信号转导和转录活化因子-1在上皮性卵巢癌中的表达及其与预后的关系

目的:探讨信号转导和转录活化因子(signal transducer and activator of transcription,STAT)-1在上皮性卵巢癌组织中的表达及其与预后的关系。方法:应用显微切割法从石蜡切片标本中提取mRNA,实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)和免疫组织化学方法检测105例原发性卵巢上皮癌和29例正常卵巢组织中STAT-1 mRNA及蛋白的表达,并分析其蛋白表达与预后的相关性。结果:上皮性卵巢癌组织中STAT-1 mRNA的表达高于正常卵巢组织[(0.96±1.05)vs(0.46±0.57),P=0.032],但mRNA表达水平与卵巢癌的手术分期、病理分级以及生存时间无关(P>0.05);上皮性卵巢癌组织中STAT-1和P-STAT-1蛋白的阳性表达率分别为72.4%和71.9%,显著高于正常卵巢组织(P<0.05),但蛋白表达水平与病理分级和手术分期无明显相关性(P>0.05)。在行辅助泰素化疗的病例组中STAT-1和P-STAT-1蛋白高表达患者的预后较好,总的生存时间长于低表达患者(P<0.05);STAT-1蛋白高表达的卵巢癌患者无瘤生存时间明显长于低表达患者(P<0.01)。结论:STAT-1在上皮性卵巢癌中存在异常表达,与紫杉醇类药物化疗后的预后密切相关。STAT-1可能是抑制肿瘤细胞生长的关键因子之一。

转录因子STAT1两个亚型STAT1α和STAT1β高表达载体的构建及鉴定

目的利用高表达载体pLJM1-EGFP构建并鉴定转录因子STAT1基因的2个亚型STAT1α和STAT1β的过表达重组质粒(简称为pLJM1-STAT1α和pLJM1-STAT1β)。方法以大鼠肝脏cDNA为模板,PCR获取目的片段(即STAT1α和STAT1β);用AgeⅠ和EcoRⅠ双酶切pLJM1-EGFP表达载体和PCR扩增的STAT1α和STAT1β基因片段后,用T4DNA连接酶连接酶切纯化后的载体及目的基因片段;将连接产物转化DH5α大肠杆菌感受态细胞、挑选阳性克隆,并通过PCR、双酶切和DNA测序鉴定构建的重组质粒。结果 PCR和双酶切证实pLJM1-STAT1α和pLJM1-STAT1β重组载体中分别成功插入了STAT1α和STAT1β基因片段。DNA测序结果表明插入的STAT1α和STAT1β基因片段的序列完全正确。结论成功构建了pLJM1-STAT1α和pLJM1-STAT1β高表达重组载体。

丹参素对STAT1、PPARγ和HGF在糖尿病小鼠肝脏中表达的影响

目的观察丹参素对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病小鼠肝脏组织中信号转导和转录活化因子1(STAT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)以及肝细胞生长因子(HGF)表达的影响,探讨其对糖尿病小鼠肝脏保护作用的机制。方法 60只健康雄性C57BL/6小鼠中随机选取10只作为正常对照组,剩余50只小鼠按200 mg/kg一次性腹腔注射STZ 500mg,72 h后尾尖取血测空腹血糖,血糖值大于20 mmol/L为糖尿病小鼠。40只糖尿病小鼠随机分为糖尿病模型组,丹参素低剂量组(15 mg/kg)、中剂量组(30 mg/kg)、高剂量组(60 mg/kg)。丹参素组小鼠1次/d灌胃给药,连续给药12周,末次给药12 h后检测空腹血糖、胰岛素、糖基化血红蛋白(GHb)的水平,及天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)水平。用蛋白质印迹分析法检测小鼠肝脏组织中STAT1、PPARγ和HGF蛋白的表达。结果 (1)与正常对照组相比,糖尿病模型组及丹参素组的血糖及GHb水平均增高(P<0.01),胰岛素水平降低(P<0.01),丹参素各剂量组间血糖、胰岛素及GHb水平差异无统计学意义。(2)糖尿病模型组血清AST、ALT水平较正常对照组升高(P<0.05);丹参素组血清AST、ALT水平较糖尿病模型组下降(P<0.05);丹参素各剂量组间AST、ALT水平差异无统计学意义。(3)糖尿病模型组小鼠肝组织中STAT1表达高于正常对照组(P<0.01),而PPARγ和HGF的表达则降低(P<0.01);与糖尿病模型组比较,丹参素组的小鼠肝脏组织中PPARγ和HGF的表达上调(P<0.01),STAT1表达减少(P<0.01),且呈剂量依赖性。结论丹参素对糖尿病肝损害的保护作用可能与上调糖尿病小鼠肝脏组织中PPARγ和HGF的表达,抑制STAT1介导的炎症反应有关。

