STARD7蛋白新型小分子抑制剂Lasiodin激活NRF2/EGR1通路诱导三阴乳腺癌铁死亡

目的探讨StAR相关脂质转移结构域包含7(STARD7)在三阴乳腺癌(TNBC)中的表达情况及其与预后的相关性。高通量筛选STARD7的小分子抑制剂,研究其小分子抑制剂对TNBC的影响及潜在分子机制。方法生物信息学分析STARD7在各亚型乳腺癌中的表达情况以及与预后的相关性。Westernblot和免疫组化检测细胞系以及临床TNBC样本中STARD7的表达情况。以STARD7为靶点,通过分子对接、体外蛋白纯化和体外分子互作实验,筛选并鉴定STARD7的小分子抑制剂。CCK8测定对照组(DMSO组)及1、2、5、10、20μmol/L浓度Lasiodin处理24 h后的TNBC细胞的存活率,确定最佳药物作用浓度。台盼蓝和YO-PRO-1染色测定各组细胞死亡率,Westernblot测定各组凋亡、铁死亡相关蛋白表达;RT-qPCR及Western blot分别测定NRF2、HO-1、KEAP1、EGR1的mRNA和蛋白表达。构建TNBC移植瘤模型并随机分为对照组、紫杉醇组(10 mg/kg)和Lasiodin组(10 mg/kg),分别处理后测定肿瘤体积、裸鼠体重,HE染色评价生物安全性。结果生物信息学分析及体外实验表明STARD7在TNBC组织及细胞中高表达,且与患者预后负相关(P<0.05);高通量筛选并鉴定出Lasiodin是STARD7的小分子抑制剂;Lasiodin对STARD7的抑制可能通过调控下游NRF2/EGR1通路相关蛋白的表达促使TNBC细胞发生铁死亡,同时伴有凋亡和坏死。体内实验证明Lasiodin能够抑制肿瘤生长(P<0.05),且未观察到明显的不良反应。结论STARD7可能在TNBC的进展中发挥重要的调控作用,Lasiodin为其小分子抑制剂,提示STARD7和Lasiodin分别可能成为治疗TNBC的潜在靶点和新型药物。

Annexin5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌过程中StarD7表达的影响

目的先前研究发现annexin 5刺激大鼠睾丸间质细胞后,3β-羟类固醇脱氢酶(3βbeta-hydroxysteroid dehydro-genase,3β-HSD)及睾酮水平都增加,推测annexin 5和睾酮之间可能存在某种内在联系。文中旨在研究annexin 5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌过程中的StarD7(START domain containing 7)表达的影响,探讨annexin 5影响睾酮分泌的机制。方法原代培养大鼠睾丸间质细胞,1nmol/L的annexin 5处理间质细胞24h,分别提取细胞总mRNA和总蛋白。RT-PCR检测StarD7的mRNA表达改变。Western blotting方法分析睾丸间质细胞中StarD7的蛋白表达变化。收取细胞爬片,利用免疫细胞化学的方法对StarD7在睾丸间质细胞中进行定位。结果与对照组相比,在mRNA水平上,加药组StarD7 mRNA的表达增加了44.5%(1.10±0.02 vs 1.59±0.09,P<0.05)。在蛋白水平上,加药组StarD7蛋白的表达增加了44.3%(1.49±0.10 vs 2.15±0.16,P<0.05)。StarD7主要定位在大鼠睾丸间质细胞的胞浆内,加药组的染色强度明显强于对照组。结论 StarD7在基因和蛋白水平均受annexin 5的调控,结合先前发现annexin 5可调控睾丸间质细胞睾酮合成的结果,提示annexin 5调控睾酮合成可能是通过调控StarD7的表达来实现的。

