ST2825通过调节小胶质细胞极化减轻脑缺血-再灌注损伤的研究

目的研究ST2825对脑缺血-再灌注损伤小胶质细胞的作用。方法处于对数生长期小鼠小胶质细胞BV2随机分为对照组(Con)、模型组(Mod)和ST2825低剂量处理组(ST2825L)、ST2825高剂量处理组(ST2825H),采用氧糖剥夺/再复氧(OGD/R)诱导缺血-再灌注模型,对细胞进行ST2825低剂量(5μmol/L)、高剂量(10μmol/L)处理。采用cell counting kit-8(CCK-8)方法检测活细胞数量,采用流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)水平、凋亡及细胞极化状态,采用qPCR检测TNF-α、IL-10基因表达水平,采用免疫印迹(Western blotting)方法检测Caspase-1、cleaced Caspase-1、NLRP3、iNOS、IL-1及IL-18蛋白表达水平。结果CCK-8显示,与Con组相比,OGD/R后Mod组细胞活力极显著降低(P<0.01);与Mod组相比,ST2825L组、ST2825H组细胞活力显著升高;Mod组较Con组ROS水平增加,ST2825处理后ROS有所下降;与Con组相比,Mod组细胞凋亡率增加,ST2825处理后凋亡率较Mod降低,且呈剂量依赖性。与Con组相比,Mod组CD86表达显著增加,CD163表达降低,提示Mod组细胞向M1型细胞极化;与Mod组相比,两种剂量ST2825处理后CD86表达降低,CD163表达增加,提示ST2825促进缺氧复氧的BV2细胞向M2型细胞极化。qPCR显示,与Con组相比,Mod组细胞TNF-α表达增加,IL-10表达降低,ST2825L组和ST2825H组TNF-α表达相较于Mod组降低,IL-10升高。Western blotting显示,与Con相比,Mod组ARG1、Caspase-1和cleaced Caspase-1表达显著降低,NLRP3、iNOS、IL-1及IL-18表达增加,ST2825低剂量和高剂量处理后ARG1、Caspase-1和cleaced Caspase-1水平均显著增加,NLRP3、iNOS、IL-1及IL-18水平均降低。结论ST2825通过调节小胶质细胞极化减轻脑缺血-再灌注损伤,降低氧化应激及炎症反应,这是减轻脑缺血-再灌注损伤的新途径。

髓样分化因子88抑制剂ST2825对重组耻垢分枝杆菌感染THP-1细胞自噬的影响

目的探讨髓样分化因子88抑制剂ST2825对重组耻垢分枝杆菌感染THP-1细胞自噬的影响。方法使用髓样分化因子88抑制剂ST2825作用于重组耻垢分枝杆菌感染的THP-1细胞,确定ST2825干预的实验组、无ST2825作用的对照组以及空白组。运用荧光显微镜观察自噬小体,RT-PCR检测Beclin-1基因和Bcl-2基因的m RNA的表达。结果与对照组比较,实验组的自噬荧光小点数目明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05);RT-PCR检测结果显示Beclin-1和Bcl-2 m RNA表达较对照组下调。结论髓样分化因子88抑制剂ST2858可能通过干扰Beclin-1和Bcl-2的分离,抑制THP-1细胞自噬。

