mTOR/PKM2和STAT3/c-Myc信号通路串话调节胃癌能量代谢和酸性微环境的机制研究

背景:c-Myc和PKM2在多种肿瘤中高表达,但mTOR/PKM2和STAT3/c-Myc信号通路对胃癌调节作用的研究不多见。目的:探讨mTOR/PKM2和STAT3/c-Myc信号通路串话调节胃癌能量代谢和酸性微环境的机制。方法:PKM2和c-Myc慢病毒转染人胃癌AGS和HGC-27细胞,构建敲减PKM2、c-Myc的细胞模型。采用CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell小室法检测细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡,实时定量PCR和蛋白质印迹法分别检测PKM2、c-Myc、LDHA、STAT3、p-STAT3、GLUT-1 mRNA和蛋白表达,比色法检测乳酸和葡萄糖水平。结果:PKM2和c-Myc表达在胃癌细胞中上调。敲减c-Myc可抑制胃癌细胞增殖能力,细胞迁移能力明显降低,LDHA、GLUT-1蛋白表达明显降低,葡萄糖和乳酸含量明显降低。共同敲减PKM2和c-Myc对胃癌细胞增殖能力和糖酵解代谢的抑制作用更明显。mTOR/PKM2与STAT3/c-Myc信号通路之间存在相关性。结论:PKM2联合c-Myc可能成为胃癌新的治疗靶点。

白芍总苷通过调控JAK/STAT3/BCL-XL信号通路对HaCaT细胞增殖的影响

目的:探讨白芍总苷(TGP)对白介素22(IL-22)诱导的HaCaT银屑病细胞模型的抗凋亡作用,探索其在银屑病治疗中的机制,为银屑病的临床研究用药提供理论依据。方法:IL-22刺激HaCaT细胞,检测细胞活性,筛选IL-22干预的最佳剂量和最佳作用时间,构建银屑病细胞模型。用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(WB)测定银屑病细胞模型中的抗凋亡分子的表达。TGP处理银屑病细胞模型后,用MTT检测细胞的活性。免疫荧光染色测定银屑病细胞模型中STAT3的定位。抑制STAT3的表达后,用RT-PCR和WB检测下游抗凋亡分子BCL-XL的表达。实验采用随机分组,通过GraphPad-Prism 6软件对数据进行处理,结果差异进行t检验。结果:MTT实验发现,IL-22处理HaCaT细胞的最佳剂量和时间分别为12.5 mmol/L,48 h。银屑病细胞模型中,抗凋亡相关通路JAK/STAT3/BCL-XL的表达显著增加。通过TGP处理后,细胞活性明显下降,同时细胞核内STAT3明显减少。抑制STAT3表达后,银屑病细胞模型活性指标显著降低,尤其是STAT3下游的分子BCL-XL的表达下降。结论:TGP基于调节抗凋亡通路JAK/STAT3/BCL-XL的表达,降低IL-22诱导的银屑病细胞模型的活性。

大黄素通过调节JAK2/STAT3信号通路减轻卒中相关性肺炎大鼠肺损伤

[目的]观察大黄素调节Janus激酶2(JAK2)/转录激活因子3(STAT3)信号通路对卒中相关性肺炎(SAP)大鼠肺损伤的影响。[方法]采用改良线栓法结合气管注射铜绿假单胞菌法建立SAP大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组,大黄素低、高剂量组,大黄素高剂量+香豆霉素(JAK2激活剂)组,每组12只,另选出12只SD大鼠设为假手术组。干预后,测定动脉血气指标二氧化碳分压(PaCO_(2))、氧分压(PaO_(2)),测定肺湿/干质量比,进行支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞计数,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察肺组织病理形态并进行病理损伤评分,采用酶联免疫吸附分析(ELISA)检测肺组织中髓过氧化物酶(MPO)活性,BALF和血清中白细胞介素6(IL-6)、环氧化酶2(COX-2)水平,采用Western Blot法检测肺组织JAK2/STAT3通路关键蛋白表达。[结果]与假手术组比较,模型组大鼠肺组织发生明显病理损伤,PaCO_(2)值,肺湿/干质量比,BALF中白细胞数及嗜酸性粒细胞数,病理损伤评分,肺组织MPO活性水平,BALF和血清IL-6、COX-2水平,肺组织p-JAK2/JAK2及p-STAT3/STAT3比值均显著升高,PaO_(2)值显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,大黄素低、高剂量组大鼠肺组织病理损伤均减轻,PaCO_(2)值,肺湿/干质量比,BALF中白细胞数及嗜酸性粒细胞数,病理损伤评分,肺组织MPO活性水平,BALF和血清IL-6、COX-2水平,肺组织p-JAK2/JAK2及p-STAT3/STAT3比值均降低,PaO_(2)值升高,差异均有统计学意义(P<0.05),且大黄素高剂量组作用效果更强;香豆霉素可减弱大黄素对模型大鼠上述各指标的改善作用。[结论]大黄素可通过抑制JAK2/STAT3信号通路活化下调SAP大鼠炎症水平,进而减轻肺损伤,改善肺功能。

