天蚕壮阳散对中老年男性雄激素部分缺乏综合征模型大鼠睾丸间质细胞stAR蛋白表达的影响

目的观察天蚕壮阳散对中老年男性雄激素部分缺乏综合征(partial androgen deficiency of agingmale,PADAM)模型大鼠睾丸间质细胞中类固醇合成快速调节蛋白(steroidogenic acute regulatory protein,stAR蛋白)表达的影响。方法以环磷酰胺造成生殖系统受损、雄激素部分缺乏的PADAM大鼠模型,按照随机分组的原则分为4组:正常对照组、模型组、丙酸睾酮组、天蚕壮阳散组,观察各组大鼠一般情况、体重、悬尾实验和强迫游泳实验、睾丸指数等改变以评价大鼠自身状况,放射免疫法测定各组治疗前后血清总睾酮(total testosterone,TT)、游离睾酮(free testosterone,FT)水平,免疫组化法测定各组大鼠睾丸间质细胞stAR蛋白表达水平,进行统计分析。结果经环磷酰胺造模后,大鼠血清TT、FT水平下降(P<0.01)、行为学(悬尾试验)部分改变,基本类似PADAM,说明造模成功。两治疗组经治疗后血清TT、FT的含量较治疗前及模型组治疗后均显著提高(P<0.01),两治疗组比较差异无统计学意义(P>0.05)。两治疗组经治疗后悬尾实验不动时间均显著缩短(P<0.05),力竭游泳实验时间与模型组比较显著延长(P<0.05)。stAR蛋白灰度值显著下降(P<0.01)。结论天蚕壮阳散可阻止PADAM模型大鼠血清TT、FT的下降,提高stAR蛋白活性,改善抑郁状态和肌张力,其作用与丙酸睾酮相当。

STAR蛋白及其成员QKI的结构及功能

STAR即信号转导与RNA活化蛋白 ,这是一类集信号转导特性与RNA激活功能于一身的蛋白质。STAR蛋白家族都含有一个标志性的STAR功能区。STAR蛋白在胚胎发生、组织器官的发育 ,以及调节蛋白质的合成和表达等方面都发挥着重要作用。目前已鉴定出 30多种STAR蛋白 ,根据氨基酸序列的差异分为三个亚家族 ,其中QKI蛋白对神经髓鞘形成和胚胎发育有至关重要的作用。尽管越来越多的STAR蛋白被发现 ,但是至今仍然存在许多难点和疑点 。

hCG通过ERK1/2调节睾丸间质细胞StAR蛋白的表达

以2-3周龄的仔猪睾丸间质细胞为试验材料,研究了hCG在快速调节期对StAR蛋白表达的调节机制。结果表明:hCG、8-Br-cAMP均能使StAR蛋白、mRNA和P-ERK1/2的水平随刺激时间的延长逐渐增加,8-Br-cAMP作用的速度较hCG更快,增幅也更明显;加入PKI,StAR蛋白、mRNA和P-ERK1/2活性明显下降,但StAR mRNA仍然可以检测到;加入MAPK的抑制剂PD98059后,StAR蛋白、mRNA的水平均降低。由此可知,hCG在诱导StAR蛋白的表达过程中,首先通过cAMP-PKA直接调节蛋白前体蛋白向成熟蛋白的转化,随着时间的延长,通过cAMP-PKA-ERK1/2级联,磷酸化转录因子,促进StAR基因的表达。

