HDAC3抑制剂RGFP966通过下调TGF-β1/SMAD3/STAT-1信号通路抑制AIM2炎症小体活化和EMT缓解子宫内膜纤维化

目的探讨HDAC3抑制剂RGFP966缓解子宫内膜纤维化的分子机制。方法将18只6~8周雌性SD大鼠随机分为3组,Control组、IUA模型组(即宫内粘连大鼠模型组)、RGFP966治疗组(IUA模型组给予HDAC3抑制剂RGFP966治疗),每组6只。建立IUA大鼠模型。ELISA测定大鼠血清炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平。qPCR法测定大鼠子宫内膜组织上皮间质转化标志物E-cadherin、N-cadherin、α-SMA、Vimentin mRNA相对表达水平。蛋白质印迹法测定大鼠子宫内膜组织TGF-β1、SMAD3、p-STAT-1、STAT-1、AIM2、IL-18、cleaved-IL-1β、IL-1β的表达水平。结果与Control组相比,IUA模型组大鼠子宫角壁变薄,血清炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高(P<0.05);E-cadherin mRNA相对表达水平降低,N-cadherin、α-SMA、Vimentin mRNA相对表达水平升高(P<0.05);TGF-β1、SMAD3、p-STAT-1蛋白质表达水平增强(P<0.05);AIM2、IL-18、cleaved-IL-1β的表达水平增强(P<0.05)。与IUA模型组相比,RGFP966治疗组部分逆转(P<0.05)了上述指标。STAT-1和IL-1β的表达水平在上述3个分组中无明显差异(P>0.05)。结论HDAC3的抑制剂RGFP966可通过下调TGF-β1/SMAD3/STAT-1信号通路抑制AIM2炎症小体和EMT,缓解子宫内膜纤维化。

七叶皂苷钠阻断JAK-1/STAT-1信号诱导BGC-823及AGS细胞凋亡

目的:探讨七叶皂苷钠诱导胃腺癌BGC-823细胞及胃癌AGS细胞凋亡的机制。方法:采用CCK-8法检测七叶皂苷钠作用后胃癌细胞活力的变化;倒置显微镜下观察胃癌细胞的形态变化;荧光倒置显微镜观察DAPI单染后细胞核形态的改变;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western bloting检测JAK-1、STAT-1磷酸化情况;激光共聚焦显微镜观察STAT-1核转位情况。结果:七叶皂苷钠可浓度依赖性抑制胃癌细胞增殖,使胃癌细胞形态及细胞核形态呈现凋亡变化,显著升高癌细胞凋亡率,并下调JAK-1、STAT-1信号蛋白磷酸化及抑制STAT-1的核转位。结论:七叶皂苷钠能抑制BGC-823细胞及AGS细胞增殖并诱导其凋亡,该过程可能是通过抑制JAK-1/STAT-1信号级联来实现的。