电针阳陵泉和曲池穴调控JAK2/STAT3信号通路改善大鼠脑卒中肢体痉挛

【目的】观察电针阳陵泉和曲池穴对大鼠脑卒中肢体痉挛的治疗作用及机制。【方法】将大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组和电针+CA1[Janus激酶2(JAK2)激动剂]组。除假手术组,其余各组大鼠采用改良的大脑中动脉线栓联合内囊注射N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体法制备脑卒中肢体痉挛模型。干预后,对大鼠进行神经功能缺损评分、阿什沃斯肌肉痉挛评定量表(Ashworth)评分和电生理测定;酶联免疫吸附分析(ELISA)检测脑组织中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ-氨基丁酸(GABA)水平;采用比色法检测谷氨酸(Glu)含量;苏木素-伊红(HE)染色法观察脑组织病理学变化;Western Blot法检测脑组织中JAK2、磷酸化JAK2(p-JAK2)、信号转导子和转录激活子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达。【结果】模型组神经功能缺损评分,Ashworth评分,脑组织中IL-6、TNF-α、Glu含量及p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值均显著高于假手术组(P<0.05),肌张力信号值、脑组织中GABA含量显著低于假手术组(P<0.05);与模型组比较,电针组神经功能缺损评分,Ashworth评分,脑组织中IL-6、TNF-α、Glu含量及p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值均显著降低(P<0.05),肌张力信号值、脑组织中GABA含量显著升高(P<0.05);与电针组比较,电针+CA1组神经功能缺损评分,Ashworth评分,脑组织中IL-6、TNF-α、Glu含量及p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值显著升高(P<0.05),肌张力信号值、脑组织中GABA含量显著降低(P<0.05)。【结论】电针可能通过抑制JAK2/STAT3通路抑制炎症反应,调节神经元兴奋/抑制平衡,从而缓解脑卒中大鼠肢体痉挛。

Stat1抑制Foxp3的表达和Treg产生

目的:探究Stat1对Foxp3的表达和Treg产生的影响。方法:C57BL/6小鼠分为正常对照组和Stat1特异抑制剂氟达拉滨(Flud)处理组。采用流式细胞术检测小鼠脾脏、淋巴结和外周血中CD4~+Foxp3~+Treg比例及Foxp3的表达变化。构建人源性Stat1过表达质粒,转染人乳腺癌MCF-7细胞系,采用RT-qPCR和Western blot检测Foxp3的表达变化。结果:与正常对照组相比,Flud处理组小鼠淋巴结和外周血Treg比例及Foxp3表达增加,而过表达Stat1则导致MCF-7细胞中Foxp3 mRNA及蛋白表达水平显著降低。结论:Stat1抑制Foxp3的表达和Treg的产生。