基于PPARγ/STAT1通路探讨映山红花总黄酮对川崎病小鼠冠状动脉炎症及心肌损伤的影响

目的:观察映山红花总黄酮(TFR)对川崎病(KD)小鼠冠状动脉炎症的抑制及心肌损伤的影响。方法:选取48只BALB/C雄性小鼠腹腔注射1 mg/mL的干酪乳酸杆菌建立KD小鼠模型。将造模成功小鼠随机分为模型组、TFR低剂量(50 mg/kg)组、TFR高剂量(100 mg/kg)组、西药(阿司匹林250 mg/kg)组,各12只;另设对照组(12只)。给药期间,观察小鼠饮食、体质量等一般情况。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组小鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肌红蛋白(Mb)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察冠状动脉组织病理学变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测小鼠冠状动脉组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、信号传导和转录激活因子1(STAT1)mRNA及蛋白表达情况。结果:与模型组比较,TFR低剂量组、TFR高剂量组和西药组小鼠体质量增加,血清TNF-α、IL-1β、IL-6、Mb、CK、CK-MB、PPARγ和STAT1 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05)。与TFR低剂量组比较,TFR高剂量组和西药组小鼠体质量增加,血清TNF-α、IL-1β、IL-6、Mb、CK、CK-MB、PPARγ和STAT1 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:TFR可调节KD小鼠炎性因子水平,减轻冠状动脉炎症反应,一定程度改善心肌损伤,可能与PPARγ/STAT1信号通路有关。

STAT1与STAT3在肝细胞癌及肝衰竭发病机制中的作用

肝细胞癌(HCC)及肝衰竭为我国常见的肝脏疾病,其发病率及病死率极高,相关研究虽多但具体发病机制仍不详。通过介绍STAT1及STAT3磷酸化蛋白在HCC及肝衰竭发病机制中的多种作用,如:抗病毒防御、急性期反应、肝损伤、修复、炎症、转化等,了解其在HCC及肝衰竭发病机制中的具体作用,并以其为分子靶标研制相关药物,应用于临床,对于降低患者病死率具有重要意义。

血清STAT1和肿瘤标志物联合检测对胃癌的诊断价值

目的检测胃癌患者血清信号传导及转录激活因子1(STAT1)和传统肿瘤标志物的表达,探讨血清STAT1与肿瘤标志物的联合检测对胃癌的诊断价值。方法选择83例胃癌患者(胃癌组),其中男性51例,女性32例;年龄32~74岁,平均年龄60.02岁。同期40例胃良性溃疡患者(溃疡组),其中男性24例,女性16例;年龄35~68岁,平均年龄58.85岁。40例健康志愿者(正常对照组),其中男性21例,女性19例;年龄35~65岁,平均年龄58.75岁。取其血清标本,应用酶联免疫吸附分析(ELISA)方法检测STAT1的表达,并检测肿瘤标志物[癌胚抗原(CEA)、糖类抗原(CA)19-9、CA72-4、CA50、甲胎蛋白(AFP)]的表达,比较不同分期胃癌患者STAT1和肿瘤标志物的表达。结果胃癌组血清STAT1平均浓度(66.38±48.72)μg/L,显著低于溃疡组[(120.98±52.26)μg/L](P=0.000)和正常对照组[(93.15±36.92)μg/L](P=0.006)。STAT1+5项肿瘤标志物联合检测可提高灵敏度(42.17%vs 34.94%)(P=0.028),特异度差异无统计学意义(77.50%vs 83.75%)(P=0.257)。血清STAT1在胃癌各期患者中的灵敏度差异无统计学意义(P=0.923)。结论血清STAT1的表达与胃癌的发病密切相关,可作为传统肿瘤标志物的补充,对胃癌的早期诊断有积极意义。