来曲唑构建湿热型多囊卵巢综合征大鼠模型及对卵巢StAR蛋白质因子的影响

目的用来曲唑构建多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠模型,研究其对St AR蛋白质因子的影响。方法将22只6周龄SPF级雌性SD大鼠随机分为空白组和模型组,空白组大鼠用1%羧甲基纤维素灌胃,模型组大鼠用1 mg/kg来曲唑加1%羧甲基纤维素灌胃,连续21 d,建立来曲唑诱导的PCOS大鼠模型,造模结束后观察大鼠体质量、阴道脱落细胞涂片、睾酮、空腹胰岛素、卵巢HE染色、St AR免疫组化病理涂片。结果模型组大鼠体质量增加,阴道脱落细胞涂片提示排卵障碍,睾酮升高,空腹胰岛素升高,卵巢呈多囊样改变,卵巢St AR表达活跃。结论来曲唑成功构建了PCOS大鼠模型,St AR表达的活跃度与高雄激素血症程度呈正相关。

STAR蛋白QKI在去甲肾上腺素诱导大鼠心肌肥厚时的表达变化

目的 :探讨QKImRNA及蛋白在SD大鼠病理性心肌肥厚时的表达。方法 :采用去甲肾上腺素制备SD大鼠心肌肥厚模型 ,利用实时荧光定量PCR法和蛋白质免疫印迹法检测大鼠心肌肥厚时QKImRNA和蛋白质的表达变化。结果 :在SD大鼠心脏中有 3种QKI异构体mRNA和QKI蛋白的表达 ;当去甲肾上腺素持续输注引起大鼠心肌肥厚时 ,心脏QKI -5mRNA和QKI蛋白质表达水平均明显降低 (P <0 0 5) ;去甲肾上腺素诱导培养的乳鼠心肌细胞肥大时 ,QKI -5mRNA表达量也明显低于对照 (P <0 0 5)。结论 :大鼠心脏有QKImRNA和蛋白质表达 。

睾酮可通过抑制StAR蛋白的表达调节自身的分泌

为了研究睾酮的自分泌调节机制,选取2-3周龄的仔猪睾丸间质细胞为研究材料。不同浓度的睾酮(0、10mg/mL、20mg/mL、50mg/mL、100mg/mL)与间质细胞共孵育48h,更换培养液,加入hCG(50U/mL)孵育4h,收集培养液,用放射免疫法(RIA)测定睾酮、hCG和cAMP的浓度。然后用浓度为50mg/mL的睾酮与胆固醇,5mg/mL;孕烯醇酮,500ng/mL;脱氢表雄酮,500ng/mL;雄烯二酮,500ng/mL和22R-羟胆固醇(3μg/mL)共同孵育间质细胞48h,更换培养液,加入hCG(50U/mL)孵育4h,收集培养液和细胞,用放射免疫法(RIA)测定睾酮,用免疫印迹测定StAR水平。实验结果如下:(1)随着睾酮浓度的增加,睾酮对自身合成的抑制作用逐渐增强,当睾酮浓度为50mg/mL,睾酮分泌、hCG的结合率以及间质细胞内cAMP的浓度分别下降了69.93%、61.24%和52.4%。(2)尽管睾酮抑制了胆固醇和雄烯二酮向睾酮的转化,但对其它几种前体物的转化没有明显影响。(3)睾酮不但抑制了基础水平StAR的表达,而且也抑制了hCG刺激的StAR蛋白的表达,这表明睾酮可以通过抑制StAR蛋白的表达降低自身的合成。

玉米赤霉烯酮对小鼠睾丸间质细胞内StAR蛋白及类固醇合成关键酶表达的影响

为了探讨玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEA)抑制睾丸间质细胞分泌雄激素的毒性机理,本研究以体外培养的原代小鼠睾丸间质细胞为材料,分别以0(对照组)、1、5、10、20μg·mL-1的ZEA进行染毒,染毒12h后,利用Western-blot和QRT-PCR技术,检测了细胞内类固醇合成快速调节蛋白(StAR)和类固醇合成关键酶(P450scc、3β-HSD、P450c17a1和17β-HSD)在转录和蛋白水平的表达。结果显示,与对照组相比,随着ZEA染毒浓度的升高,StAR转录水平及蛋白水平的相对表达量都呈上升趋势(P<0.05或P<0.01);而类固醇关键酶P450scc、3β-HSD、P450c17a1、17β-HSD的转录水平及蛋白水平的相对表达量都呈下降趋势(P<0.05或P<0.01)。结果表明:ZEA抑制睾丸间质细胞分泌睾酮的一个重要原因是其抑制了睾酮合成通路中类固醇合成关键酶的分泌。