清达颗粒通过调控miR-124/STAT3信号轴减轻自发性高血压大鼠脑损伤

目的探讨清达颗粒(QDG)对自发性高血压大鼠(SHR)脑损伤的保护作用及其对miR-124/STAT3信号轴的影响。方法6只5周龄WKY大鼠为WKY组,12只5周龄SHR大鼠分为SHR组、SHR+QDG组,6只/组。SHR+QDG组大鼠每天给予QDG灌胃,灌胃剂量为0.9 g/(kg·d),连续灌胃12周,其余组大鼠每天给予等体积生理盐水灌胃。利用鼠尾无创血压仪监测血压,HE染色观察脑皮质区病理,TUNEL染色检测皮质区凋亡,Q-PCR检测miR-124、STAT3 mRNA的表达,免疫组化和Western blotting检测NeuN、STAT3、Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3的表达;利用氧糖剥夺/复氧(OGD/R)构建神经元HT22细胞损伤模型,分为Control组、QDG组、OGD/R组、OGD/R+QDG组。利用CCK-8法检测细胞活力,Hoechst 33342染色检测细胞凋亡,Q-PCR检测miR-124、STAT3、Bcl-2、Bax mRNA的表达,Western blotting检测STAT3、Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3的表达。结果体内实验中,与WKY组比较,SHR组大鼠的收缩压、舒张压及平均动脉压均升高(P<0.05),脑皮质区神经元出现核固缩,数量减少,凋亡率升高(P<0.05),NeuN、miR-124、Bcl-2的表达降低,STAT3、Bax、cleaved caspase-3的表达升高(P<0.05)。与SHR组比较,清达颗粒能降低SHR大鼠的收缩压、舒张压及平均动脉压(P<0.05),改善SHR大鼠脑皮质区的病理损伤,降低皮质区的凋亡率(P<0.05),升高皮质区的NeuN、miR-124、Bcl-2的表达(P<0.05),降低STAT3、Bax、cleaved caspase-3的表达(P<0.05)。体外实验中,与Control组比较,OGD/R组凋亡率升高,miR-124、Bcl-2表达降低,STAT3、Bax、cleaved caspase-3表达升高(P<0.05);与OGD/R组比较,清达颗粒能降低OGD/R诱导的HT22细胞凋亡,升高miR-124、Bcl-2表达,降低STAT3、Bax、cleaved caspase-3表达(P<0.05)。结论清达颗粒可能通过调控miR-124/STAT3信号轴,抑制神经元的凋亡,从而减轻SHR大鼠的脑损伤。

Biochemical dissection of STAT3 signaling in amyotrophic lateral sclerosis

Amyotrophic lateral sclerosis(ALS)is a progressive neurodegenerative disease characterized by the loss of upper and lower motor neurons,clinically marked by muscle atrophy and weakness.Although the clinical course is highly variable,the average time from the onset of symptoms to the need for respiratory support or death is 3-5 years.ALS is the most prevalent motor neuron disease in adults,occurring at a rate of 2 per 100,000 individuals and affecting 5.4 per 100,000 individuals overall.

RNA结合蛋白KHSRP激活JAK1/STAT3通路促进胃贲门腺癌的生长与转移

目的探讨KHSRP靶向调控JAK1/STAT3信号轴对胃贲门腺癌细胞迁移和侵袭等恶性生物学行为的影响。方法比较胃贲门腺癌组织和癌旁组织中KHSRP的表达水平。qRT-PCR法检测胃贲门腺癌细胞系(OE-19、TE-7、BIC-1、FLO-1、SK-GT-4、BE-3)与正常胃黏膜上皮细胞系(GES-1)中KHSRP的表达差异。通过包装慢病毒载体对KHSRP进行敲降和过表达处理,分为sh-NC组、sh-KHSRP组和Vector组、KHSRP组。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、Transwell实验测定KHSRP对胃贲门腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。异种移植肿瘤模型检测敲降和过表达KHSRP在活体动物体内的作用。Western blot实验验证KHSRP靶向JAK/STAT信号通路。结果与邻近正常组织相比,KHSRP在GCA组织中的表达显著增高(P<0.05)。细胞功能实验分析显示,KHSRP过表达在体外显著促进GCA细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。在敲降KHSRP后,JAK/STAT信号通路中JAK1、STAT3磷酸化水平明显降低,过表达KHSRP后情况则反之(P<0.05)。结论KHSRP通过激活JAK1/STAT3信号轴调控胃贲门腺癌转移的恶性进程。

CXCL10介导的STAT3信号通路在结直肠癌转移中的作用机制及其调控策略研究

本研究旨在探究CXCL10经激活STAT3信号通路,在结直肠癌转移过程中所扮演的作用机理。方法 研究方法包括:首先,在体内外实验中培育出CXCL10过表达及干扰的结直肠癌细胞系;随后,运用CCK8、Transwell侵袭实验、裸鼠模型以及免疫组化和Westernblot技术,评估CXCL10及STAT3信号通路的激活状态;最后,探讨这些因素对肿瘤侵袭、转移以及患者预后的影响。结果 CXCL10过表达显著增强了结直肠癌细胞的增殖和侵袭能力,并通过激活STAT3通路上调了MMP2、VEGF等下游分子的表达。临床样本分析显示,CXCL10和p-STAT3的高表达与患者不良预后密切相关。结论 CXCL10通过STAT3信号通路促进结直肠癌转移,其作为靶向治疗的新标志物具有重要潜力。