维甲酸促进小鼠F9细胞中STAT1的反式激活作用

维甲酸能促进肿瘤细胞的凋亡,诱导体外胚胎干细胞的分化,但作用机制的不明使其应用受到极大限制.因此,更多更全面地了解维甲酸的作用机制具有重要意义.本文构建了信号传导与转录激活因子(STAT1和STAT3)的真核表达载体,通过免疫荧光染色、电泳迁移率实验以及双荧光素酶报告基因检测系统证明,维甲酸诱导可以激活转录因子STAT1促使其进入细胞核,并且增强STAT1蛋白与靶基因启动子的结合能力,从而发挥基因表达调控作用.本文结合后续的STAT1功能分析,试图建立起一种"维甲酸-转录因子-靶基因"的研究模式,有助于维甲酸作用机制的全面、系统的研究.这为临床上使用维甲酸作为抗肿瘤药提供理论基础,同时也为胚胎干细胞多能性调控机制研究提供新思路.

沉默STAT1对肠道病毒71型感染THP-1细胞的初步探讨

目的探讨EV71感染对THP-1细胞内转录因子STAT1、ISGs及STAT1基因敲减对ISGs和EV71复制变化的影响。方法采用实时荧光定量(qRT-PCR)法检测EV71感染人单核巨噬细胞(THP-1)后4种干扰素刺激基因ISG15、ISG56、OAS1、MXA的mRNA水平和IFN-β的产生,并采用Westernblot分析转录因子STAT1磷酸化水平,利用慢病毒介导的特异性STAT1短发卡RNA干扰THP-1细胞STAT1的表达,观察STAT1基因沉默对4种干扰素刺激基因及EV71/VP1表达水平的影响。结果EV71感染THP-1细胞后,IFN-βmRNA的相对表达量上调,并刺激了MXA、OAS1、ISG56mRNA的表达和STAT1的磷酸化水平。慢病毒介导的shRNA-STAT1基因沉默后,与con-shRNA-STAT1组比,STAT1总蛋白及其磷酸化水平表达下降,MXA、OAS1、ISG56mRNA的表达量及EV71/VP1蛋白的表达水平降低。结论STAT1基因沉默抑制EV71感染THP-1细胞内STAT1的磷酸化和ISGs的转录,并抑制EV71的感染。

STAT1功能获得性突变3例临床特点及基因分析

目的探讨3例慢性皮肤黏膜念珠菌病伴有自身免疫性疾病的信号传导与转录激活因子1(signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)功能获得性突变(gain-of-function,GOF)的临床特征及基因特点。方法选取就诊阜阳市人民医院儿科的3例确诊为STAT1 GOF的患儿,对其临床特征进行分析总结,采集外周血样,运用高通量测序(high-throughput sequencing,NGS)进行基因检测,并同时进行父母的基因组DNA测序。结果3例患者均出现慢性皮肤黏膜念珠菌病、支气管扩张,并且伴有不同类型的自身免疫性疾病,基因检测证实均存在STAT1基因突变,有不同的突变位点,3个突变均属功能获得性突变,而父母基因均正常,为新发错义变异。结论STAT1 GOF新发突变易导致慢性皮肤黏膜念珠菌病合并自身免疫性疾病,并且在病程的不同时期STAT1基因突变可能伴随不同的自身免疫性疾病的表现,需定期观察,完善相关基因检测有助于早期诊断,避免漏诊及误诊。

新生儿常染色体隐性遗传信号传导及转录激活因子1基因功能完全缺陷病1例

本文回顾性分析2021年11月温州医科大学附属第二医院(育英儿童医院)新生儿科收治的1例经全外显子组测序检测确诊常染色体隐性遗传信号传导及转录激活因子(signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)基因功能完全缺陷病患儿的临床病例资料。患儿男,生后第2天接种卡介苗,第21天出现持续发热、白细胞计数、C-反应蛋白升高,血液、骨髓均检测出人巨细胞病毒,经抗病毒、抗生素、静脉注射丙种球蛋白等治疗后好转,出院后口服抗病毒药物。生后第55天患儿再次因发热住院,血液病原微生物检测出人巨细胞病毒、结核分枝杆菌复合群。住院期间经治疗后高热不退,转诊至复旦大学附属儿科医院。经积极治疗,患儿感染仍加重,并出现多器官功能衰竭,家属放弃治疗后患儿于生后69 d死亡。患儿经全外显子组测序检测为STAT1基因纯合变异,染色体位置:chr2:191855978,基因变异信息:NM_007315:exon11:c.1011_1012del(p.V339Pfs*18),诊断为常染色体隐性遗传STAT1基因功能完全缺陷病。常染色体隐性遗传STAT1基因功能完全缺陷病临床表现为致死性的胞内弱致病性分枝杆菌和病毒的广泛感染,全外显子组测序有助于早期诊断和及时治疗。该病预后极差。早期抗结核、抗病毒治疗或可使患儿短期内症状好转。