STAT-1对白介素1β诱导的关节软骨细胞衰老的影响及其可能机制研究

目的探讨STAT-1对白介素1β(IL-1β)诱导的关节软骨细胞衰老的影响及可能机制。方法软骨细胞同步化后分为:正常对照组(正常培养的软骨细胞);IL-1β组(加入IL-1β,浓度为10 ng/ml);阴性对照组(加入IL-1β和空白质粒);STAT-1转染组(加入IL-1β和siRNA-STAT-1重组质粒)。检测各组细胞的β-半乳糖苷酶染色阳性率;采用MTT法检测4组细胞培养24、48、72 h时的增殖情况;Western blotting法检测4组细胞STAT-1蛋白的表达水平;采用端粒酶检测试剂盒进行端粒酶活性测定。结果细胞培养24 h时,各组细胞的增殖率比较,差异无统计学意义(F=3.037,P=0.087)。细胞培养48 h和72 h时,各组细胞的增殖率比较,差异均有统计学意义(F=3.754,P<0.05;F=3.871,P<0.05);其中IL-1β组、阴性对照组细胞增殖率均分别低于正常对照组、STAT-1转染组,差异均有统计学意义(P<0.05)。正常对照组β-半乳糖苷酶染色阳性率为(12.11±1.34)%,IL-1β组为(65.62±2.56)%,阴性对照组为(60.73±3.21)%,STAT-1转染组为(21.32±2.21)%,4组细胞β-半乳糖苷酶染色阳性率比较,差异有统计学意义(F=2.877,P<0.05);其中IL-1β组和阴性对照组均高于正常对照组和STAT-1转染组,差异均有统计学意义(P<0.05)。4组STAT-1表达水平比较,差异有统计学意义(F=236.150,P<0.05);其中IL-1β组和阴性对照组STAT-1表达水平均高于正常对照组和STAT-1转染组,差异均有统计学意义(P<0.05)。正常对照组端粒酶活性为(81.65±5.28)%,IL-1β组为(60.32±5.32)%,STAT-1转染组为(76.76±3.45)%。3组端粒酶活性比较,差异有统计学意义(F=26.040,P<0.05);其中IL-1β组端粒酶活性低于正常对照组和STAT-1转染组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 STAT-1在IL-1β诱导的衰老关节软骨细胞中表达水平升高,可能通过影响端粒酶活性而参与软骨细胞的衰老。

人重组IFN-γ对STAT-1在卵巢癌细胞中表达调控的研究

目的:研究IFN-γ对卵巢癌耐药细胞株SKOV3TS及敏感细胞株SKOV3中STAT-1表达的调控。方法:应用RT-PCR方法、细胞免疫荧光法检测SKOV3TS与SKOV3在IFN-γ作用前后STAT-1 mRNA及蛋白的表达。用MTT法检测不同浓度IFN-γ作用卵巢癌细胞株不同时间后对细胞增殖率的影响。结果:卵巢癌SKOV3TS、SKOV3细胞株均有STAT-1表达,且主要集中于胞浆。并且随着IFN-γ作用时间延长,STAT-1蛋白表达增强。IFN-γ作用两种细胞株24h及48h后STAT-1 mRNA表达均增加,且差异有统计学意义(P<0.01),但不同浓度IFN-γ作用相同时间后STAT-1 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。IFN-γ可显著抑制SKOV3TS和SKOV3细胞增殖,也呈时间依赖性(P<0.01)。IFN-γ对SKOV3组的抑制率较SKOV3TS组高(P<0.05)。结论:IFN-γ能够促进STAT-1表达,抑制卵巢癌细胞增殖。

氯沙坦对大鼠肾脏缺血/再灌注损伤中STAT-1及ICAM-1蛋白表达的影响

目的:研究氯沙坦在肾缺血/再灌注损伤中对STAT-1和ICAM-1蛋白表达的影响及在损伤修复过程中的作用。方法:大鼠背部双侧切开找到肾蒂,行无创动脉夹夹闭造成急性肾缺血/再灌注损伤模型,以氯沙坦预处理灌胃,苦味酸法测血清肌酐,免疫组化测肾组织切片中的STAT-1蛋白和ICAM-1蛋白表达的水平。结果:假手术组在6h和24h肾组织的病理和血肌酐数值无明显变化;模型组在缺血再灌注6h和24h与假手术组对比血清肌酐数值明显升高,肾组织切片在6h时STAT-1和ICAM-1蛋白已有表达,24h时两指标表达均明显上调;氯沙坦预处理组在缺血再灌注损伤6h和24h时与模型组对比,血肌酐数值明显下降,同时肾组织中STAT-1和ICAM-1蛋白表达也明显下调。结论:氯沙坦在肾缺血再灌注损伤中起保护作用,机制可能通过下调STAT-1和ICAM-1蛋白表达有关。