髓样分化因子88抑制剂ST2825对RAW264.7细胞生物学活性的影响

目的探讨Toll样受体信号转导分子髓样分化因子88(MyD88)抑制剂ST2825对巨噬细胞系RAW264.7细胞生物学活性的影响,为新型免疫抑制剂的研发提供新的思路。方法培养RAW264.7细胞并分为4组:空白对照组细胞不给予任何处理和刺激;脂多糖对照组细胞给予脂多糖(500ng/mL)刺激;ST2825低浓度组和高浓度组细胞分别给予浓度为10μmol/L和20μmol/L的ST2825预处理1h后再给予脂多糖刺激。36h后收集细胞,流式细胞术检测细胞表面共刺激分子CD80和CD86的表达;提取细胞RNA,实时荧光定量PCR检测IL-1、IL-6、TNF-αmRNA水平。异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-Dextran)法测定细胞吞噬功能。结果脂多糖对照组RAW264.7细胞共刺激分子CD80和CD86表达率分别为(54.2±1.6)%和(56.8±2.9)%,与空白对照组相比均明显升高(均P<0.05);ST2825低浓度组和高浓度组CD80表达率分别为(37.4±1.7)%和(26.4±1.2)%,CD86表达率分别为(43.4±2.0)%和(31.5±1.1)%,与脂多糖对照组相比均降低(均P<0.05)。经脂多糖刺激后,脂多糖对照组RAW264.7细胞IL-1、IL-6和TNF-αmRNA表达水平升高,ST2825可降低上述促炎性细胞因子的mRNA表达水平。ST2825低浓度组和高浓度组细胞吞噬FITC-Dextran的能力与正常RAW264.7细胞无差异。结论 MyD88抑制剂ST2825可抑制脂多糖对天然免疫细胞的免疫活化效应,而不影响细胞的吞噬功能,为ST2825作为免疫抑制剂用于临床奠定了实验基础。

髓样分化因子88抑制剂ST2825影响重组耻垢分枝杆菌感染的THP-1细胞炎性分泌功能

目的通过观察髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,myd88)抑制剂ST2825对重组耻垢分枝杆菌感染的THP-1细胞的炎性分泌功能的抑制,来探讨髓样分化因子88在分枝杆菌促巨噬细胞分泌炎性因子功能中的作用。方法使用Myd88的抑制剂ST2825干预重组耻垢杆菌感染的THP-1细胞为实验模型,分为三组:实验组(THP-1细胞+重组耻垢分枝杆菌+ST2825)、对照组(THP-1细胞+重组耻垢分枝杆菌)、空白组(THP-1细胞),用ELISA法检测三组TNF-α、IL-12和IL-6的分泌情况。结果实验组的TNF-α、IL-12和IL-6的量较对照组显著减少,其两者P值<0.05,差异具有统计学意义。结论髓样分化因子88抑制剂ST2825可抑制THP-1细胞的炎性分泌功能。

髓样分化因子88在妊娠期糖尿病发病机制中的作用研究

目的:通过调控孕妇单核细胞中髓样分化因子88(My D88)的表达水平,研究My D88在妊娠期糖尿病(GDM)发病机制中的作用。方法:30例正常妊娠孕妇为正常组,30例GDM患者为GDM组,两组每个样本处理均相同,每个样本各分为4个组,分别为未处理组、LPS组、ST2825组、LPS+ST2825组。采用Western blot法检测并比较各组单核细胞中My D88及核转录因子-κB(NF-κB)/p65的表达量,分析各组中My D88与NF-κB/p65的相关性;采用ELISA法检测并比较各组培养液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)、白介素-10(IL-10)水平。结果:①正常组和GDM组组内的比较:LPS组、ST2825组的My D88及NF-κB/p65的表达水平与同组未处理组相比,差异有统计学意义(P<0.05);LPS+ST2825组的My D88及NF-κB/p65的表达水平明显低于同组的LPS组(P<0.05)。正常组与GDM组组间比较:GDM组各处理组My D88及NF-κB/p65的表达水平均较正常组相同处理组明显升高(P<0.05)。②两组中除未处理组外,其他处理组的My D88与NF-κB/p65的表达水平均呈正相关关系(P<0.05)。③GDM组中未处理组和LPS组中的细胞因子(TNF-α、IL-1、IL-10)的表达水平均高于正常组中未处理组及LPS组(P<0.05);GDM组中LPS组3个细胞因子的表达水平高于其未处理组(P<0.05),ST2825组3个细胞因子的表达水平低于其未处理组(P<0.05)。GDM组中LPS+ST2825组3个细胞因子的表达水平低于其LPS组(P<0.05)。结论:调控GDM孕妇单核细胞中上游My D88的表达水平,下游NF-κB/p65及细胞因子(TNF-α、IL-1、IL-10)水平发生相应变化,提示My D88可能参与了GDM的发生并在其发病机制中起着重要作用。