微RNA-146b信号转导及转录激活因子1与3在男性原发性痛风性关节炎中的变化及其临床意义

目目的探讨微RNA-146b(miR-146b)、信号转导及转录激活因子(STAT)1与STAT3在原发性痛风性关节炎(GA)患者PBMCs中的表达变化及可能的临床意义。方法收集120例男性原发性GA[含57例急性期(AG)、63例间歇期(IG)]及66名健康体检者(HC组)的外周血标本、临床资料及实验室检查指标,采用实时荧光定量PCR技术(RT-qPCR)检测PBMCs中miR-146b、STAT1与STAT3的表达水平,比较其在3组间差异并与临床指标间进行相关性分析;构建受试者工作特征曲线(ROC)评估其在GA中的诊断效能。18名健康体检者的PBMCs经100μg/ml的MSU刺激3h模拟急性痛风炎症环境后,RTqPCR检测IL-1β和miR-146b、STAT1与STAT3的转录变化,蛋白质印迹法检测IL-1β、STAT1与STAT3蛋白及磷酸化蛋白表达变化。符合正态计量资料采用t检验、单因素方差分析及LSD-t检验,非正态分布数据采用Kruskal-WallisH检验和Mann-Whitney U检验,变量间相关采用Spearman相关分析,ROC来评估诊断价值。结果果①miR-146b、STAT1、STAT3在3组表达中差异均有统计学意义(F=7.02、19.52、17.07,P均<0.001),miR-146b在原发性GA组(0.32±0.28)显著高于HC组(0.19±0.18),而STAT1(0.019+0.012)、STAT3(0.014±0.010)则显著低于HC组[(0.038±0.029),(0.025±0.016),t=2.96,6.26,5.56,P均<0.01];进一步亚组分析显示miR-146b在AG与IG组的表达均高于HC组[(0.26±0.17),(0.38±0.35),(0.19±0.18),t=2.09,3.30,P均<0.05],但AC组低于IG组(t=2.02,P<0.05);STAT1mRNA在AG与IG组的表达均低于HC组[(0.020±0.012),(0.019±0.012),(0.038±0.029),t=4.89,4.56,P均<0.001],而AG和1G组间差异无统计学意义(t=0.24,P>0.05);STAT3mRNA在AG与IG组的表达均低于HC组[(0.016+0.012),(0.013±0.008),(0.025±0.016),t=5.64,3.33,P均<0.01],且AG组高于IG组(t=2.12,P<0.05)。②Spearman相关分析显示:GA中miR-146b的表达与同型半胱氨酸呈负相关(r=-0.37,P=0.014);STAT1与血肌酐呈负相关(r=-0.29,P=0.019),与肾小球滤过率估算值呈正相关(r=0.25,P=0.047)STAT3与HDL-C呈负相关(r=-0.27,P=0.033)。③ROC曲线显示:miR-146b、STAT1、STAT3的ROC曲线下面积(95%CI)AUC分别为0.679(0.582,0.776)、0.710(0.629,0.791)、0.705(0.626,0.783),三者联合为0.836(0.765,0.907),提示对痛风诊断有一定价值(P均<0.001)。④18例HC的PBMCs经MSU刺激3h后,与空白对照组和阴性对照组相比,miR-146b表达显著降低(H=14.44,P=0.003),而IL-1β、STAT1、STAT3mRNA表达显著升高(H=26.44、27.26、15.90,P均<0.001)。且模型组的IL-1β、STAT、STAT3蛋白及磷酸化蛋白表达明显高于空白对照组,差异均有统计学意义(t=9.97、6.63、7.48、11.25、6.28,P均<0.01)。结论miR-146b、STAT1、STAT3在GA的异常表达与部分临床指标相关,提示可能参与了痛风免疫炎症反应和代谢的调节,具体机制值得进一步研究。