金匮肾气丸对雄激素部分缺乏大鼠血清睾酮及StAR蛋白mRNA表达的影响

目的探讨金匮肾气丸对雄激素部分缺乏模型大鼠血清睾酮及StAR蛋白mRNA表达的影响。方法将40只SD大鼠采用腹腔注射环磷酰胺(20mg/kg·d^(-1))复制模型后,随机分为4组,即模型组、金匮肾气丸高、中、低剂量组,每组各10只,分别采用蒸馏水及金匮肾气丸水溶液高、中、低剂量灌胃,治疗28d后,观察血清睾酮及睾丸StAR蛋白mRNA表达。结果与模型组(98.33±8.36)ng/dl比较,金匮肾气丸高剂量组(301.17±46.90)ng/dl、中剂量组(215.46±26.73)ng/dl血清睾酮显著性升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);金匮肾气丸高剂量组(11.08±1.45)、中剂量(10.47±1.26)、低剂量组(7.30±1.08)之间睾丸StAR蛋白mRNA表达水平分别与模型组(4.87±0.95)比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论金匮肾气丸可提高雄激素部分缺乏大鼠血清睾酮水平,其机制可能是通过提高睾丸StAR蛋白mRNA表达水平实现。

类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)的研究进展

类固醇激素合成过程中,需要急性调节蛋白(StAR)将细胞质中的胆固醇转运到线粒体中,而StAR基因的表达及相关反应物通过调节细胞中的StAR水平,来调控类固醇激素的合成过程。本文结合大量相关文献资料,首先综述了当前研究者对急性调节蛋白(StAR)的分子结构、编码基因及同源性的研究成果,包括StAR的分子质量、分类类型和同源蛋白转运作用等。随后综述了StAR表达的各种影响因素,包括cAMP-蛋白激酶A(PKA)信号通路、蛋白激酶C(PKC)、调节因子StAR基因及其他因素。一些影响因素是StAR基因转录或转录后表达修饰的参与成分,在影响类固醇激素合成上存在直接、间接作用,在影响作用上存在正向、负向的调节,在影响目标上存在维持稳定、快速增强和抑制降低等类型。最后,探讨了StAR调节类固醇激素合成的作用及其机制,包括跨膜转运胆固醇、StAR对类固醇激素合成的促进作用、巨噬细胞影响StAR调节类固醇生物合成作用。这些作用都可能与机体细胞合成和分泌类固醇激素的水平紧密相关,对动物和人类的生殖内分泌产生很大影响。

微波辐射对大鼠睾丸StAR、P450scc基因表达影响

目的 研究微波暴露后大鼠睾丸组织类固醇合成急性调节蛋白(steroidogenicacuteregulatoryprotein ,StAR) ,细胞色素P4 5 0胆固醇侧链裂解酶(cytochromeP4 5 0Cholesterosidechainlyase ,P4 5 0scc)mRNA表达的变化和对睾酮分泌的影响,探讨微波暴露对成年雄性大鼠性功能影响的机制。方法 观测微波暴露后大鼠性功能,以扑捉潜伏期(capturelatentperiod ,CLP)和扑捉次数(capturetimes,CT)作为判别指标;采用RT PCR方法和放射免疫方法分别测定微波暴露后3,6 ,2 4 ,72h睾丸组织中StAR、P4 5 0sccmRNA水平及血清睾酮含量。结果 微波暴露后3h ,观测到雄性大鼠CLP明显延长(P <0 . 0 1) ,CP明显减少(P <0 .0 1) ,在观测的72h内,大鼠的性行为都较对照组明显下降。血清睾酮含量和睾丸组织StRA、P4 5 0sccmRNA变化有一致性,即在微波暴露后3h ,分别较对照降低83 .1% ,5 7. 3% ,5 3. 6 % (P <0. 0 1) ,6h略有回升,但仍明显低于对照组,2 4h恢复到正常水平,72h再次出现明显降低,分别较对照组降低5 7 .6 % ,39. 5 % ,5 3 .5 % (P <0 . 0 1)。结论 微波暴露可影响睾丸间质细胞StAR、P4 5 0sccmRNA表达而降低睾酮的合成,进而对雄性大鼠性行为造成影响。

