ST13基因与肿瘤关系的研究进展

肿瘤抑制基因13(ST13)是上世纪末中国科研工作者发现的一种结肠癌负相关基因,其蛋白与热休克蛋白70(Hsp70)相互作用的蛋白(Hip)为同一蛋白,作为Hsp70的分子共伴侣,参与Hsp70在蛋白质折叠、修复等过程中的分子伴侣作用,随着近年来的研究深入,发现ST13基因在结肠、胃、乳腺、子宫、卵巢等组织及相应的肿瘤中都有不同程度的表达,不同组织及其相应的的肿瘤中的表达存在差异,文章就ST13基因及其编码蛋白的结构、功能及与肿瘤的关系进行综述。

原位杂交检测新基因ST13(SNC6)在大肠癌中的表达及临床意义

目的 确定新基因 ST13在大肠癌中的组织学定位 ,观察它在大肠癌发生、发展不同阶段的表达情况 ,探讨其表达与大肠癌临床病理特征的关系。方法 用 RNA- RNA原位杂交的方法检测 ST13基因在 30例大肠癌病人的正常肠黏膜、癌旁黏膜、腺瘤以及癌组织中的表达状况。结果 ST13基因表达在大肠的正常腺上皮结构上 ,着色颗粒位于胞浆 ,而胞核无或着色较淡 ,癌组织中没有或有少量表达 ,且一般较正常黏膜染色为淡 ;在间质和肌层中未见明显阳性信号。正常黏膜标本中阳性率为 2 0 / 30 ;癌旁黏膜中 15 / 30 ;腺瘤中 4/ 4;癌组织中 9/ 30。ST13基因在同一大肠癌病人正常黏膜和癌组织中表达之间存在显著性差异 (P<0 .0 1)。在癌组织中 ST13有表达和无表达病例组之间 Dukes各期分布有差别 ,有表达者中属 Dukes A期和 B期为多 ,C期为少 ;而无表达者中 C期较多 ,A、B期为少 ,但差异无显著性 (P=0 .0 5 2 )。同时 ,还发现有淋巴结转移者 ST13在癌组织中表达阳性率 (3/ 17)低于无淋巴结转移者 (6 / 13) ,但差异无显著性 (P=0 .0 99)。结论 ST13基因在大肠癌中的表达率低于相应的正常黏膜 ,此种低表达多见于 Dukes C期及淋巴结转移者 ,ST13基因可能在大肠癌的发生、发展中起作用。

大肠癌相关基因ST13的原核表达及鉴定

目的 :原核表达大肠癌相关基因 ST1 3 ,并予以鉴定。方法 :将 ST1 3 c DNA经 PCR扩增和亚克隆 ,与 GST原核表达载体 p GEX-4T-2重组 ,转化 E.coli INVαF′菌表达 ,经 GlutathioneSepharose 4B亲和层析 GST-ST1 3融合蛋白 ,再以凝血酶切得到 ST1 3蛋白。结果 :限制性酶切和DNA测序表明 ,ST1 3 c DNA ORF正确克隆于 p GEX-4T-2多克隆位点。经 IPTG诱导表达的GST-ST1 3融合蛋白主要存在于可溶性上清 ,表达量占大肠杆菌总蛋白 2 0 %。经亲和层析 ,每升诱导菌回收融合蛋白 2 .5mg,纯度为 91 .3 %。 Western-blot证实 ,原核表达的 ST1 3蛋白、细胞中天然 ST1 3蛋白的 1 0 % SDS-PAGE表观分子量 ,约 50 k D。结论 :成功构建了 ST1 3基因原核表达质粒 ,并大量表达和纯化了 ST1 3蛋白。

应用套式PCR克隆ST13基因cDNA的5'端序列

目的获得ＳＴ１３基因ｃＤＮＡ５′端的未知序列。方法应用套式ＰＣＲ方法直接从ｃＤＮＡ文库中扩增该基因的５′端序列，然后将扩增的片段克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ．ｅａｓｙ载体，并进行序列分析。结果第１次ＰＣＲ后得到１条约５５０ｂｐ的片段，经套式ＰＣＲ后获得１条约４８０ｂｐ的片段，经序列分析证实该扩增的片段是ＳＴ１３基因ｃＤＮＡ的５′端未知序列。结论套式ＰＣＲ技术是克隆基因ｃＤＮＡ的５′端未知序列较简捷、有效的方法。

大肠癌相关新基因ST13单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定

目的 研制抗 ST13蛋白单克隆抗体 ,建立检测方法 ,探讨 ST13基因的生物学特性。方法 按淋巴细胞杂交瘤技术制备抗 ST13蛋白单克隆抗体 ,并以亲和层析法纯化单抗 ,将此单抗作探针用 Western- Blot和免疫组化检测标本。结果 获得 3个抗 ST13蛋白单抗的杂交瘤细胞株 ,杂交瘤细胞培养上清和腹水中单抗的 EL ISA效价为 10 4～ 10 5。以 ST13单抗作 Westerb- Blot和免疫组化证实该单抗具有高度特异性 ,可用于检测组织表达的ST13蛋白。结论 制备了具有高度特异性和高效价的抗 ST13蛋白单抗 ;建立了 Western- Blot及免疫组化检测组织表达的 ST13蛋白的方法。