表皮生长因子受体和RAS/MAPK信号通路相关蛋白在肺腺癌中的表达及临床意义

目的探讨RAS/MAPK信号传导通路与肺腺癌临床病理特征以及预后的关系。方法采用免疫组织化学法和蛋白印迹法(Western blot)检测23例肺腺癌患者及9例非癌肺疾病患者组织标本中表皮生长因子受体(EGFR)、磷酸化信号转导转录因子1(pSTAT1)和磷酸化RAS/MAPK信号通路活化蛋白(pERK1/2)的表达。结果EGFR和活化蛋白pERK1/2在23例肺腺癌患者中表达率分别为73.9%(17/23)和65.2%(15/23),半定量分析显示肺腺癌组pERK1/2蛋白水平显著高于非癌组(1.303±0.656)%vs(0.262±0.213)%,且pERK1/2表达与肺腺癌患者的病理分级程度和有无淋巴结转移之间差异有统计学意义(χ2=12.049和6.626,均P<0.05),肺癌不同TNM分期间pERK1/2表达差异无统计学意义;STAT1在23例肺腺癌患者肺组织中阳性表达率为30.4%,与非癌组比较差异无统计学意义。结论 RAS/MAPK信号传导通路的激活与肺腺癌的发生、发展和转移密切相关,可作为评估肺腺癌进展的有价值的指标。

系统性红斑狼疮单核细胞中转录因子STAT1 DNA结合活性的研究

目的探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血单核细胞核蛋白中可与序列特异DNA结合、具有基因调控能力的转录因子STAT1(signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)的DNA结合活性和含量。方法对7例活动期SLE患者,6例病情稳定期SLE患者及8例健康人,采用凝胶滞留法(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测外周血单核细胞核蛋白中转录因子STAT1的DNA结合活性,并对其进行定量。结果所有SLE患者外周血单核细胞核蛋白中转录因子STAT1的DNA结合活性和含量明显增高(P<0．05)。活动期SLE患者组外周血单核细胞核蛋白中转录因子STAT1的DNA结合活性和含量明显高于稳定期SLE患者组和正常人对照组(P<0．01)。稳定期SLE患者组也显著高于正常人对照组(P<0．05)。经统计学检验,转录因子STAT1的DNA结合活性和含量与患者的抗核抗体滴度、血沉相关;与补体C3浓度负相关;不与SLE疾病活动评分相关。结论SLE患者组外周血单核细胞核蛋白中转录因子STAT1的DNA结合活性和含量显著增高,这一结果提示转录因子STAT1的DNA结合活性的异常增强与SLE的发病有关。

地黄饮通过调控JAK1/STAT3信号通路治疗特应性皮炎小鼠的作用机制

目的:探讨地黄饮对2,4-二硝基氯苯(DNCB)诱导的特应性皮炎(AD)模型小鼠的作用及潜在机制。方法:通过DNCB反复刺激小鼠背部皮肤建立小鼠AD模型,造模成功后,随机分为模型组、润燥组(0.78 g·kg^(-1))、地黄饮高、中、低剂量组(40.30、20.15、10.08 g·kg^(-1)),每组12只,空白组12只,共72只。给药组按剂量灌胃给予相应药液,空白组和模型组灌胃给予同体积纯净水,1次/d,连续给药2周后观察小鼠皮损及搔抓次数;取小鼠背部皮损进行苏木素-伊红(HE)染色和甲苯胺蓝染色观察病理情况;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠血清免疫球蛋白E(IgE)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)、干扰素-γ(IFN-γ)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time-PCR)检测皮损组织中IFN-γ、IL-4、IL-6、Janus激酶1(JAK1)、转录激活因子3(STAT3)mRNA的表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测皮损组织JAK1、磷酸化(p)-JAK1、STAT3、p-STAT3蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠背部皮肤可见大量结痂、干燥、糜烂、肥厚伴搔抓,皮损组织可见表皮增生,伴角化过度和角化不全,棘层肥厚伴水肿,真皮层可见大量肥大细胞浸润,部分处于脱颗粒状态,小鼠血清中IgE、IL-4、IL-6、IFN-γ含量显著升高(P<0.01),皮损组织中p-JAK1、STAT3、p-STAT3蛋白表达水平及IL-4、IL-6、IFN-γ、JAK1、STAT3 mRNA表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组小鼠背部皮肤仅见少量干燥、脱屑,细胞水肿减轻,炎性浸润明显减轻,肥大细胞浸润数明显降低,小鼠血清中IgE、IL-4、IL-6、IFN-γ均有不同程度降低(P<0.05,P<0.01),皮损组织中p-JAK1、STAT3、p-STAT3蛋白表达水平及IL-4、IL-6、IFN-γ、JAK1、STAT3 mRNA表达明显降低,其中以地黄饮高剂量组效果最佳(P<0.01)。结论:地黄饮能改善AD小鼠的皮损及瘙痒症状,其作用机制可能与干预JAK1/STAT3信号通路有效调节辅助性T细胞(Th)1/Th2轴上的细胞因子,影响皮肤屏障功能有关。