TLR4/NF-κB和JAK2/STAT3信号通路在心肌缺血再灌注损伤中的作用研究

本研究旨在探讨不同的信号通路参与调控心肌缺血再灌注(MIR)损伤的作用机制,以期为MIR诊疗及新药研究提供新的思路。方法 本研究取64只Wistar大鼠设置假手术组、MIR组、MIR+ Toll样受体4(TLR4)抑制剂TAK242组和MIR+Janus激酶2(JAK2)抑制剂AG490组,每组设16只大鼠。假手术组除外的其它组通过夹闭左冠状动脉前降支30 min复制MIR动物模型,各组均于造模前1周开始1次/d给药进行干预,MIR+TAK242组给予10 mg/kg TAK242,MIR+AG490组给予5 mg/kg AG490,假手术组和模型组则应用生理盐水进行同步干预。再灌注6 h后,超声法检测心功能指标[射血分数(EF)、每搏输出量(SV)],分别通过HE染色、TUNEL法检查各组大鼠心肌标本的病理学改变和细胞凋亡水平;酶联免疫吸附法测定心肌标本中炎症因子水平;Western blot法测定心肌标本中TLR4、核因子-κB(NF-κB)、JAK2、信号传导转录激活因子3(STAT3)蛋白表达。结果 与假手术组相比,MIR组心功能明显低下,表现为EF、SV降低;心肌组织表现出纤维断裂、细胞变性坏死、炎性浸润等病理学改变,凋亡指数明显升高,心肌组织炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平明显升高,TLR4/NF-κB信号通路和JAK2/STAT3信号通路相关蛋白表达明显上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。与MIR组相比,MIR+TAK242组和MIR+AG490组心功能明显升高,心肌组织病变状况明显改善,凋亡指数降低,心肌组织中TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低,各信号通路相关蛋白表达水平降低。差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 TLR4/NF-κB和JAK2/STAT3信号通路通过调节炎症反应和细胞凋亡参与MIR损伤过程。

基于STAT3信号通路研究柠檬苦素对胃癌模型小鼠免疫因子表达的影响

目的 分析柠檬苦素对胃癌小鼠模型免疫因子表达的影响并探索其作用机制。方法 选取50只SPF级小鼠,随机分为5组各10只,构建MFC胃癌荷瘤模型,建模成功后随机分为模型组、阳性对照组及柠檬苦素低、中、高剂量组并给予对应药物灌胃,1次/d,连续14 d。计算脾指数、胸腺指数及抑瘤率;流式细胞术检测CD4^(+)、CD8^(+) T细胞及其比值;酶联免疫吸附试验检测血清免疫因子白细胞介素(IL)-2、IL-10、干扰素(IFN)-γ的表达水平;免疫组化法检测胃癌组织磷酸化信号转导与转录激活因子(p-STAT3)、基质金属蛋白酶(MMP)-9阳性表达率;Western印迹法检测胃癌细胞STAT3磷酸化水平。结果 与模型组相比,阳性对照组脾指数、胸腺指数显著降低(P<0.05),柠檬苦素低、中、高剂量组脾指数、胸腺指数显著升高(P<0.05);与模型组相比,阳性对照组、柠檬苦素低、中、高剂量组抑瘤率均显著增加(P<0.05)。柠檬苦素低、中、高剂量组CD4^(+)、CD8^(+) T淋巴细胞百分数和CD4^(+)/CD8^(+)比值较模型组显著上升(P<0.05)。与模型组相比,阳性对照组IL-2、IL-10水平显著下降,IFN-γ显著上升(P<0.05);而柠檬苦素低、中、高剂量组IL-2、IFN-γ水平显著增加,IL-10显著降低(P<0.05)。与模型组相比,阳性对照组及柠檬苦素低、中、高剂量组p-STAT3、MMP-9的阳性表达率均显著下降(P<0.05)。与模型组相比,阳性对照组及柠檬苦素低、中、高剂量组第705位点酪氨酸的磷酸化STAT3蛋白(pTyr^(705)-STAT3)水平均显著降低(P<0.05)。结论 柠檬苦素能抑制胃癌小鼠模型肿瘤组织的发展,这与其提高小鼠免疫水平与抑制STAT3通路激活密切相关。