雷帕霉素干预急性肺损伤SD大鼠NF-κB p65和STAT-1基因表达研究

目的研究雷帕霉素对输血相关急性肺损伤(TRALI)和急性胰腺炎相关性肺损伤(APALI)的SD大鼠肺组织核转录因子p65(NF-κB p65)和信号转导与转录激活子-1(STAT-1)基因相对表达量的影响。方法将SD大鼠60只随机分成6组,分别为TRALI组、APALI组、雷帕霉素干预TRALI组、雷帕霉素干预APALI组、雷帕霉素干预对照组、正常对照组,每组10只。应用实时荧光定量RT-PCR检测大鼠肺组织NF-κB p65和STAT-1基因相对表达量,分析雷帕霉素对TRALI、APALI在mTOR相关细胞凋亡过程的干预作用。结果相比正常对照组,TRALI及APALI组大鼠肺组织NF-κB p65和STAT-1基因相对表达量均有不同程度下降(P<0.05),且APALI组下降程度比TRALI组更明显(P<0.01);雷帕霉素干预后,TRALI组NF-κB p65和STAT-1基因相对表达量与TRALI组比较均进一步下降(P<0.01),而APALI组和对照组下降则不明显或无变化(P>0.05)。结论应用雷帕霉素干预治疗TRALI大鼠可能会进一步加重其肺损伤的程度,而雷帕霉素对APAL大鼠则影响作用有限。

猪STAT-1α基因的原核表达及其多克隆抗体制备

【目的】通过制备STAT-1α多克隆抗体,为进一步研究STAT-1α蛋白的功能特性及探索STAT-1α与猪瘟病毒间的相互作用机制奠定基础。【方法】利用RT-PCR从猪肾PK-15细胞中克隆出STAT-1α基因保守片段,与pET-32a(+)构建原核表达重组质粒,转化原核宿主菌(Rosetta),进行IPTG诱导表达,表达的重组蛋白经纯化和复性浓缩后,免疫小鼠制备STAT-1α多克隆抗体。【结果】STAT-1α基因能与原核表达载体pET-32a(+)构建原核表达重组质粒pET-STAT-1α,转化大肠杆菌Rosetta后的最佳体外诱导条件是IPTG 0.5 mmol/L、诱导时间6 h,其重组蛋白主要以包涵体的形式表达。STAT-1α多克隆抗体具有高效特异性,与真核细胞PK-15细胞作用后,在PK-15细胞内能检测到STAT-1α蛋白表达,可观察到大部分细胞胞浆内有绿色荧光,但胞核内几乎无荧光,即STAT-1α主要定位在正常PK-15细胞的细胞浆内表达。【结论】制备获得的猪STAT-1α多克隆抗体特异性好,既能与原核细胞大肠杆菌(Rosetta)表达的STAT-1α反应,又能与真核细胞PK-15的STAT-1α发生反应。

与IGFBP-3相关的RXRα、STAT-1信号通路在β-淀粉样肽_(1～42)诱导大鼠海马神经元凋亡中的可能作用

目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)、视网膜X受体α(RXRα)及信号转导子和转录激动子(STAT-1)在β-淀粉样肽1～42(Aβ1～42)诱导大鼠海马神经元凋亡中的可能作用。方法以原代培养的大鼠海马神经元为模型,分为对照组和Aβ1～42组,加入不同浓度的凝聚态Aβ1～42,原位缺口末端标记法(TUNEL)观察凋亡细胞的形态;免疫细胞荧光方法检测凋亡细胞及IGFBP3、RXRα阳性细胞;免疫印迹法检测RXRα蛋白和STAT-1蛋白的表达水平。结果20μmol/LAβ1～42作用大鼠海马神经元24h能明显诱导神经元凋亡,表现为TUNEL/DAPI染色出现阳性细胞;20μmol/LAβ1～42作用大鼠海马神经元3～6h后IGFBP3阳性细胞、RXRα阳性细胞、RXRα蛋白的表达水平均较对照组有明显增高(P<0.01),在较高水平保持一段时间后逐渐下降;而STAT-1蛋白的表达水平则显著降低(P<0.01)。结论IGFBP3/RXRα或STAT-1信号转导通路可能在Aβ1～42诱导大鼠海马神经元凋亡中起一定作用。