JAK1/STAT1/p21通路在姜黄素诱导结肠癌细胞HCT116周期阻滞中的作用

目的:探讨姜黄素对人结肠癌HCT116细胞周期阻滞的影响及其可能的分子作用机制。方法:噻唑蓝(MTT)比色法检测姜黄素(0、12.5、25、50、75、100μmol·L^(-1))和5-氟尿嘧啶(5-FU)(600μmol·L^(-1))处理不同时间(24、48、72 h)对HCT116细胞增殖的影响;流式细胞术检测姜黄素(0、25、50、75μmol·L^(-1))和5-FU对HCT116细胞周期的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HCT116细胞中Janus酪氨酸蛋白激酶1(JAK1)/信号传导及转录激活因子1(STAT1)/细胞周期依赖性激酶抑制因子1A(p21)通路相关蛋白表达的影响;染色质免疫沉淀法(ChIP)检测STAT1与p21启动子区的结合情况;采用小干扰核糖核酸(siRNA),分别通过Western blot和细胞免疫荧光检测STAT1在调控p21表达中的作用及JAK1蛋白在调控STAT1活化中的作用。结果:与空白组比较,姜黄素各组和5-FU组HCT-116细胞活性明显降低(P<0.05)。与空白组比较,姜黄素组和5-FU组DNA合成前期(G0/G1)细胞比例明显升高(P<0.05),DNA复制期(S)和DNA合成后期(G2/M)细胞比例及磷酸化p21(p-p21)蛋白水平明显降低(P<0.05),p21蛋白表达明显升高(P<0.05)。与姜黄素组比较,p21 siRNA+姜黄素组G0/G1期细胞明显降低(P<0.05)。与空白组比较,姜黄素处理后细胞中磷酸化STAT1(p-STAT1)水平明显升高(P<0.05)。与姜黄素组比较,姜黄素+STAT1 siRNA组HCT116细胞中p21蛋白表达水平升高(P<0.05)。机制研究表明,与空白组比较,姜黄素处理明显增强了STAT1蛋白在p21启动子区的富集(P<0.05)。与空白组比较,姜黄素处理后细胞中磷酸化JAK1(p-JAK1)水平明显升高(P<0.05)。与姜黄素组比较,姜黄素+STAT1 siRNA组HCT116细胞中的p-STAT1和p21蛋白水平明显升高(P<0.05)。结论:姜黄素诱导的人结肠癌HCT116细胞周期阻滞,其机制可能与激活JAK1/STAT1/p21信号通路有关。