抗STARD7单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备抗STARD7(START domain containing 7,transcript variant 1)的单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),探讨STARD7蛋白在哺乳动物真核细胞中的表达,为进一步研究STARD7功能奠定基础。方法以纯化的原核表达STARD7蛋白免疫的BALB/c小鼠脾细胞与Sp2/0融合,通过间接ELISA的筛选和有限稀释克隆化,获得稳定分泌抗STARD7蛋白的McAb的杂交瘤细胞株。采用McAb通过Western blot方法对STARD7效价和特异性进行鉴定。结果获得2株能高效分泌特异性McAb的抗STARD7的杂交瘤细胞系W001、W003,其免疫球蛋白亚类均为IgG1。Western blot结果表明抗STARD7单克隆抗体能特异性识别真核细胞中的STARD7蛋白。结论成功获得抗STARD7的特异性的单克隆抗体,为进一步研究STARD7与肿瘤的相关功能研究创造了条件。

猪STARD3NL基因克隆和表达谱分析

本研究旨在克隆猪STARD3 NL(STARD3N-terminal like protein)基因,对其基因结构进行分析,并研究该基因在猪不同组织中的表达特性。采用5′和3′-RACE以及RT-PCR方法克隆猪STARD3 NL基因,利用生物信息学方法预测蛋白结构,应用qRT-PCR技术检测组织表达特性。结果表明,猪STARD3 NL基因的cDNA序列长度为1 319bp(GenBank登录号:HQ634946),编码235个氨基酸,该氨基酸序列与其他物种相比一致性较高;进化树分析表明,猪STARD3NL氨基酸序列与牛和绵羊的关系较近,与斑马鱼的进化关系最远。STARD3NL氨基酸序列包含保守的MENTAL结构域,为疏水蛋白,包含4个跨膜螺旋区;二级结构主要是α-螺旋,占60%;该蛋白不存在信号肽,不是分泌蛋白;亚细胞定位显示,该蛋白存在于内质网的概率为39.1%。qRT-PCR分析表明,STARD3 NL基因在所检测猪的14种组织均有表达,在肝中表达水平最高,在眼肌中的表达水平最低;莱芜猪和大长猪被圆环病毒感染后,STARD3 NL基因在2种猪肺组织中的表达水平差异不显著(P>0.05)。研究结果将为进一步研究STARD3 NL基因的结构和功能以及猪抗病育种提供资料。

AME详解STARD——如何规范写作诊断准确性试验报告?

长期以来,由于对学术论文撰写没有统一的规范要求,很多学者在撰写论文的时候往往是根据个人习惯进行撰写,导致论文遗漏了部分重要的研究信息,削弱了论文的学术穿透力和应用价值,阻碍了科研成果的传播和应用。学术论文撰写规范一直困扰着从事临床研究的学者和期刊编辑们,规范论文写作的呼声也越来越高。

STARD3基因单核苷酸多态性及蛋白质表达与胃癌风险性

目的观察STARD3基因单核苷酸多态性与汉族人群胃癌易感性关系，探讨STARD3表达与胃癌临床病理特征相关性。方法采用Sequenom基因分型仪对安徽地区311例胃癌患者及425例正常对照组血样STARD3rs9972882、rs881844、rs11869286和rs1877031多态性进行基因分型。采用组织芯片及免疫组化法对其中243例胃癌组织和20例癌旁正常胃黏膜的STARD3表达进行检测。结果STARD3基因4个单核苷酸多态性在胃癌和对照组之间分布差异无显著性。单倍型分析提示STARD3单倍型CCCT连锁影响胃癌易感性（P=0．043，OR=0．805，95％CI=0．643—0．992）。临床病理资料分层分析显示STARD3rs1877031杂合子Tc更多见于胃黏液腺癌和印戒细胞癌（P=0．021，OR=2．882，95％CI=1．173—7．084）。免疫组化结果发现胃癌组织STARD3表达与患者性别、饮酒、肿瘤部位、组织学类型和分化程度密切相关（P〈0．05）。结论STARD3可能与中国人群胃癌的发生、分化程度及组织学形态相关。