大肠癌相关基因ST13转录启动区的增强子研究

目的 :探讨大肠癌相关基因 ST13上游 5 '近端调控区 (- 5 95～ + 74 )中增强子碱基序列。方法 :设计系列缺失 PCR引物 ,扩增 ST13基因 5 '近端碱基序列片段 ,p GEMT- EASY克隆、测序 ,再亚克隆到 p GL 2系列瞬间报告载体上 ,等量转染 SW6 2 0细胞 ,检测荧光酶活性。结果 :系列扩增碱基序列片段 6 6 9bp、2 6 3bp、16 3bp对p GL2 - Basic中的荧光素酶基因均具有较强的启动表达作用 ,片段 10 1bp、4 7bp则几乎没有启动下游基因表达的作用。而 10 1bp片段与系列报告载体 p GL 2重组的分子 ,在其中含有启动子的报告基因表达载体中具有明显的增强作用 (P<0 .0 1) ,但作用强度小于阳性对照 p GL2 - Control(P<0 .0 5 )。结论 :位于 ST13基因上游 5 '近端调控区的碱基序列 10 1bp片段 (- 5 95～ - 494 ) 。

大肠癌生长抑制基因ST13在恶性肿瘤及其相邻正常组织中的表达

目的 研究恶性肿瘤及其相邻正常组织中ＳＴ１３基因的表达差异。方法 本研究采用逆转录聚合链反应酶标免疫法（ＲＴ—ＰＣＲ—ＥＬＩＳＡ）对５７例恶性肿瘤（其中大肠癌２０例，胃癌１１例，乳腺癌１０例，肝癌９例，肺癌７例）及其相邻正常组织中ＳＴ１３基因的表达进行检测。结果 ＳＴ１３基因在大肠癌，胃癌中呈低表达趋势，平均值：大肠癌 １．１９６，相邻正常组织 ０．９０２，Ｐ＝０．０９。胃癌 ０．９０９，相邻正常组织 ０．７２７，Ｐ＝０．２４。在 Ｄｕｋｅｓ Ｃ大肠癌中ＳＴ１３基因明显低表达，Ｐ＜０．０１。ＳＴ１３基因在乳腺癌、肝癌、肺癌及其相邻正常组织中表达无差异。结论 ＳＴ１３基因在大肠癌、胃癌中有不同程度下调，在Ｄｕｋｅｓ Ｃ大肠癌中 ＳＴ１３基因明显低表达，ＳＴ１３基因可能作用于大肠癌中晚期。

山羊ST13基因的克隆及表达特性分析

本研究旨在克隆获取山羊ST13基因完整的蛋白质编码区(sequence coding for aminoacids in protein,CDS)序列,并对其进行表达特性分析,同时探究该基因在不同组织和诱导分化不同阶段的山羊皮下前体脂肪细胞中的表达规律。利用逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)技术克隆ST13基因,利用在线工具和软件对该基因序列进行生物信息学分析,利用实时荧光定量RT-PCR(quantitative RT-PCR,qRT-PCR)技术检测其在山羊各个组织及皮下前体脂肪细胞不同分化阶段中的表达规律。克隆获得山羊ST13基因序列长度为1380 bp,其CDS区长度为1101 bp,共编码366个氨基酸;蛋白预测结果显示,ST13蛋白存在26个磷酸化位点,部分序列有强烈的亲水性和不稳定性,并且属于非跨膜和非分泌蛋白;亚细胞定位预测显示,ST13大部分分布在细胞核中,占69.6%;进化树显示,山羊ST13与绵羊的亲缘关系最近;组织表达谱显示,ST13基因在山羊心、肝、脾、肺、肾等13种组织中均有表达,尤其在臂三头肌和皮下脂肪中的表达量最高(P<0.01),在心、肝、脾、肺、肾、大肠、小肠和胰腺中的表达量无显著性差异(P>0.05);时序表达谱显示,该基因在诱导分化后的脂肪细胞中表达上调,在诱导分化第108小时表达最高,显著高于其他诱导分化时间段(P<0.01);研究表明,该基因在山羊组织中广泛表达,对山羊皮下脂肪细胞分化过程有重要调控作用。

两个大肠癌负相关新基因的研究

目的]在分子水平寻找与人大肠癌的发生发展相关的新的因素 ,研究两个大肠癌负相关基因的结构与功能。[方法]采用强化荧光原位杂交 (FISH) ,进行两个新大肠癌基因染色体定位。通过Dotblot、Northernblot、RT_PCR_ELISA,免疫组化及体内外转染实验进行新基因功能研究。[结果]已完成两个新基因的全长cDNA序列分析及染色体定位等结构研究 ,并进行了两基因的核酸与蛋白表达研究及功能研究。SNC6基因全长3168bp ,定位于染色体22q13区带 ,共有12个外显子及11个内含子。SNC19全长3152bp,定位于染色体11q24区带。两个基因于1998年被国际命名委员会分别命名为ST13、ST14基因 ,并被列入人类基因组图谱中。对比两个新基因在正常大肠粘膜及癌组织核酸水平表达情况 ,癌组织低于正常粘膜 ,在不同肿瘤细胞系及组织中表达不一。两基因均已获得了表达蛋白。SNC6已制备了单抗 ,经免疫组化检测表达与核酸表达结果相似 ,经体内外研究SNC6基因有抑制大肠癌细胞系生长的作用。SNC19已明确为丝氨酸蛋白酶家族成员。[结论]SNC6与SNC19基因可作为新的大肠癌相关基因加以研究、利用。

大肠癌负相关基因ST13的研究进展

ST13基因是近几年中国医学研究者新发现的一种与大肠癌发病有关的负相关基因。已被N C BI作为新基因接受。其序列与伴侣分子p48完全相同,如O R T为1.1kb,编码氨基酸369个,蛋白质计算分子量为41.324,SD S蛳PAG E表现相对分子质量约4.8×104,故被认为是同一蛋白。ST13/p48还称H ip或热休克蛋白结合蛋白。ST13基因定位于人染色体22q13,cD N A全长3145bp。就ST13基因的历史、属性、染色体定位、蛋白表达、实验室检测方法和基因的功能研究方法作一综述。