转录活化子1反义寡核苷酸对肺纤维化大鼠肺组织中细胞因子和胶原表达的影响

目的观察信号转导子与转录活化子1（STATI）反义寡核苷酸雾化吸入对博来霉素致肺纤维化大鼠肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原，纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1），转化生长因子-β1（TGF—β1）和羟脯氨酸表达的影响。方法将45只Wistar大鼠按随机数字表法分为生理盐水组、博来霉素组和寡核苷酸组，每组15只，分别在气管内灌注并雾化吸入生理盐水、博来霉素、STAT1反义寡核苷酸。分别于雾化后第7天、第14天和第28天每组各处死5只大鼠。肺组织HE染色和Masson染色观察肺泡炎和肺纤维化改变，免疫组织化学sP法测定肺组织中TGF—β1、PAI-1表达，逆转录PCR测定肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达，肺组织匀浆测定羟脯氨酸含量。样本均数间比较采用单因素方差分析和q检验。结果寡核苷酸组大鼠各时问点的肺泡炎和肺纤维化程度均较博来霉素组减轻。博来霉素组和寡核苷酸组大鼠肺组织中TGF—β1、PAI-1表达水平均明显高于生理盐水组，博来霉素组和寡核苷酸组大鼠雾化后第7天TGF—β1、PAI-1的积分吸光度值分别为182±12和169±12、128±11和113±13，明显高于生理盐水组的21±6和27±9，第28天时（68±7和87±7、54±8和57±8）仍高于生理盐水组（22±7和26±7）；雾化后第7天、第14天和第28天，寡核苷酸组大鼠I、Ⅲ型胶原mRNA表达水平分别为1．36±0．10、1．19±0．28、1．22±0．24和1．20±0．09、0．62±0．09、0．76±0．12，明显低于博来霉素组（3．29±0．28、2．04±0．25、1．91±0．30和1．63±0．15、1．58±0．13、1．12±0．09），寡核苷酸组大鼠肺组织中羟脯氨酸含量（mg／g）分别为3．02±0．13、3．24±0．31和3．60±0．16，明显低于博来霉素组的3．76±0．10、3．92±0．30和4．62±0．28。结论STAT1反义寡核苷酸雾化吸入能减轻博来霉素致肺纤维化大鼠肺泡炎和肺纤维化，其机制可能与抑制TGF—β1、PAl-1的表达，Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达减少，羟脯氨酸含量降低有关。

STAT1在结缔组织生长因子刺激人增生性瘢痕成纤维细胞增殖分化中的作用

目的基于既往研究，验证信号转导和转录活化因子1（STAT1）是否参与结缔组织生长因子（CTGF）刺激人增生性瘢痕成纤维细胞增殖分化过程。方法取6例增生性瘢痕患者的手术切除组织，培养成纤维细胞。应用凝胶阻滞电泳（EMSA）方法测定不同浓度（0、5、7．5、10、15ng／m1）CTGF刺激45min和10ng／mlCTGF刺激不同时间（0、10、20、30、45、60、90、120min）对瘢痕成纤维细胞STAT1与DNA结合能力的影响。将瘢痕成纤维细胞分为CTGF刺激组、STAT1反义寡脱氧核苷酸（ASODN）转染组、STAT1 ASODN＋CTGF组和空白对照组，用噻唑盐（MTT）法测定各组细胞培养1、2、3d的增殖活性，RT-PCR测定α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）mRNA表达以反映瘢痕成纤维细胞向肌成纤维细胞分化活性。结果瘢痕成纤维细胞中STAT1与DNA的结合活性随CTGF浓度而增强，当CTGF浓度为10ng／ml时达峰值；10ng／ml的CTGF刺激45～60min达峰值。MTT法检测显示CTGF刺激组培养1—3d增殖活性明显均高于空白对照组（均P〈0．05），而STAT1 ASODN转染组和STAT1 ASODN＋CTGF组均明显低于空白对照组和CTGF刺激组（均P〈0．05）。RT—PCR检测结果显示，CTGF刺激组、STAT1 ASODN转染组、STAT1 ASODN＋CTGF组和空白对照组瘢痕成纤维细胞向肌成纤维细胞分化活性分别为0．78±0．08、0．38±0．09、0．76±0．10和0．d0±0．12，STAT1 ASODN转染组和空白组均明显低于CTGF刺激组和STAT1 ASODN＋CTGF组（均P〈0．05）。结论STAT1 ASODN可明显抑制瘢痕成纤维细胞的增殖活性，并阻断CTGF对细胞增殖的刺激作用，提示STAT1参与CTGF调控人增生性瘢痕成纤维细胞增殖过程。

罗格列酮对重症急性胰腺炎大鼠胰腺组织STAT1的影响

目的探讨罗格列酮对重症急性胰腺炎（SAP）大鼠胰腺组织信号转导与转录激活因子1（STAT1）的影响。方法将54只Wistar大鼠随机分为假手术组（SO组）、重症急性胰腺炎组（SAP组）、罗格列酮预处理组（ROSI组），每组18只。逆行胆胰管注射5％牛磺胆酸钠制备SAP模型。ROSI组造模前30min经股静脉注射罗格列酮（6mg／kg），然后制备SAP模型。术后3、6、12h心脏取血处死大鼠，每个时间点6只，测定血清淀粉酶水平，胰腺组织病理切片HE染色后评分；免疫组织化学方法检测胰腺组织磷酸化STAT1蛋白的表达情况；RT-PCR测定胰腺组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA的表达水平。结果SAP组各时间点磷酸化STAT1蛋白、TNF-α mRNA的表达水平、血清淀粉酶及胰腺组织光镜下病理评分较SO组显著升高（P〈0．01）；ROSI组各时间点上述指标较SAP组降低（P〈0．05），但较SO组增高（P〈0．05）。结论SAP时胰腺组织STAT1活化；罗格列酮对SAP大鼠具有保护作用，其机制可能是通过抑制Janus激酶一信号转导与转录激活因子通路来抑制其下游炎性介质的产生。