miR-92a靶向调控STARD13表达促进前列腺癌DU145细胞侵袭和迁移的实验研究

目的探讨miR-92a对前列腺癌DU145细胞侵袭和迁移的影响及其机制。方法将转染miR-92a mimics、miR-92a inhibitor及其阴性对照的细胞分别标记为miR-92a mimics组、miR-92a inhibitor组、mimics-NC组和inhibitor-NC组;而将转染siRNA-STARD13、pcDNA3.1-STARD13及相应对照的细胞作为siRNA-STARD13组、pcDNA3.1-STARD13组、siRNA-NC组和pcDNA3.1组。将miR-92a mimics或miR-92a inhibitor转染至DU145细胞后,采用RT-PCR检测细胞中miR-92a的表达水平,MTT检测细胞活力,Transwell小室实验检测miR-92a对DU145细胞侵袭和迁移能力的影响,Western blotting检测miR-92a对DU145细胞中STARD13蛋白表达的影响;采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-92a和STARD13的靶向关系;将siRNA-STARD13和pcDNA3.1-STARD13过表达质粒转染至DU145细胞后,观察STARD13表达对DU145细胞侵袭和迁移能力的影响。结果与mimics-NC组比较,miR-92a mimics组细胞中miR-92a的表达水平明显升高(P<0.05);与inhibitor-NC组比较,miR-92a inhibitor组细胞中miR-92a表达水平明显降低(P<0.05)。MTT检测结果显示,与mimics-NC组比较,miR-92a mimics组细胞24、48、72 h的细胞活力明显升高(P<0.05);与inhibitor-NC组比较,miR-92a inhibitor组细胞24、48、72 h的细胞活力明显降低(P<0.05)。Transwell小室检测结果显示,与mimics-NC组比较,miR-92a mimics组细胞侵袭和迁移能力均明显增强(P<0.05);与inhibitor-NC组比较,miR-92a inhibitor组细胞侵袭和迁移能力均明显减弱(P<0.05)。TargetScan软件预测结果显示,miR-92a和STARD13之间存在互补的结合位点;双荧光素酶报告基因实验检测结果显示,与相应对照mimics-NC组或inhibitor-NC组比较,miR-92a mimics能够使转染STARD13-WT质粒细胞的荧光素酶活性降低,而miR-92a inhibitor能够使其荧光素酶活性升高(P<0.05);此外,Western blotting检测结果显示,与相应对照组比较,miR-92a mimics可使DU145细胞中STARD13蛋白表达水平明显降低,而miR-92a inhibitor则使STARD13蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。Western blotting检测结果显示,与siRNA-NC组比较,siRNA-STARD13组细胞中STARD13蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-STARD13组细胞中STARD13蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。MTT检测结果显示,与siRNA-NC组比较,siRNA-STARD13组细胞24、48和72 h的细胞活力明显升高(P<0.05);与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-STARD13组细胞24、48、72 h的细胞活力明显降低(P<0.05)。Transwell小室实验结果结果显示,siRNA-STARD13组细胞侵袭和迁移能力均明显高于siRNA-NC组,而pcDNA3.1-STARD13组细胞侵袭和迁移能力均明显低于pcDNA3.1组(P<0.05)。结论miR-92a可通过靶向调控STARD13表达促进前列腺癌DU145细胞侵袭和迁移。

研究诊断准确性的论著的质量:STARD公布后无改变——STARD公布前后的比较研究

目的确定"对诊断准确性进行研究的论著的规范"(STARD)公布前、后该类论著的质量改善情况。

STARD7真核表达载体的构建及肝癌细胞HepG1*2稳定转染株的建立及鉴定

SATRD7是一编码295个氨基酸残基，分子量为34．7kDa的新型蛋白质，其生物学功能至今未明。通过生物信息学分析，发现其全长序列中含有一个类固醇敏感性调节蛋白（StAR）相关脂类转运体结构域（START）。START涉及脂类结合介导的细胞信号转导、脂类转运和调节。START发生突变或错误表达与基因错配、自身免疫性疾病以及肿瘤相关。为了研究STARD7基因过表达后对肿瘤细胞生物学的影响，我们将STARD7基因克隆构建到真核表达载体上，并稳定转染到HEPGI＊2肝癌细胞中。

STARD3在人类表皮生长因子受体2阳性乳腺癌中的研究进展

类固醇合成急性调节相关脂质转运蛋白3(steroidogenic acute regulatory protein related lipid transfer domain containing3,STARD3)是类固醇激素急性调节蛋白家族成员之一,参与细胞内胆固醇非囊泡转运过程。目前已有研究证明人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)阳性乳腺癌的STARD3基因可与HER2基因共扩增、共高表达,且STARD3表达水平与肿瘤转移、局部复发和较短的总生存期呈正相关。本文就STARD3调节细胞内胆固醇分配过程以及与HER2阳性乳腺癌的关系进行综述,并分析其可能的致病机制。

