水牛STAT1基因多态与产奶性状关联分析

本研究旨在检测水牛STAT1基因的单核苷酸多态性(SNP),探究中国水牛多态性位点的群体遗传特征,寻找与产奶性状相关的分子标记。采用PCR和测序法筛选水牛STAT1基因序列的SNPs,以357头水牛为研究对象,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF-MS)对群体进行了基因型检测,运用SAS(9.3)软件一般线性模型(GLM)对STAT1基因型与产奶性状的关联程度进行统计分析。结果表明,在水牛STAT1基因中检测出3个突变位点,分别位于5′UTR(g.68G>A)、外显子10(g.986G>T)和3′UTR(g.2881C>A)。关联分析结果显示,水牛STAT1基因g.986G>T位点与305天产奶量和乳脂率显著关联(P<0.05)。Bonferroni t检验多重比较结果显示,基因型TT和GG个体的305天产奶量显著高于GT基因型(P<0.05),基因型TT个体的乳脂率显著高于GG和GT基因型(P<0.05),且305天的产奶量随着胎次的增加呈现上升趋势,直到第3或4胎次时达到最大值,表明胎次是影响水牛产奶量的重要环境因素之一。本研究表明,水牛STAT1基因的g.986G>T位点可能是影响其产奶性状的候选分子遗传标记,为今后建立中国水牛标记辅助选择育种研究奠定基础。

STAT1基因单核苷酸多态性与中国荷斯坦奶牛产奶性状的相关性研究

采用PCR-SSCP方法检测199头中国荷斯坦奶牛STAT1基因内含子11、19、25及3-′UTR 4个位点的单核苷酸多态性,并将其与3个胎次的产奶性状进行相关性分析。结果在内含子11和3-′UTR 2个位点发现多态性,在内含子11中发现2个单核苷酸连锁突变,分别为28739碱基处发生的G→A转换,28873碱基处发生的G→C颠换;在3-′UTR 141930碱基处发现C→T突变。利用最小二乘分析研究3个位点不同基因型对中国荷斯坦奶牛3个胎次305天产奶量,乳脂率及乳蛋白率的影响。结果表明,在内含子11中,BB基因型个体第一、二胎次乳蛋白率均显著高于AA和AB基因型个体(P<0.05);3种基因型对各胎次产奶量及乳脂率的影响均未达到显著水平(P>0.05),但呈现出BB>AB>AA的趋势。在3-′UTR中,CC、CT基因型个体的第一、二胎次产奶量均显著高于TT基因型个体(P<0.05);CC基因型个体的第一、三胎次乳蛋白率均显著高于TT基因型个体(P<0.05),3种基因型对3个胎次乳脂率的影响差异均不显著(P>0.05),但呈现出CC>CT>TT的趋势。

针对人STAT1基因的RNA干扰有效靶点的设计与筛选

目的:设计并筛选针对人STAT1基因有效的RNA干扰靶点。方法:根据人STAT1基因序列,设计3个干扰序列,将oligo退火成双链并连接穿梭载体pLKO-1-EGFP-puro-shRNA,构建shRNA慢病毒载体质粒,并转化至感受态细胞DH5a,进行测序验证。在脂质体介导下转染293T细胞,包装生产慢病毒。慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L的STAT1过表达瘤株(MHCC97L-stat1),用Real-timePCR检测干扰效果。结果:测序证实3个STAT1基因RNAi病毒载体质粒构建成功;慢病毒载体经293T细胞包装成功;3个慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L-stat1瘤株48h后,STAT1基因在mRNA水平表达均受到抑制,其中MHCC9-L-stat1-shRNA-1序列效果最佳,对STAT1基因表达的干扰效率可达81.4%。结论:成功构建并筛选了人STAT1基因RNAi慢病毒载体及有效靶点,为进一步深入研究STAT1基因与抗肿瘤药物药效关系奠定基础。

STAT1基因转染对人肺腺癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的:探讨信号转导和转录活化因子1(signal transduction and activators of tran-scription 1,STAT1)基因转染对肺癌移植瘤生长的影响。方法:构建稳定转染STAT1基因(转染组)及空载体(空载体组)的肺腺癌NCL-H1299细胞,使用未转染的细胞及上述两种转染细胞分别建立裸鼠皮下移植瘤模型,连续观察并测量肿瘤生长情况,Western blot法检测肿瘤组织内STAT1活化情况。结果:STAT1基因转染组裸鼠移植瘤接种33 d后瘤体积及瘤重小于未转染组及空载体组(均P<0.05)。Westernblot检测结果提示STAT1转染组的肿瘤组织STAT1表达及磷酸化水平均明显升高。结论:STAT1基因转染可提高移植瘤组织内STAT1活化水平,并对肿瘤生长起抑制作用。

