上皮，但在各种正常组织和肿瘤组织之间，正常组织之间，以及肿瘤组织之间的的着色强度不一。结论原核表达了ST13蛋白，制备了相应的单抗，建立了检测组织标本中ST13蛋白的方法。研究表明人组．织ST13蛋白系表观分?

新型结肠癌个性化治疗重组溶瘤腺病毒Ad-CEA-ZD55-ST13的构建

一种新型的重组溶瘤腺病毒Ad-CEA-ZD55-ST13被成功构建。该病毒利用CEA(carcinoembryonic antigen)启动子和ST13基因特异性增强ZD55系统的肿瘤靶向性。实验表明,重组溶瘤腺病毒Ad-CEA-ZD55-ST13能在结肠癌细胞株SW620中增殖;Ad-CEA-ZD55-ST13增加ST13基因在HCT116细胞中的表达量;Ad-CEA-ZD55-ST13比对照病毒Ad-CEA-ZD55-EGFP对HCT116的杀伤作用强。

ST13基因与肿瘤关系的研究进展

肿瘤抑制基因13(ST13)是上世纪末中国科研工作者发现的一种结肠癌负相关基因,其蛋白与热休克蛋白70(Hsp70)相互作用的蛋白(Hip)为同一蛋白,作为Hsp70的分子共伴侣,参与Hsp70在蛋白质折叠、修复等过程中的分子伴侣作用,随着近年来的研究深入,发现ST13基因在结肠、胃、乳腺、子宫、卵巢等组织及相应的肿瘤中都有不同程度的表达,不同组织及其相应的的肿瘤中的表达存在差异,文章就ST13基因及其编码蛋白的结构、功能及与肿瘤的关系进行综述。

两个大肠癌负相关新基因的研究

目的]在分子水平寻找与人大肠癌的发生发展相关的新的因素 ,研究两个大肠癌负相关基因的结构与功能。[方法]采用强化荧光原位杂交 (FISH) ,进行两个新大肠癌基因染色体定位。通过Dotblot、Northernblot、RT_PCR_ELISA,免疫组化及体内外转染实验进行新基因功能研究。[结果]已完成两个新基因的全长cDNA序列分析及染色体定位等结构研究 ,并进行了两基因的核酸与蛋白表达研究及功能研究。SNC6基因全长3168bp ,定位于染色体22q13区带 ,共有12个外显子及11个内含子。SNC19全长3152bp,定位于染色体11q24区带。两个基因于1998年被国际命名委员会分别命名为ST13、ST14基因 ,并被列入人类基因组图谱中。对比两个新基因在正常大肠粘膜及癌组织核酸水平表达情况 ,癌组织低于正常粘膜 ,在不同肿瘤细胞系及组织中表达不一。两基因均已获得了表达蛋白。SNC6已制备了单抗 ,经免疫组化检测表达与核酸表达结果相似 ,经体内外研究SNC6基因有抑制大肠癌细胞系生长的作用。SNC19已明确为丝氨酸蛋白酶家族成员。[结论]SNC6与SNC19基因可作为新的大肠癌相关基因加以研究、利用。

山羊ST13基因的克隆及表达特性分析

本研究旨在克隆获取山羊ST13基因完整的蛋白质编码区(sequence coding for aminoacids in protein,CDS)序列,并对其进行表达特性分析,同时探究该基因在不同组织和诱导分化不同阶段的山羊皮下前体脂肪细胞中的表达规律。利用逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)技术克隆ST13基因,利用在线工具和软件对该基因序列进行生物信息学分析,利用实时荧光定量RT-PCR(quantitative RT-PCR,qRT-PCR)技术检测其在山羊各个组织及皮下前体脂肪细胞不同分化阶段中的表达规律。克隆获得山羊ST13基因序列长度为1380 bp,其CDS区长度为1101 bp,共编码366个氨基酸;蛋白预测结果显示,ST13蛋白存在26个磷酸化位点,部分序列有强烈的亲水性和不稳定性,并且属于非跨膜和非分泌蛋白;亚细胞定位预测显示,ST13大部分分布在细胞核中,占69.6%;进化树显示,山羊ST13与绵羊的亲缘关系最近;组织表达谱显示,ST13基因在山羊心、肝、脾、肺、肾等13种组织中均有表达,尤其在臂三头肌和皮下脂肪中的表达量最高(P<0.01),在心、肝、脾、肺、肾、大肠、小肠和胰腺中的表达量无显著性差异(P>0.05);时序表达谱显示,该基因在诱导分化后的脂肪细胞中表达上调,在诱导分化第108小时表达最高,显著高于其他诱导分化时间段(P<0.01);研究表明,该基因在山羊组织中广泛表达,对山羊皮下脂肪细胞分化过程有重要调控作用。

大肠癌相关基因ST13研究进展

肿瘤抑制基因13(ST13)是用减数杂交技术在cDNA文库中筛选到的大肠癌相关基因,其在大肠癌中的表达低于周围正常黏膜组织。通过序列分析可知,ST13蛋白与热休克蛋白70互作蛋白(Hip)为同一蛋白,参与调解蛋白分子折叠、转运、降解等过程。现综述目前对ST13蛋白分子结构、分子共伴侣作用以及与肿瘤相关的研究。