高效氯氰菊酯对小鼠卵巢生殖功能的影响及维生素E的干预作用

为探究高效氯氰菊酯(beta-cypermethrin,β-CP)对雌性小鼠卵巢生殖功能的影响及维生素E (vitamin E, VE)的干预作用,将雌性昆白小鼠随机分为6组:空白对照组(花生油处理)、β-CP不同剂量(10、20、40 mg/kg)处理组、VE保护组(20 mg/kgβ-CP+20 mg/kg VE)和VE组(20 mg/kg VE),连续灌胃10 d。灌胃结束后取小鼠卵巢组织,观察组织结构的病理变化,采用免疫组化法、蛋白免疫印迹试验及RT-PCR方法检测卵巢中StAR蛋白含量及casp-3、casp-8、INHα和INHβB基因mRNA表达的变化。结果显示:与对照相比,10、20和40 mg/kg的β-CP处理均使小鼠卵巢组织结构发生了损伤,使组织中StAR蛋白的浓度分别降低了18.8%、36.3%和40.3%,casp-3基因的表达分别升高了16.0%、26.7%和52.9%,INHα基因的表达分别升高了34.5%、83.6%和228.7%,INHβB基因的表达分别升高了7.5%、39.2%和52.7%;20和40 mg/kg的β-CP处理使得casp-8基因的表达分别升高了27.1%和36.7%。上述处理组与对照组的差异均达显著水平(P<0.05)。与20 mg/kgβ-CP处理组相比,VE保护组的StAR蛋白含量也显著增多(P<0.05)。研究表明,β-CP对小鼠卵巢具有毒性作用,这与β-CP抑制StAR蛋白的合成,上调casp-3、casp-8、INHα及INHβB基因的表达有关;添加VE对小鼠卵巢有一定的保护作用,这与VE可减弱β-CP对StAR蛋白合成的抑制作用有关。

电磁辐射对大鼠睾丸合成睾酮功能的影响

目的探讨电磁辐射对成年大鼠睾丸组织中类固醇合成急性调节蛋白 (StAR)、细胞色素P4 5 0胆固醇侧链裂解酶 (P4 5 0scc)的作用。方法采用放射免疫方法分别测定电磁辐照后 3、6、2 4、72h及对照组血清睾酮含量 ,同时运用RT -PCR方法测定睾丸组织中StARmRNA、P4 5 0sccmRNA水平。结果辐照后 3h血清睾酮含量和StARmRNA、P4 5 0sccmRNA水平分别较对照组降低 83.1%和 5 7.3%、5 3.6 % ,(P <0 .0 1) ;6h略有回升 ,但仍分别较对照组降低 5 2 .6 %、17.9%、2 9.2 % (P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ;2 4h恢复到正常水平 ,72h再次分别较对照组降低 5 7.6 %、39.5 %、5 3.5 % (P <0 .0 1)。结论电磁辐射能在转录水平影响睾丸间质细胞StARmNA、P4 5 0sccmRNA的表达 。