STARD8在胃癌中的表达水平及诊断意义

目的评估肿瘤组织中GTP酶激活因子[StAR-related lipid transfer(START)domain containing 8,STARD8]表达水平在胃癌(gastric cancer,GC)中的临床意义,包括诊断价值、表达水平和GC淋巴结转移之间的联系。方法回顾分析2018年12月至2019年12月收治的GC患者,将临床资料完整的患者纳入研究中。收集GC患者的肿瘤组织样本作为观察组;将配对的癌旁正常组织样本作为对照组。检测2组组织样本中STARD8的表达水平,通过ROC曲线评估肿瘤组织中STARD8表达水平对GC的诊断价值。结合GC患者的临床资料探究STARD8表达水平和GC病理特征的相关性,通过ROC曲线评估STARD8表达水平对GC淋巴结转移的预后价值,并通过单因素分析以及二元logistic回归分析评估GC中淋巴结转移的危险因子。结果与对照组比较,观察组组织中STARD8的表达水平显著下调,且其低表达具有较高的诊断价值(AUC值:0.862;敏感度:68.4%;特异性:96.1%;cut-off值:0.796)。肿瘤组织中低表达的STARD8与GC患者更高的TNM分期以及更低的分化程度显著相关,也和GC患者发生淋巴结转移显著相关,且肿瘤组织中STARD8表达水平能够有效评估淋巴结转移(AUC值:0.727;敏感度:78.3%;特异性:62.3%;cut-off值:0.493)发生的风险。STARD8低表达(OR:12.739,95%置信区间:2.681~60.533,P=0.001)是GC患者发生淋巴结转移的独立危险因子。结论GC患者肿瘤组织中STARD8的低表达不仅具有较高的诊断价值,且其表达和GC的TNM分期、分化程度以及淋巴结转移显著相关,此外STARD8低表达是GC淋巴结转移的独立危险因子。

miR-1246靶向StarD13对乳腺癌细胞影响的研究

目的探讨miR-1246促进乳腺癌细胞增殖、迁移与侵袭能力的分子机制.方法生物信息学分析miR-1246的表达及其与乳腺癌患者生存率的关系.实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-RCR)评估miR-1246在乳腺癌细胞和乳腺癌组织中的表达,Transwell小室检测细胞侵袭能力,EdU实验和克隆实验检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,生物信息学方法确定miR-1246的靶蛋白StarD13在乳腺癌中表达情况及生存率曲线,双荧光素酶报告基因检测miR-1246与StarD13的关系,蛋白质印迹法实验检测下调miR-1246后相关靶蛋白StarD13的表达情况.采用独立样本t检验分析两组之间的定量数据,采用单一因素方差分析进行多组之间的比较.结果miR-1246在乳腺癌组织和乳腺癌细胞MDA-MB-231中均高表达.Transwell实验结果显示,下调miR-1246后miR-1246 inhibitor组细胞较NC inhibitor组细胞侵袭能力降低,t=9.14,P<0.01.EdU实验结果显示,下调miR-1246后细胞增殖能力下降,t=6.81,P<0.01.克隆形成实验表明,下调miR-1246后细胞的增殖能力下降,t=5.41,P<0.01.划痕实验结果显示,miR-1246 inhibitor和NC inhibitor组的细胞迁移率分别为(0.21±0.02)%和(0.50±0.04)%,差异具有统计学意义,t=13.13,P<0.01.生物信息学预测miR-1246与StarD13之间存在互补序列;StarD13在乳腺癌组织中低表达,且低表达StarD13的乳腺癌患者预后较差,P<0.01.转染miR-1246抑制物时StarD13的表达量增加.双荧光素酶报告基因实验证实StarD13可作为miR-1246的靶基因.EdU实验结果显示,miR-1246 inhibitor+siStarD13组细胞[(55.89±1.95)%]比miR-1246 in-hibitor+NC组细胞[(25.24±6.17)%]EdU阳性率有提高,差异有统计学意义,t=8.21,P<0.01.Transwell实验表明,与miR-1246 inhibitor+NC组(127.67±23.46)比较,miR-1246 inhibitor+siStarD13组(385.67±11.59)穿过基底膜细胞数量明显增多,差异具有统计学意义,t=17.08,P<0.001.结论miR-1246可通过靶向调控StarD13促进乳腺癌细胞增殖、迁移与侵袭能力.