miR-519b-3p调控IL-6/STAT3通路对宫颈癌细胞凋亡、迁移、侵袭的影响

目的探讨miR-519b-3p调控IL-6/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路对宫颈癌细胞(SiHa)凋亡、迁移、侵袭的影响。方法qRT-PCR检测miR-519b-3p在宫颈癌组织中的表达。SiHa细胞分为miR-NC组、miR-519b-3p组、miR-NC+RhIL-6组、miR-519b-3p+RhIL-6组。流式细胞术评估SiHa细胞凋亡率,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况。Western blotting检测B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-cadherin、Bcl相关x蛋白(Bax)、STAT3和p-STAT3蛋白水平。结果与癌旁组织比较,宫颈癌组织miR-519b-3p表达下调(P<0.05)。SiHa细胞凋亡率、Bax和E-cadherin蛋白水平miR-519b-3p组高于miR-NC组,miR-NC+RhIL-6组低于miR-NC组,miR-519b-3p+RhIL-6组低于miR-519b-3p组(P<0.05)。SiHa细胞迁移数、侵袭数、Bcl-2、N-cadherin、p-STAT3蛋白水平miR-519b-3p组低于miR-NC组,miR-NC+RhIL-6组高于miR-NC组,miR-519b-3p+RhIL-6组高于miR-519b-3p组(P<0.05)。结论miR-519b-3p通过抑制IL-6/STAT3通路来抑制宫颈癌细胞迁移和侵袭,并增加细胞凋亡。

基于PTEN/mTOR/STAT3通路探讨夹脊电针对脊髓损伤大鼠自噬的影响

目的观察夹脊电针对脊髓损伤(spinal and injury,SCI)大鼠第10号染色体上缺失的磷酸酶与同源张力蛋白(phosphatase and tensinhomolog,PTEN)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)/信号转导和转录激活子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)通路相关因子(p-PTEN、p-mTOR、p-STAT3)、自噬相关因子(LC3-Ⅱ、p62、Atg5)以及星形胶质细胞中星形胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、自噬标志物微管相关蛋白1轻链3(light chain 3,LC3)共定位信号的表达情况,探讨夹脊电针调控SCI细胞自噬促进神经功能恢复的可能机制,为临床运用夹脊电针治疗SCI提供新的思路和分子生物学理论依据。方法将72只雄性SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、模型(Model)组、夹脊电针(EA)组、抑制剂+夹脊电针(bpV)组,每组按照造模后3、7和14 d治疗时间点分为3个亚组,每个亚组6只大鼠。采用Allen’s法建立SCI大鼠模型。EA组予双侧胸(T)9、T11夹脊穴,电针30 min,强度1 mA,密波(100 Hz),1次/d,分别连续治疗3、7、14 d。bpV组在电针治疗前10 min注射PTEN通路抑制剂bpV(HOpic),200μL/kg,1次/d,分别连续治疗3、7、14 d。采用Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分观察并比较各组大鼠后肢运动功能;HE染色观察各组大鼠脊髓组织的病理形态学变化;Nissl染色观察各组大鼠脊髓组织前角运动神经元的形态和数量;IHC检测各组大鼠脊髓组织p-PTEN、p-mTOR、p-STAT3、LC3-Ⅱ、p62、Atg5的免疫组化染色累积光密度值(imaging object definition,IOD)值;WB检测各组大鼠p-PTEN、p-mTOR、p-STAT3蛋白相对表达量;IF检测脊髓组织星形胶质细胞GFAP、LC3共定位情况。结果大鼠行为学检测结果示:与Model组比,在3、7、14 d时,EA组、bpV组BBB评分均增高(P<0.05);HE结果示:Model组脊髓组织出现大量内含片状出血以及坏死组织的空腔,神经细胞松散排列,3 d后EA组脊髓组织结构逐渐规整、空泡逐渐减少、神经元数量增加;Nissl染色结果示:与Sham组比,Model组神经元染色较浅,数量明显降低,EA组神经元染色较深,数量增多;IHC结果示:与Model组比,EA组p-PTEN、p-mTOR、p-STAT3的IOD值在3 d时明显降低(P<0.01),在7、14 d时明显增高(P<0.01);与Model组比,EA组在3 d时LC3-Ⅱ和Atg5显著升高,p62显著降低(P<0.01),在7、14 d时,LC3-Ⅱ和Atg5显著降低,p62显著增高(P<0.01);与Model组比,bpV组在3、7、14 d时LC3-Ⅱ、Atg5和p62的IOD值均降低(P<0.05);与EA组比,在3、7 d时,bpV组LC3-Ⅱ和Atg5表达均降低,p62增高(P<0.01),在14 d时,LC3-Ⅱ和Atg5降低,p62增高(P<0.05);WB结果示:与Model组相比,3 d时,EA组LC3-Ⅱ和Atg5表达显著升高,p62显著降低(P<0.01);在7、14 d时,LC3-Ⅱ和Atg5显著降低,p62显著增高(P<0.01);与Model组相比,在3、7、14 d时,bpV组LC3-Ⅱ、Atg5表达均降低,p62表达增高(P<0.05);与EA组比,在3、7 d时,bpV组LC3-Ⅱ表达较低,p62表达较高(P<0.01);在14 d时,LC3-Ⅱ明显增高(P<0.05)、Atg5明显增高,p62明显降低(P<0.01)。IF结果示:在3、7、14 d时,Model组有明显共定位信号,阳性细胞数与时间成正比。EA组的共定位阳性细胞数较Model组减少。bpV组阳性细胞数较EA组减少。结论夹脊电针能明显促进SCI大鼠后肢运动功能恢复,其机制与调控PTEN/mTOR/STAT3通路介导的自噬和星形胶质细胞生长有关。