孕期微量染镉对雄性胎鼠性腺分化发育影响的研究

目的:探讨孕期微量染镉对胎鼠睾丸分化发育的影响及作用机制。方法:SD孕鼠16只,随机分为镉组(A组)、己烯雌酚组(B组)、镉加他莫昔酚组(C组)和正常对照组(D组),每组4只。A组于孕期第9、11、13天腹腔注射氯化镉1.5mg/(kg.d),B组于妊娠第9至17天皮下注射己烯雌酚100μg/(kg.d),C组注射氯化镉的同时给予雌激素受体拮抗剂他莫昔酚50mg/(kg.d),D组注射与镉等体积生理盐水。妊娠第18天,剖宫产取雄性胎鼠睾丸作光、电镜观察;免疫组化测定各组胎鼠睾丸间质细胞类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)表达水平;RT-PCR法测定苗勒氏管抑制物(MIS)表达量。结果:光镜下A组和B组睾丸生精小管内支持细胞排列紊乱,间质成分增生,C组未见明显的形态学改变;电镜下A组和B组均可见支持细胞、生殖母细胞及间质细胞线粒体肿胀、内质网扩张以及间质细胞内脂滴堆积,C组超微结构退变轻于A组和B组;A组和B组间质细胞中StAR阳性产物表达均显著低于D组(P<0.01),C组StAR阳性产物表达虽低于D组,其差异没有统计学意义(P>0.05),但却明显高于A组(P<0.05);各组间MIS表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:孕期微量镉暴露可影响雄性胎鼠性腺的分化与发育,且镉具有雌激素样作用。

黄体生成素受体及类固醇激素合成急性调节蛋白在大鼠多囊卵巢综合征模型中的表达

目的:探讨黄体生成素受体(LHR)及类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)在大鼠多囊卵巢综合征(PCOS)模型中的表达及作用。方法:将50只21日龄SD大鼠随机分为模型组(PCOS组,n=35)和对照组(NC组,n=15)。通过注射脱氢表雄酮(DHEA)建立PCOS大鼠模型,放射免疫法和酶联免疫法分别检测血清孕酮(P)和雌二醇(E_2)水平及睾酮(T)水平;免疫组织化学法对LHR及StAR进行细胞定位分析,RT-PCR和Western blotting分别检测LHR及StAR mRNA和蛋白表达变化。结果:与NC组相比,血清E_2和T水平显著升高,P水平无显著变化;LHR和StAR mRNA和蛋白表达水平均显著升高。结论:PCOS高雄激素血症可能与LHR和StAR表达调控有关;两者与E_2水平升高之间的关系仍有待阐明。

莱克多巴胺对人卵巢颗粒细胞类固醇激素合成急性调节蛋白表达的影响

目的探讨β2肾上腺素受体(adrenergic receptor,AR)激动剂莱克多巴胺(ractopamine,RAC)对人卵巢颗粒细胞类固醇激素合成的效应。方法在人卵巢颗粒细胞体外培养系统中,添加高(50μmol/L)、中(5μmol/L)、低(0.5μmol/L)3种剂量的RAC,并设置空白对照(对照组)、50μmol/L克伦特罗(clenbuterol,CLB)和50μmol/L普萘洛尔组,在0 h、4 h、12 h、24 h和48 h回收细胞,采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测颗粒细胞类固醇激素合成急性调节蛋白(steroidogenic acute regulatory protein,St AR)m RNA和蛋白表达水平的变化。结果各实验组颗粒细胞St AR m RNA的表达与其蛋白表达的变化趋势基本一致。对照组颗粒细胞各时间点St AR的表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。CLB和RAC可升高St AR表达,普萘洛尔可抑制其表达。与0 h相比,St AR的表达水平在RAC作用后4 h达到高峰(P=0.000);12 h后,St AR的表达从峰值急剧下降(P=0.003);24 h后,基本恢复至基础水平(P>0.05)。不同剂量RAC与颗粒细胞共培养4 h后,St AR表达水平从高到低的顺序为:RAC低剂量组>RAC中剂组>RAC高剂量组,组间差异有统计学意义(P=0.000)。结论 RAC可升高颗粒细胞St AR的表达水平,影响卵巢类固醇激素合成功能,其后果可能引起女性生殖内分泌紊乱。