诊断准确性研究报告指南——STARD 2015简介

诊断准确性研究报告指南(Standards for Reporting of Diagnostic Accuracy,STARD)是用于规范诊断试验的报告,其最新版于2015年发布。本文主要介绍了STARD 2015指南的报告清单和研究流程图。我们期望国内同行借鉴STARD 2015指南开展诊断试验,不断提高我国诊断试验的报告质量。

脂质转运蛋白StarD4促乳腺癌细胞增殖的作用及其机制

StarD4具有促三阴乳腺癌(TNBC)增殖转移功能,但临床价值和分子机制未明。本文发现StarD4在TNBC癌组织高表达,且高表达患者生存预后不良。通过TNBC细胞模型的转录组检测和分析发现:StarD4敲减表达引发胆固醇通路基因的整体下调和TNBC肿瘤通路的显著富集。进一步分析验证了StarD4可能通过胆固醇通路交叉调控细胞膜受体ITGA5的蛋白稳定性,发挥促癌的分子机制,为临床TNBC的诊疗应用提供了指导。

鸡STARD3胞外域的原核表达及其抗血清制备

为获得鸡类固醇激素合成急性调节蛋白结构域3(STARD3)胞外域融合蛋白的特异性抗血清,采用人工合成方法获得鸡STARD3胞外域基因,利用pGEX6P-1质粒及BL21(DE3)进行原核表达,将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,利用Western blot及间接ELISA方法测定抗体特异性和效价。结果显示:获得了STARD3胞外域融合蛋白的特异性抗血清,效价大于1∶6 400。本试验为研究鸡STARD3蛋白功能奠定了基础。

非酒精性脂肪性肝病细胞模型中胆固醇代谢紊乱机制

肝脏胆固醇代谢紊乱在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的发生发展中具有重要作用。为揭示饱和脂肪酸诱导肝细胞胆固醇稳态失衡的分子机制,采用棕榈酸诱导HepG2细胞,通过油红O染色、试剂盒测定细胞内甘油三酯(TG)和胆固醇(TC)含量评估脂质累积;采用RT-qPCR和Western blot检测与胆固醇稳态相关基因和蛋白表达水平;LC-MS/MS检测细胞胆汁酸和线粒体氧甾醇水平。结果发现,棕榈酸处理后,细胞内脂滴明显累积且TG与TC含量显著升高(P<0.0001);胆固醇合成和摄取相关基因表达无明显变化,但ABCG5和LXRα蛋白表达显著下调,表明胆固醇外排减少;负责胆汁酸替代合成的限速酶STARD1和CYP7B1基因表达显著增强,线粒体中胆固醇、27-羟基胆固醇(27-OHC)以及细胞中鹅去氧胆酸(CDCA)水平明显升高。本研究结果表明,棕榈酸刺激后可能通过抑制胆固醇外排和促进胆汁酸合成扰乱胆固醇稳态。