STAT3、WWOX与c-myc在非小细胞肺癌组织中的表达及相关性分析

目的:研究信号转导与转录激活因子3(STAT3)、包含氧化还原酶的WW结构域(WWOX)及原癌基因c-myc在非小细胞肺癌(NSCLC)及肺正常组织中的表达以及三者之间的关系。方法:应用免疫组化染色S-P法,检测STAT3、WWOX及c-myc在40例NSCLC组织和20例正常肺组织中的表达情况,并分析其与各个临床病理指标之间的关系。结果:(1)STAT3和c-myc在NSCLC组织中的阳性表达率分别为92.5%和90%,均明显高于肺正常组织(20%和15%,P<0.01);WWOX在NSCLC中的阳性表达率为30%,明显低于肺正常组织(75%,P<0.01)。(2)STAT3、c-myc的表达水平与NSCLC的组织学类型有关,在腺癌组织中的表达明显高于鳞癌组织(P<0.01);与年龄、性别、肿瘤组织的分化程度、肿瘤大小、TNM分期及淋巴结转移无关;WWOX基因的表达与是否有淋巴结转移相关(P<0.01),在有淋巴结转移的肺癌组织中其表达更低或缺失。(3)STAT3与WWOX在NSCLC组织中的表达呈显著负相关(r=-0.443,P<0.01);STAT3与c-myc蛋白,WWOX与c-myc在NSCLC组织中的表达均不相关(分别为r=-0.084,r=0.115)。结论:在NSCLC组织中存在STAT3和c-myc的过度表达,WWOX在NSCLC组织中呈低表达或表达缺失,提示三者可能参与了NSCLC的发生与发展;在NSCLC的发生过程中,STAT3蛋白与WWOX在NSCLC中的表达呈负相关;而STAT3与c-myc、WWOX与c-myc的表达均无相关性,它们二者之间可能是通过两条不同的途径影响肺癌的发生与发展。

基于JAK2/STAT3信号通路探讨黄芪-山茱萸对高糖诱导足细胞损伤的保护作用

目的:探究黄芪-山茱萸对高糖诱导肾足细胞损伤的保护作用及机制。方法:CCK8法检测黄芪-山茱萸(0、175、350、700、1400、2800 mg/L)对足细胞(MPC-5)活性的影响。30 mmol/L葡萄糖诱导MPC-5细胞损伤,350、700、1400 mg/L黄芪-山茱萸进行干预;ELISA测定MPC-5细胞IL-6、IL-1β水平,流式细胞术测定细胞凋亡,免疫荧光染色测定MPC-5肾病蛋白(nephrin)、足细胞素(podocin)表达,qRT-PCR测定MPC-5细胞nephrin、podocin、结蛋白(desmin)、Wilm瘤基因1(WT-1)基因表达,Western blot测定细胞Janus激酶2/信号转导和转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路磷酸化表达。结果:2800 mg/L黄芪-山茱萸可显著抑制MPC-5细胞活性(P<0.01)。MPC-5细胞经高糖诱导后,IL-6、IL-1β水平升高,凋亡增加,nephrin、podocin、WT-1表达降低,desmin表达升高,JAK2/STAT3信号通路磷酸化表达增加(P<0.01)。350、700、1400 mg/L黄芪-山茱萸可抑制高糖诱导MPC-5细胞IL-6、IL-1β水平升高和凋亡,增强nephrin、podocin、WT-1表达,降低desmin表达,抑制JAK2/STAT3信号通路磷酸化表达(P<0.05)。结论:黄芪-山茱萸可减轻高糖诱导足细胞炎症和凋亡损伤,其机制与抑制JAK2/STAT3通路磷酸化有关。