活性维生素D通过STAT-1-TREM-1途径调控M1/M2巨噬细胞表型激活失衡缓解糖尿病肾病中的肾间质纤维化的机制

目的 探究活性维生素D通过信号转导和转录激活因子-1(STAT-1)-髓样细胞触发受体-1(TREM-1)途径调控M1/M2巨噬细胞表型激活失衡缓解糖尿病肾病中的肾间质纤维化的机制。方法 45只健康雄性SD大鼠随机数字表法分为对照组、DN模型组和VD治疗组,每组各15只。对照组为正常饲养大鼠,作为实验对照;DN模型组和VD治疗组均建立大鼠糖尿病模型;VD治疗组于糖尿病模型建立后,每日口服VD,剂量为0.1μg/kg。第18周处死大鼠。采集血样用于测量生化参数,并采集肾脏进行组织学检查和分子检测。通过蛋白印迹法检测STAT-1和p-STAT-1蛋白表达。通过自动生化分析仪对大鼠血糖、血尿素氮和血清肌酐进行分析。通过RT-PCR检测大鼠肾组织中Ⅰ型胶原蛋白和纤连蛋白的mRNA表达。通过免疫组织化学分析大鼠肾小球和肾间质CD68巨噬细胞浸润。通过蛋白印迹法分析大鼠肾组织CD163与CD68的蛋白表达。通过RT-PCR分析各组大鼠肾小球和间质内的巨噬细胞分泌的细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、Arg-1和MR的浓度。结果 DN模型组STAT-1和p-STAT-1蛋白表达较对照组升高,差异均有统计学意义(P <0.05);VD治疗组STAT-1和p-STAT-1蛋白表达较DN模型组降低,差异均有统计学意义(P <0.05)。DN模型组蛋白尿、血糖、血尿素氮和血清肌酐水平升高,差异均有统计学意义(P <0.05);VD治疗组蛋白尿、血尿素氮和血清肌酐水平较DN模型组降低,差异均有统计学意义(P <0.05)。DN模型组Ⅰ型胶原蛋白和纤连蛋白的mRNA表达较对照组升高,差异均有统计学意义(P <0.05);VD治疗组Ⅰ型胶原蛋白和纤连蛋白的mRNA表达较DN模型组降低,差异均有统计学意义(P <0.05)。DN模型组肾小球和肾间质巨噬细胞浸润较对照组增加,差异均有统计学意义(P <0.05);VD治疗组肾小球和肾间质巨噬细胞浸润较DN模型组减少,差异均有统计学意义(P <0.05)。DN模型组CD163蛋白表达和CD163/CD68比率较对照组均降低,CD68较对照组升高,差异均有统计学意义(P <0.05);VD治疗组CD163蛋白表达和CD163/CD68比率较DN模型组升高,CD68较DN模型组降低,差异均有统计学意义(P <0.05)。DN模型组TNF-α和iNOS mRNA表达较对照组均升高,Arg-1和MR mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P <0.05);VD治疗组TNF-α和iNOS mRNA表达较DN模型组降低升高,Arg-1和MR mRNA表达升高,差异均有统计学意义(P <0.05)。结论 VD通过STAT-1-TREM-1途径调控M1/M2巨噬细胞表型,改善链脲菌素诱导的DN大鼠肾间质纤维化。