博来霉素致肺纤维化大鼠不同时间点吸及STAT1反义寡核苷酸的疗效比较

目的探讨雾化吸入信号转导和转录活化因子1（STAT1）反义寡核苷酸（ASON）干预肺纤维化的最佳给药时机。方法Wistar雌性大鼠25只随机均分为博来霉素（BLM）组、ASON0d组、ASON7d组、ASON14d组和生理盐水（NS）组，前4组气管内灌注BLM建立肺纤维化模型，NS组气管内灌注NS。ASON0、7、14d组分别于气管内灌注BLM后立即、第7和14天开始雾化吸入STAT1 ASON；NS组和BLM组雾化吸入NS。气管内灌注BLM后第28天处死各组大鼠，取肺组织分别行HE和Masson染色，观察肺泡炎和纤维化情况并评分；酶联免疫吸附试验（ELISA）测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中转化生长因子β（TGF-β）和肿瘤坏死因子仅（TNF-α）浓度。结果肺组织病理学观察显示ASON0d组大鼠肺泡炎和肺纤维化程度明显轻于BLM组和ASON14d组，肺泡炎评分（1．80±0．84）和肺纤维化评分（2．60±0．55）均明显低于BLM组（2．40±0．55、4．40±0．55）、ASON7d组（2．20±0．45、3．00±0．71）和ASON14d组（2．20±0．84、4．00±1．00）（均P〈0．05）；ASON7d组肺纤维化评分也明显低于BLM组和ASON14d组（均P〈0．05）。ASON0d组BALF中TGF—β与TNF-α浓度[（48．11±3．46）pg／ml、（1．93±0．14）ng／ml]均明显低于BLM组[（57．67±2．46）pg／ml、（2．45±0．25）ng／ml，均P〈0．05]，TGF—β浓度明显低于ASON7d组[（51．42±3．57）pg／ml]和ASON14d组[（55．83±1．79）pg／ml]（均P〈0.05）；ASON7d组BALF中TGF—β浓度也明显低于BLM组和ASON14d组（均P〈0．05）。结论早期雾化吸入STAT1ASON对BLM致肺纤维化大鼠的肺纤维化形成有明显阻抑作用，用药越早效果越好，提示雾化吸入STAT1 ASON有可能成为肺纤维化的早期干预手段。

转录信号传导子与激活子1和基质金属蛋白酶3在肾移植后尿路上皮肿瘤中的基因表达和临床意义

目的 探讨转录信号传导子与激活子1（STAT1）和基质金属蛋白酶3（MMP3）在肾移植后尿路上皮肿瘤中的基因表达和临床意义. 方法 选择手术治疗的肾移植后尿路上皮肿瘤患者16例（实验组）和普通人尿路上皮肿瘤患者35例（对照组）.术后病理均证实为移行细胞癌.选取2组各2对肿瘤标本,用人全基因组寡核昔酸微阵列芯片筛查其基因表达谱差异;再分别用荧光定量PCR和免疫组化方法检测2组尿路上皮肿瘤STAT1和MMP3表达,并比较组间差异. 结果 2对尿路上皮肿瘤标本中,实验组表达共同上调基因35个,其中功能已知或部分功能已知者23个,功能未知者12个;共同下调基因76个,功能已知或部分功能已知者46个,功能未知者30个.共同差异表达基因进行通路功能分析,23组通路差异有统计学意义（P＜0.05）,涉及免疫抑制和肿瘤发生发展方面.2组间STAT1和MMP3表达水平差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 移植后尿路上皮肿瘤与普通人群尿路上皮肿瘤基因表达谱差异明显,与肿瘤发生发展相关的基因涉及信号传导通路、细胞增殖、细胞凋亡、肿瘤血管发生、肿瘤转移潜能等方面;STAT1和MMP3可能成为预防移植后尿路上皮肿瘤发生发展的一个靶点.