荜茇酰胺调控STAT3/HIF-1α通路诱导乳腺癌和乳腺细胞凋亡的机制

目的:探究荜茇酰胺对乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7和正常乳腺细胞MCF-10A增殖、凋亡和细胞周期的影响及其潜在的分子机制。方法:采用不同浓度荜茇酰胺干预MDA-MB-231、MCF-7、MCF-10A细胞,MTT法检测细胞增殖能力;细胞克隆形成法检测细胞克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;Western Blot检测细胞中cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax、Cyclin D1、p53、p-JAK2、p-STAT3、HIF-1α、Survivin蛋白表达。结果:荜茇酰胺可呈浓度依赖性抑制MDA-MB-231、MCF-7细胞增殖并诱导其凋亡,而对MCF-10A细胞无明显抑制作用;荜茇酰胺可下调MDA-MB-231细胞p53、Bcl-2、Cyclin D1、p-STAT3、Survivin、HIF-1α及MCF-7细胞p53、p-STAT3、Survivin、HIF-1α蛋白表达,上调MDA-MB-231细胞cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达。结论:荜茇酰胺能抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7增殖并诱导其凋亡,其机制可能与负向调控STAT3/HIF-1α通路有关。

LINC00626通过JAK1/STAT3/KHSRP信号轴调控结直肠癌转移的恶性进展

目的探究LINC00626通过JAK1/STAT3/KHSRP信号轴调控结直肠癌恶性进展及其潜在的分子机制。方法选取2021年6月11日至2023年6月11日在河南大学淮河医院确诊为结直肠癌的患者96例为研究对象,分别取患者的癌组织和癌旁正常组织。体外培养结直肠癌细胞系(SW620、HCT116、HT29、DLD-1、LOVO、Caco-2)和结直肠正常细胞(NCM460),qRT-PCR检测结直肠癌组织和细胞系中LINC00626、KHSRP的表达情况。筛选出慢病毒感染细胞系,SW620和HCT116细胞系分别转染敲降慢病毒及其对照,HT29和DLD-1细胞系分别转染过表达慢病毒及其对照。选取稳定转染的细胞系进行细胞功能实验,检测增殖、迁移、侵袭能力。小鼠活体动物实验检测LINC00626对结直肠癌肿瘤生长和迁移的影响。Western blot法检测稳染细胞中KHSRP蛋白的表达水平。拯救实验研究LINC00626与KHSRP的调控关系。结果qRT-PCR显示,在结直肠癌组织和细胞系中LINC00626低表达,而KHSRP高表达。细胞功能实验显示,与sh-NC组相比,sh-LINC00626组在SW620和HCT116细胞促进细胞增殖、细胞迁移、侵袭,过表达组则反之。细胞拯救实验显示,LINC00626+KHSRP可显著逆转敲降LINC00626对细胞增殖、细胞迁移、侵袭的促进作用。裸鼠实验中,与sh-NC组相比,sh-LINC00626组裸鼠肿瘤体积和重量、细胞增殖率和结直肠癌肺转移病灶数目明显增加;过表达结果相反。信号通路实验显示,与sh-NC组相比,sh-LINC00626组JAK1、STAT3mRNA的表达量显著上调,过表达组结果相反。结论LINC00626通过JAK1/STAT3/KHSRP信号轴,抑制结直肠癌转移的恶性进程。