血红素加氧酶-1通过诱导抗病毒蛋白的表达增强IFN-α抗HBV效应

目的探讨血红素加氧酶-1(HO-1)对HBV复制的作用及HO-1联合α-干扰素(IFN-α)的抗病毒效应。方法以HepG2.2.15细胞和HBV 1.3质粒转染HepG2细胞即HepG2-HBV1.3为HBV复制细胞模型;血红素(Hemin)分别处理HepG2.2.15和HepG2-HBV1.3细胞,诱导HO-1表达;CCK-8评估Hemin对HepG2、HepG2.2.15的毒性作用;化学发光法分析Hemin处理组及si-HO-1等实验组上清液中HBsAg、HBeAg;RT-qPCR分析HO-1、IFN-β、HBV-DNA;Western blot分析IRF-3、JAK/STAT信号通路中相关分子的表达;Hemin联合IFN-α处理HepG2.2.15,监测HO-1是否具有协同IFN-α抗病毒效应。结果Hemin剂量依赖性诱导HO-1,HO-1被诱导后发挥显著的抗HBV效应,同时IFN-β、IRF-3及JAK/STAT信号通路中IRF-9、MxA的表达均增加。沉默HO-1表达能逆转Hemin诱导组的抗病毒效应,同时I型干扰素IFN-β也呈现低表达,JAK/STAT信号通路中的IRF-9、MxA的表达也被抑制。Hemin联合IFN-α发挥更强的抗病毒作用。结论HO-1能够发挥抗HBV效应,这种效应可能是增加IRF-3的磷酸化诱导I型干扰素表达来激活JAK/STAT信号通路发挥抗病毒效应;HO-1可以协同IFN-α发挥抗病毒作用。

肥厚心肌细胞STAT-3与Beclin-1表达水平改变的研究

目的研究心肌细胞肥厚时STAT-3与Beclin-1表达水平改变的情况,探索STAT-3和Beclin-1表达异常在心肌肥厚的发生、发展中的意义。方法心肌肥大模型的建立:实验组用异丙肾上腺素(isoproternol,ISO)(10μmol/L)和去氧肾上腺素(phenylephrine,PE)(100μmol/L)分别干预H9c2心肌细胞48 h;对照组不加药,定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测MYH7基因的表达,细胞免疫荧光染色后,利用图像软件计算细胞大小。细胞实验验证:实验组用ISO(10μmol/L)与PE(100μmol/L)分别处理H9c2心肌细胞48 h;对照组不加药,定量PCR检测STAT-3与Beclin-1的基因表达水平,Western blot检测STAT-3与Beclin-1的蛋白表达水平。结果经ISO与PE处理的H9c2心肌细胞的MYH7基因表达水平升高(P<0.005),细胞表面积增大(P<0.001)。ISO干预组STAT-3、Beclin-1的基因表达水平及蛋白水平均比对照组显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。PE干预组的STAT-3、Beclin-1的基因表达水平及蛋白表达水平均比对照组显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论本实验发现经ISO或PE处理所致的肥厚心肌细胞中,STAT-3与Beclin-1的基因表达和蛋白表达水平显著升高,提示STAT-3和Beclin-1的表达异常参与了心肌肥厚发生、发展,这一结果为寻找心肌肥厚治疗新靶点提供一定的线索。