STAT1基因功能获得性突变致慢性皮肤黏膜念珠菌病继发噬血细胞性淋巴组织细胞增多症1例

慢性皮肤黏膜念珠菌病的疾病特征为指甲、皮肤、口腔和生殖道黏膜的反复或持续白色念珠菌感染,本病临床较少见。本病例患儿主要表现为反复口腔念珠菌病、低体重、生长迟缓,入院查体提示肝、脾、淋巴结肿大,化验提示血三系偏低、低纤维蛋白原血症、高甘油三酯血症、高铁蛋白、NK细胞活性低,骨髓涂片提示噬血性细胞可见,静脉血宏基因组二代测序、血培养、骨髓培养均提示白色念珠菌感染。患儿全外显子测序发现STAT1基因杂合错义变异c.1154C>T(p.Thr385Met),为自发变异。诊断为STAT1基因功能获得性突变致慢性皮肤黏膜念珠菌病继发噬血细胞性淋巴组织细胞增多症。先后予卡泊芬净、氟康唑抗感染治疗,住院治疗5周后出院,随访1年余未见复发及后遗症。

STAT1基因突变引起的原发性免疫缺陷病研究进展

信号传导及转录激活因子(signal transducersand activators of transcription,STAT)1基因突变引起的原发性免疫缺陷病分为4型,分别为常染色体显性(autosomal dominant,AD)遗传的STAT1功能获得性(gain-of-function,GOF)免疫缺陷和功能缺失性(loss-of-function,LOF)免疫缺陷,以及常染色体隐性(autosomal recessive,AR)遗传的STAT1部分LOF免疫缺陷和STAT1完全LOF免疫缺陷。

STAT1干扰慢病毒载体的构建及其基因沉默效应测定

目的 :构建STAT1基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体并测定其基因沉默效应。方法 :根据人STAT1基因序列,设计干扰序列,将Oligo退火成双链并连接穿梭载体p LKO-1-EGFP-puro-sh RNA,构建sh RNA慢病毒载体质粒,并转化至感受态细胞DH5α,进行测序验证。在脂质体介导下转染293T细胞,包装生产慢病毒。慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L的STAT1过表达瘤株(MHCC97L-stat1),用Real-time PCR和Western Blot检测RNAi组(MHCC97L-stat1-sh RNA-1)和对照组(MHCC97L-stat1)中STAT1基因的表达情况,确定其干扰STAT1表达的有效性。结果:测序证实慢STAT1基因RNAi病毒载体质粒构建成功;慢病毒载体经293T细胞包装成功;慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L-stat1瘤株48 h后,STAT1基因在m RNA水平和蛋白质水平上表达明显降低。结论:STAT1基因RNAi慢病毒载体构建成功,能够在人肝癌细胞MHCC97L-stat1瘤株中表达,并具有显著的基因沉默效果。

STAT1基因在外周血细胞中的异常表达与系统性红斑狼疮疾病活动性的相关分析

系统性红斑狼疮（SLE）是一种多基因遗传病，众多致病相关基因在自身免疫反应的诱导、活化或效应阶段起作用。近年来研究表明，干扰素（IFN）家族及其免疫调控通路在系统性红斑狼疮（SLE）的发病中扮演重要角色。基因芯片技术发现，存人SLE外周血细胞中有多个干扰素诱导基因（IFIG）的高表达，在SLE患者的滑膜组织中IFIG也呈高表达而细胞外基质稳态相关基因呈低表达。

STAT1基因与脑胶质瘤的研究进展

脑胶质瘤来源于神经上皮组织,是成人颅内最常见的恶性肿瘤,可占全部脑肿瘤的一半以上。信号转导和转录激活因子(Signal Transducer and Activator of Transcription,STATs)家族由STAT1、STAT2、STAT3、STAT4、STAT5a、STAT5b、STAT6七个成员组成,STAT1是第一个被发现的STATs家族成员,研究表明STAT1是一种肿瘤抑制因子,可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,其活性下降或缺失可导致恶性肿瘤的发生。本文就STAT1的结构和功能,以及在胶质瘤发生、发展和治疗中的研究进展作一综述。

STAT1基因突变相关原发性免疫缺陷病

STAT1是细胞多种信号传导途径相交叉的枢纽，STAT1基因突变导致的原发性免疫缺陷病分为四类：（1）常染色体隐性遗传STAT1完全缺陷；（2）常染色体隐性遗传STAT1部分缺陷；（3）常染色体显性遗传STAT1缺陷；（4）常染色体显性遗传STATI功能增强性突变。其中前三种疾病发病机制主要与IFN-γ、IFN-α/β信号通路受损有关，而最后一种疾病发病机制可能与IFN-α/β信号通路增强有关。该文就STAT1基因突变相关原发性免疫缺陷病的发病机制、临床表现及诊断治疗进行综述。

大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后STAT_1蛋白表达的研究

目的探讨ＳＴＡＴ１基因在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的表达及其在缺血性神经元损伤中可能的作用。方法采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，用免疫组化方法观察ＳＴＡＴ１蛋白在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后不同时间点脑组织中的表达。结果ＳＴＡＴ１蛋白在脑缺血６０ｍｉｎ再灌注２４ｈ后呈阳性表达，半暗带损伤区表达最显著，表达持续时间达１周。