医学研究报告规范在生物医学期刊中的采用情况及影响因素调查

目的分析医学研究报告规范在生物医学期刊中的采用情况及影响因素,以期为有效采用医学研究报告规范、提高研究报告质量提供参考。方法采用目的抽样法,抽取我国生物医学期刊的编辑人员216例为调查对象。于2017年10月—2018年2月,在检索查阅文献、专家咨询的基础上,结合研究目的自行设计调查问卷。问卷主要内容包括:期刊的基本情况、编辑人员的基本情况、期刊对医学研究报告规范的采用情况及影响因素等。共发放问卷216份,回收有效问卷198份,问卷的有效回收率为91.7%。结果 198本期刊中,采用医学研究报告规范的期刊有78本,采用率为39.4%;采用CONSORT声明的期刊78本(39.4%),采用STROBE声明的期刊19本(9.6%),采用STARD声明的期刊18本(9.1%),采用PRISMA声明的期刊26本(13.1%)。不同数据库收录情况期刊的医学研究报告规范采用率、CONSORT声明采用率、PRISMA声明采用率比较,差异有统计学意义(P<0.05),且核心期刊的采用率高于非核心期刊(P<0.016 7)。采用医学研究报告规范的78本期刊中,采用过程中遇到的主要问题/困惑为作者不能很好配合采用(66.7%,52/78)和要求严格、可能导致许多稿件无法发表而影响出版进度(64.1%,50/78)。在120本未采用医学研究报告规范的期刊中,未采用的主要可能原因为要求严格、可能导致许多稿件无法发表而影响出版进度(65.8%,79/120)和作者不能很好配合采用(55.8%,67/120)。结论目前医学研究报告规范在生物医学期刊中的采用情况尚有待改善,核心期刊的采用率较非核心期刊高,影响期刊采用医学研究报告规范的主要因素为作者不能很好配合采用和要求严格可能导致很多稿件无法发表而影响出版进度。建议加强编辑人员和医学生医学研究报告规范的培训,以推动报告规范的采用,进一步提高医学研究报告的质量。

固醇类物质对鹅颗粒细胞胆固醇转运相关基因表达的影响

【目的】揭示胆固醇转运相关基因在鹅不同发育阶段卵泡中的表达模式及固醇类物质对颗粒细胞上述基因表达的影响。【方法】首先应用RT-qPCR技术检测SREBP-2、STADR4、STAR和CYP11A1在产蛋高峰期鹅卵巢内不同发育阶段卵泡中的mRNA表达水平;然后分离鹅F1卵泡颗粒细胞体外培养,24 h后分别添加不同浓度胆固醇、25-羟胆固醇和洛伐他汀(胆固醇合成限速酶抑制剂)处理,最后使用MTT法检测细胞活性和RT-qPCR技术检测上述基因表达量。【结果】四个基因在不同发育阶段卵泡中的表达模式相似;高浓度胆固醇显著增加细胞活性(P<0.05),25-羟胆固醇和洛伐他汀则降低细胞活性。随着胆固醇浓度升高,四个基因表达量均先升高后下降;25-羟胆固醇显著抑制SREBP-2和STAR的表达(P<0.05);升高洛伐他汀浓度使SREBP-2表达量先降低后升高,与其余三个基因相反。【结论】胆固醇转运和类固醇激素合成相关基因表达量受固醇种类和浓度调节,并且与卵泡类固醇激素合成密切相关,这为揭示鹅卵泡发育机制和提高产蛋量提供了理论参考。

DLC2在肿瘤中作用及机制的研究进展

DLC2是新近发现的抑癌基因,在肝癌、乳腺癌、胶质瘤等多种肿瘤中不表达或低表达。DLC2可增强RhoA、Cdc42的GTP酶活性,负性调控Rho蛋白活性及其下游效应分子,并可靶向定位于黏着斑;DLC2还可通过其SAM结构域与蛋白相互作用,促进蛋白泛素化降解;近年来研究发现,DLC2可通过竞争性内源RNA机制与其他转录体相互调控。通过以上3种主要机制,DLC2抑制肿瘤细胞增殖,并促进肿瘤细胞凋亡,阻碍肿瘤细胞转移、侵袭及黏附,削弱肿瘤细胞的干性,增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。因此,上调DLC2的表达可作为潜在的抗肿瘤策略,用于协同化疗治疗肿瘤。

存车收费合同之法律界定

存车收费的法律性质是属于保管合同还是车位租赁合同在我国目前的立法上没有明确的规定。但随着社会经济的发展和私车拥有率的提高,这一问题的重要性日益突出。对这一法律关系的认定直接关系到司法实践中当事人责任和权利义务的划分。本文从这一法律关系的性质、特征、当事人的真实意思和约定的习惯等方面入手进行分析,并结合理论和司法实践中对此存在的争议。旗帜鲜明的提出了自己的观点和看法：“存车收费应定性为保管合同。”以期对司法实践中因这一问题的不确定所带来的混乱有所裨益。