杨梅素调节JAK-STAT-IRF1信号通路对鼻咽癌细胞免疫逃逸的影响

目的探讨杨梅素对鼻咽癌细胞免疫逃逸的影响及对JAK-STAT-IRF1信号通路的调节作用。方法体外实验:培养人鼻咽癌CNE1细胞并分为对照组、杨梅素L组、杨梅素M组、杨梅素H组和杨梅素H+Broussonin E组,MTT法检测细胞增殖能力;Hoechst法检细胞凋亡;蛋白免疫印迹(Western blot)技术验证细胞叉头样转录因子3(Foxp3)、维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)、磷酸化(p)-Janus激酶(JAK)1、JAK1、p-JAK2、JAK2、p-信号转导与转录激活子(STAT)1、STAT1、干扰素调节因子1(IRF1)蛋白表达。体内实验:建立BALB/c裸鼠鼻咽癌模型,随机分为模型组、杨梅素低剂量组、杨梅素中剂量组、杨梅素高剂量组和紫杉醇组,取瘤体并称重,流式细胞术检测巨噬细胞程序性死亡受体1配体(PD-L1)表达,Western blot法检测瘤体Foxp3、RORγt、p-JAK1、JAK1、p-JAK2、JAK2、p-STAT1、STAT1、IRF1蛋白表达。结果与对照组相比,杨梅素L、M、H组CNE1细胞增殖能力以及RORγt、p-JAK1/JAK1、p-JAK2/JAK2、p-STAT1/STAT1、IRF1蛋白表达降低,细胞凋亡率和Foxp3蛋白表达增加(P<0.05);与杨梅素H组相比,杨梅素H+Broussonin E组细胞增殖能力以及RORγt、p-JAK1/JAK1、p-JAK2/JAK2、p-STAT1/STAT1、IRF1蛋白表达升高,细胞凋亡率和Foxp3蛋白表达减少(P<0.05);与模型组对比,杨梅素低、中、高剂量组Foxp3蛋白表达增加,瘤体质量以及PD-L1、RORγt、p-JAK1/JAK1、p-JAK2/JAK2、p-STAT1/STAT1、IRF1蛋白表达减少(P<0.05)。结论杨梅素可能通过抑制JAK-STAT-IRF1信号通路的激活抑制鼻咽癌细胞免疫逃逸。

草黄口蘑多糖对S180荷瘤小鼠抗肿瘤活性分子机制研究

多糖作为口蘑属真菌的主要功能成分之一,具有免疫调节、抗氧化及抗肿瘤等活性。为明确草黄口蘑多糖的结构特征及其对S180荷瘤小鼠抗肿瘤活性相关分子机制,该研究以草黄口蘑子实体经热水浸提法提取的草黄口蘑多糖[Tricholoma lascivum (Fr.)Gillet polysaccharide,TLG-1]为实验材料,初步解析TLG-1结构,以S180荷瘤小鼠为模型检测体内抗肿瘤活性,并采用转录组测序技术对S180肿瘤组织总RNA进行测序分析。结果表明,TLG-1重均分子质量为13 442 Da,由木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖4种单糖组成,其比例为1.57∶1.45∶2.84∶4.14。TLG-1可显著抑制荷瘤小鼠S180肿瘤的生长(P<0.01),抑瘤率为53.8%。转录组测序分析显示,TLG-1能显著上调mt-Co1、Prlr、Foxa1以及下调Pitx2、Rplp1、Eef1a1及Lgals1等基因,影响S180肿瘤细胞的代谢途径,调控细胞周期并抑制上皮间质转化过程。基因本体富集分析表明,TLG-1可激活细胞因子介导的信号通路,引发细胞免疫。京都基因与基因组百科全书富集分析显示,在Jak-STAT信号通路中的Il21、Il12rb2、Il12b、Il2ra、Il2rb、Il2rg、Il15ra和Ifng等基因显著上调,通过转换肿瘤相关巨噬细胞表型及分泌干扰素-γ等,增强小鼠抗肿瘤免疫应答。该研究结果为草黄口蘑多糖的开发和利用提供了一定的理论基础。