Stat3蛋白氨基端转录激活结构域的鉴定

Stat3是一个在调控胚胎发育、细胞增殖、凋亡、炎症反应和血管生成等多种生理过程发挥关键作用的重要转录因子。Stat3蛋白有Stat3α和缺少羧基端转录激活结构域的Stat3β两个剪接异构体。Stat3基因纯合缺失突变的小鼠在早期胚胎死亡。表达Stat3β可逆转Stat3纯合缺失突变小鼠的胚胎致死表型,并可诱导其下游基因的短期表达,然而其潜在的转录激活结构域一直没有被测定和证实。为进一步解析Stat3蛋白的结构和功能,本研究构建并在酵母中表达了一系列Stat3蛋白的截短体,利用酵母双杂交和双荧光素酶报告基因实验,在酵母和哺乳动物细胞中证实了Stat3蛋白的第2~11位短肽(aa2-11)具有转录激活的作用。这一发现为表达Stat3β逆转Stat3基因缺失引起小鼠胚胎致死表型提供了一种可能的解释,也进一步加深了对Stat3蛋白结构和功能的了解和认识。

miR-495-3p靶向BUB1调控STAT3信号通路对食管癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨miR-495-3p靶向苯并咪唑出芽抑制解除同源物蛋白1(BUB1)调控信号转导及转录激活因子3(STAT3)信号通路对食管癌细胞生物学行为的影响。方法 使用cDNA芯片技术筛选出食管癌组织和正常组织差异表达基因,并用生物信息学方法进行分析。运用TargetScan数据库对miRNA的靶基因进行预测,并用双荧光素酶报告基因检测技术进行验证。将KYSE150细胞分为空白对照组、NC mimics组和miR-495-3p mimics组。通过细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞增殖活力。用流式细胞术测定细胞周期和凋亡。通过定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)测定BUB1 mRNA的表达水平。通过蛋白质印迹法(Western blot)测量BUB1、STAT3、磷酸化(p)-STAT3、细胞周期蛋白B1(CCNB1)、细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、半胱氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)和半胱氨酸蛋白水解酶9(Caspase-9)蛋白水平。用划痕和Transwell小室实验测定细胞的迁移和侵袭能力。结果 差异表达基因参与生物学过程、信号通路和网络构建主要与细胞周期相关,BUB1是关键的核心(Hub)基因,miR-495-3p靶向调控BUB1。体外实验表明,过表达miR-495-3p能显着抑制食管癌细胞的生长、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡和G2/M期阻滞。过表达miR-495-3p处理后,食管癌细胞中Caspase-3、Caspase-9表达量升高(P<0.01),而Bcl-2、BUB1、CCNB1、CDK1、p-STAT3表达量降低(P<0.01)。STAT3信号通路也被发现在此过程中发挥着重要作用。结论 miR-495-3p可能通过下调BUB1介导STAT3信号通路影响食管癌细胞的生物学行为。

miR-21-3p靶向STAT3促进银屑病角质形成细胞增殖的研究

目的探讨miR-21-3p及其靶蛋白信号转导子和转录激活子3蛋白(STAT3)在寻常型银屑病发生过程中角质形成细胞的作用意义。方法对皮肤组织中STAT3蛋白表达情况的检测选择免疫组织化学法,对健康人群皮肤组织及银屑病患者皮损组织miR-21-3p表达量的检测选择实时荧光定量PCR法,靶基因STAT3和miR-21-3p关系的检测选择双荧光素酶报告基因。化学合成miR-21-3p模拟物、抑制剂,瞬时转染HaCaT细胞,对不同分组细胞进行CCK8、流式细胞凋亡实验,探究分析miR-21-3p调控细胞表型主要作用。对于转染细胞中STAT3蛋白表达情况,选择Western Blot检测。结果寻常型银屑病患者皮肤组织中miR-21-3p呈高表达(P<0.05)。STAT3免疫组化阳性表达定位于细胞浆,在银屑病组患者皮损组织阳性表达率为82.22%(37/45)高于正常皮肤组织(P<0.01)。双荧光素酶报告基因显示miR-21-3p与STAT3存在结合,呈靶向关系。miR-21-3p mimics促进HaCaT细胞增殖活性,抑制细胞凋亡;miR-21-3p inhibitor抑制HaCaT细胞的增殖能力,促使细胞趋向凋亡。miR-21-3p转染HaCaT过表达可对STAT3蛋白表达量产生促进,相反则降低(F=48.632,P<0.01)。结论miR-21-3p呈现正调控关系,能够靶向调控STAT3;两者共同作用参与并加重银屑病的病程,并抑制患者细胞凋亡,调节角质形成细胞增殖活性。