STAT1过表达慢病毒载体的构建及其在MHCC97L细胞中的表达

目的:构建STAT1基因过表达慢病毒载体并实现其在人肝癌细胞MHCC97L中的表达。方法:根据人STAT1基因mRNA序列,全基因合成STAT1基因,构建至过表达载体并转化至感受态细胞DH5α,进行测序验证。在脂质体介导下转染293T细胞,包装生产慢病毒。慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L,用荧光定量PCR和Western blot检测原始细胞株(MHCC97L),稳转细胞株(MHCC97-stat1)中STAT1的表达情况,确定STAT1过表达的有效性。结果:测序证实STAT1基因过表达载体构建成功。过表达慢病毒包装成功。慢病毒转染人肝癌细胞MHCC97L 48 h后,STAT1基因在mRNA水平和蛋白质水平上表达显著增加。结论:STAT1基因过表达慢病毒载体构建成功,并实现其在人肝癌细胞MHCC97L中的表达。

STAT1特异性siRNA真核表达载体的构建及体外转染优化

目的:构建STAT1特异性siRNA真核表达载体,并转染人气道上皮细胞(16HBE)。方法:根据GeneBank数据库提供的STAT1基因两种变异体的共同核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计双链siRNA,再转化为能表达其小发卡结构RNA(small hairpin RNA,shRNA)的DNA序列,并将其连接到带有卡那霉素抗性和增强绿色荧光蛋白的pGenesil-1.1真核表达载体上,将其转染至气道上皮(16HBE)细胞中,观察荧光表达,鉴定其转染效率。结果:通过酶切鉴定和序列测定,成功地构建了二条表达小干扰RNA的质粒及其阴性对照质粒,并成功转染到(16HBE)细胞株中,质粒/脂质体为1μg:2μl条件,能有效地转染细胞,转染效率达到50%以上。结论:成功构建siRNA真核表达载体并能成功体外转染,为下一步气道炎症性疾病的基因沉默研究奠定了良好的基础。

STAT1和STAT3在脑胶质瘤中作用的研究进展与展望

脑胶质瘤是常见的中枢神经系统肿瘤,约占颅内肿瘤半数以上。信号转导与转录激活因子(signal transducer and activator of transcription,STAT)是一种信号传导和转录活化因子蛋白,可以从各个角度调节细胞的生长、分化、存活和凋亡。STAT1目前被普遍认为是一种肿瘤抑制因子,而STAT3目前被定义为致癌基因。本文就STAT1和STAT3在脑胶质瘤发生发展中的作用及其潜在的交叉调控机制进行阐述,并期望共表达质粒STAT3-siRNA-STAT1可能为脑胶质瘤的治疗提供新思路。

'STAT 1基因对胶质瘤干细胞放疗敏感性的研究进展

脑胶质瘤是中枢神经系统中一种最常见的原发性恶性肿瘤,其发病率高,治疗复杂,5年生存率低,预后不佳。传统的治疗方法有手术,术后放疗、化疗以及综合治疗(包括靶向治疗、电场治疗)等手段,但由于受病变浸润生长以及放射抵抗性等因素影响,患者的远期预后差,5年生存率低。近年来,通过干细胞治疗来避免免疫系统对常规疗法的抵抗使得肿瘤治疗效果明显提高。STAT1是一种信号转导和转录激活因子蛋白,其在抑制细胞增殖,促进细胞凋亡过程中有重要作用。因此,可以通过调节基因表达来提高胶质瘤放疗敏感性进而改善胶质瘤患者预后,提高患者生存率,本文将综述STAT 1基因,胶质瘤干细胞相关的放疗抗性,胶质瘤放疗增敏手段以及通过STAT 1基因调高胶质瘤干细胞放疗敏感性研究的最新研究趋势。

HIV阴性儿童马尔尼菲篮状菌病2例临床分析并文献复习

目的总结2例人类免疫缺陷病毒(HIV)阴性儿童马尔尼菲篮状菌病(TSM)患儿的临床特征。方法分析某儿童医院收治的2例HIV阴性TSM患儿的临床特点及实验室资料、存在的基础疾病,并复习相关文献,总结TSM感染患儿的临床特征及诊治经验。结果2例HIV阴性TSM患儿中病例1以右下肢肿块为首发症状,1个月余后才出现发热及咳嗽,误诊为结核感染;病例2以发热、三系减少及肝脾、淋巴结大等表现起病。病例1行基因检测为STAT1基因突变,病例2有反复灰指甲及口腔溃疡病史,均行血、骨髓培养及淋巴结活检确诊。病例1先后予以伏立康唑、两性霉素B脂质体静脉滴注,伊曲康唑口服维持治疗,共治疗1年后停药;病例2一直予以伏立康唑治疗(先静脉滴注后口服),共7个月后停药,均无复发。结论TSM可发生在HIV阴性儿童,且可存在STAT1基因突变。对于治疗效果差的患儿,应尽早行培养或组织活检以明确诊断,并积极查找TSM可能存在的基础疾病,以到达早期诊断、早期治疗和改善预后的目的。