STAT-3与Enolase-1在乳腺癌组织中的表达及意义

目的探讨乳腺癌组织中信号转导及转录活化因子3(STAT-3)和糖酵解酶烯醇化酶(Enolase-1)的表达与雌孕激素受体、淋巴结转移、临床分期、病理分级等的关系。方法免疫组织化学SP法检测126例乳腺癌和26例乳腺良性病变组织中STAT-3与Enolase-1的表达情况,并分析他们与临床病理参数之间的关系。结果乳腺癌组织中STAT-3和Enolase-1的阳性表达率分别为82.5%和77.8%,明显高于乳腺良性病变组织(11.5%和7.7%),差异均有统计学意义(χ2=42.416,P<0.05;χ2=57.211,P<0.05);在有淋巴结转移的乳腺癌组织中阳性表达率分别为85.7%和90.5%,高于无淋巴结转移组,差异均有统计学意义(χ2=9.184,P<0.05;χ2=11.014,P<0.05)。相关分析表明STAT-3和Enolase-1的表达呈正相关。在雌激素受体阳性(ER+)和/或孕激素受体阳性(PR+)或表皮生长因子受体2阳性(HER-2+)乳腺癌组织中,有淋巴结转移组中STAT-3和Enolase-1的表达水平均明显高于无淋巴结转移组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 STAT-3与Enolase-1的表达与乳腺癌的发生发展及侵袭转移相关,且二者有协同作用(r=0.379,P<0.05)。在ER+和(或)PR+或HER-2+乳腺癌组织中,STAT-3和Enolase-1的高表达与淋巴结转移相关。在高表达STAT-3的乳腺癌组织中Enolase-1表达也较高,其联合检测可作为判断乳腺癌恶性程度、评价预后及指导治疗的一项评估指标。

TRX-1和STAT-3在结直肠癌组织中的表达及相关性研究

目的检测人结直肠癌组织中TRX-1和STAT-3的表达,探讨二者之间的相关性。方法用免疫组织化学法分别检测60例结直肠癌和22例远癌正常大肠黏膜中TRX-1和STAT-3的表达情况,并结合临床资料,对其进行分析。结果 TRX-1和STAT-3均定位于细胞质和细胞核,TRX-1在结直肠癌与正常大肠黏膜组织阳性率分别为78.33%与31.82%(免疫组化染色平均评分分别为4.03±1.92和1.42±1.20),二者间差异有统计学意义(P<0.01);STAT-3在结直肠癌与正常大肠黏膜组织的阳性率分别为65.00%与27.27%(免疫组化染色平均评分分别为3.34±1.81和1.26±1.19),二者间差异有统计学意义(P<0.01)。TRX-1与STAT-3在低分化癌中比高分化者表达增强;二者的表达与淋巴结转移和TNM分级密切相关(P<0.05或P<0.01)。TRX-1和STAT-3在结直肠癌中的表达呈正相关(r=0.964,P<0.01)。结论 Trx-1和STAT-3在结直肠癌组织中过度表达,并与其发生发展有关,二者可能参与了结直肠癌恶化的调控。

HO-1在缺血后处理抗肺缺血再灌注损伤中的作用及其对STAT-3表达的影响

目的研究血红素加氧酶-1(hemeoxygenase-1,HO-1)在缺血后处理(ischemic postconditioning,IPO)抗肺缺血再灌注损伤中的作用机制及其对STAT-3蛋白表达的影响。方法 40只SD雄性大鼠(250-280 g)随机分为假手术组(S)、缺血再灌注组(IR)、缺血后处理组(IPO)及缺血后处理+HO-1抑制剂组(IPO+ZnPP)。称重法计算缺血肺组织干/湿比(W/D),试剂盒检测缺血肺组织MDA水平及MPO与HO-1活性,Western Blot检测HO-1,p-STAT-3蛋白表达水平。结果与S组比较,IR组大鼠W/D、MDA、MPO、HO-1活性及蛋白表达水平均显著增加,而p-STAT-3蛋白表达水平显著降低,IPO可以逆转上述变化,而HO-1特异性抑制剂可以消除IPO对上述指标的影响。结论 IPO可以通过促进HO-1活性及蛋白表达的增加从而激活STAT-3信号通路而发挥抗肺缺血再灌注损伤作用。

氟化钠对心肌细胞LC-3、Beclin-1、STAT-3表达的影响

目的:观察氟化钠对大鼠心肌细胞中自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3(LC-3)、哺乳动物ATG6同源蛋白(Beclin-1)、信号转导与转录激活因子3(STAT-3)基因表达的影响。方法:将大鼠H9c2心肌细胞加入不同浓度氟化钠(NaF)的培养基,培养48 h后提取心肌细胞的RNA,RT-PCR法比较各组心肌细胞中LC-3、STAT-3、Beclin-1 mRNA的表达情况。结果:48 h后,与对照组相比,加入2.5 mg/L、5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L NaF的心肌细胞中LC-3、Beclin-1的表达量明显增高(P<0.05),STAT-3相对表达量降低(P<0.05)。结论:心肌细胞LC-3和Beclin-1 mRNA表达量随NaF浓度的增加而增加,STAT-3 mRNA表达量随NaF浓度的增加而减少,提示氟中毒导致心肌细胞活力降低可能与自噬的过度激活有关。

慢性脑缺血对信号转导和转录激活因子-1的表达

目的探讨慢性脑缺血大鼠大脑皮质及海马STAT-1的变化。方法采用免疫组织化学和激光共聚焦方法观察慢性脑缺血大鼠脑组织STAT-1蛋白表达变化。结果STAT-1免疫反应阳性细胞在正常和假手术大鼠脑内有少量表达;缺血30d组,STAT-1蛋白阳性细胞广泛分布于皮层及海马,细胞数量明显多于非缺血组,差异有统计学意义(P<0·05)。结论STAT-1可能参与慢性脑缺血大鼠神经细胞死亡的诱导。

大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后STAT_1蛋白表达的研究

目的探讨ＳＴＡＴ１基因在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的表达及其在缺血性神经元损伤中可能的作用。方法采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，用免疫组化方法观察ＳＴＡＴ１蛋白在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后不同时间点脑组织中的表达。结果ＳＴＡＴ１蛋白在脑缺血６０ｍｉｎ再灌注２４ｈ后呈阳性表达，半暗带损伤区表达最显著，表达持续时间达１周。

干扰素-α诱导HepG2 2.2.15细胞APOBEC3G的表达及其机制

目的探讨干扰素（IFN）-α刺激HepG2 2．2．15细胞后，对载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽样3G（apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide-like 3G，APOBEC3G）表达的影响，以及初步探讨Janus激酶-信号传导和转录激活子OAK—STAT）信号通道是否参与APOBEC3G基因转录调控。方法对HepG2 2．2．15细胞给予不同剂量（0、1、10^1、10^2、10^3、10^4 U／mL）IFN-α刺激8h时，以及10^3 U／mL IFN-α刺激2、4、6、8、10、12h时，收集细胞或培养上清液。应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blot检测HepG22．2．15细胞APOBEC3G、STAT-1 mRNA及蛋白的表达水平。应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养上清液中乙型肝炎表面抗原与e抗原（HBsAg与HBeAg）水平，应用实时荧光定量PCR及RT-PCR分别检测上清液中HBVDNA水平以及细胞中HBVmRNA水平。结果无IFN-α（0 U／mL）刺激时，HepGa2．2．15细胞APOBEC3G表达水平很低。随着IFN-a浓度的升高，APOBEC3GmRNA及蛋白水平逐步升高，IFN-α浓度为10^4 U／mL时，APOBEC3G表达量最高，并且STAT-1分子mRNA及蛋白的表达量亦逐步升高，与APOBEC3G表达量呈现平行相关。随着IFN-a刺激时间的延长，APOBEC3G表达量明显升高，8h时达到最高，其后逐渐下降。10^4 U／mL IFN-α刺激8h时，HepG2 2．2．15细胞培养上清液中HBsAg、HBeAg、HBVDNA及细胞中HBVmR-NA水平均明显低于无IFN-α刺激的HepG22．2．15细胞。结论WN-a能诱导HepG22．2．15细胞表达APO—BEC3G，在一定范围内，APOBEC3G的表达与IFN—d的剂量、作用时间呈正相关；IFN-α诱导APOBEC3G的表达可能是其发挥抗病毒作用的机制之一；IFN-α是否经JAK-STAT信号通道刺激APOBEC3G的表达，二者之间的关系及其机制尚待进一步研究。