Stat3反义寡核苷酸对人胃腺癌MKN45细胞相关信号传导影响的研究

目的:通过研究Stat3反义寡核苷酸对人胃腺癌MKN45细胞增生活性的影响,寻求胃癌治疗中相关信号传导途径的新靶点. 方法:Stat3反义寡核苷酸是一种混合骨架寡核苷酸(MBO), 采用脂质体介导的方式将其转染人胃腺癌细胞株MKN45; 通过MTT法观察转染前后对细胞增生状态的影响;凝胶阻滞电泳(EMSA)和Western blot方法观察转染前后Stat3 DNA的结合活性和磷酸化Stat3蛋白表达的变化. 结果:Stat3反义寡核苷酸对MKN45细胞的增生有明显抑制作用;转染反义寡核苷酸后MKN45细胞中Stat3信号的组成性激活水平和磷酸化Stat3蛋白的表达分别下降了50.65%及78.86%. 结论:Stat3反义寡核苷酸能显著抑制MKN45细胞中Stat3 信号的传导,胃癌细胞株中活化的Stat3信号可作为胃癌治疗新的分子靶点.

STAT3反义寡核苷酸联合放疗对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡的影响

目的:观察STAT3反义寡核苷酸(STAT3 AS-ON)联合放疗对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡的影响。方法:体外培养Hep-2细胞,应用STAT3 AS-ON转染Hep-2细胞后,将培养细胞按是否进行放疗分为未放疗组与放疗组,未放疗组根据转染复合物的不同分为反义组、正义组及空白对照组,而放疗组分为反义+放疗组、正义+放疗组及放疗对照组。根据转染复合物的浓度(100、200、400nmol/L)又将对应各组分为反义100、反义200、反义400、正义100、正义200、正义400组。其中放疗组Hep-2细胞给予γ射线(5Gy)照射。MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:反义+放疗组的细胞存活率明显低于正义+放疗组和放疗对照组(P<0.01),且随着STAT3 AS-ON转染浓度的增加而降低,反义+放疗组的细胞凋亡率明显高于正义+放疗组和放疗对照组(P<0.01),而正义+放疗组和放疗对照组相比差异无显著性意义(P>0.05)。结论:STAT3 AS-ON联合γ射线作用于Hep-2细胞后,细胞增殖抑制和诱导凋亡作用明显增强,表明选择性阻断细胞内STAT3信号转导通路联合放疗可能为喉癌的综合治疗提供新的途径。

STAT3反义寡核苷酸对人肺腺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的探讨我们自行设计的STAT3(signal transducer and activator of transcription 3)反义核酸(ASODN)对裸鼠肺腺癌A549细胞移植瘤的成瘤能力和移植瘤的抑制作用。方法将经全硫代修饰的STAT3 ASODN加入到培养的A549细胞内,CCK-8法检测细胞生长的抑制率,然后将这种细胞接种于裸鼠颈部皮下,观察肿瘤出现的时间和肿瘤体积的变化,并计算成瘤率。同时取未经处理的A549细胞接种于裸鼠颈部皮下建立移植瘤模型,待瘤结节直径大于5 mm后,分为STAT3ASODN实验组、生理盐水组和无义寡核苷酸对照组。实验组用15 mg/kg ASODN每天1次直接瘤内注射,连续3周,隔日测量肿瘤大小。处理30 d后,剥离瘤块称质量。蛋白质免疫印迹法检测肿瘤中STAT3、p-STAT3的表达。结果 STAT3 ASODN显著抑制A549细胞生长,与无义寡核苷酸组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。STAT3 ASODN作用后的A549细胞在裸鼠皮下成瘤能力明显降低,抑瘤率达75.8%。在各组荷瘤动物模型中,生理盐水对照组和无义寡核苷酸对照组的瘤体进行性增大,而STAT3 ASODN处理组的瘤块生长缓慢,与2个对照组相比均有差异(P<0.01),处理30 d后,ASODN处理组的肿瘤质量与2个对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),STAT3 ASODN处理组裸鼠A549细胞移植瘤的生长明显受到抑制,抑瘤率为51.1%。肿瘤中STAT3蛋白表达水平以及磷酸化水平也明显下调。结论 STAT3 ASODN能降低A549细胞的成瘤率、抑制移植瘤生长。

Stat3反义寡核苷酸对喉癌Hep-2细胞放疗增敏作用的分子机制

目的探讨Stat3反义寡核苷酸(antisense oligodnucleotides,ASODN)联合放疗对喉癌Hep-2细胞的作用及其机制。方法 Hep-2细胞株传代培养,分别进行以下处理:无处理、60Co照射5Gy、不同浓度Stat3ASODN转染Hep-2细胞、不同浓度Stat3ASODN转染联合放疗,倒置荧光显微镜下观察细胞形态学改变。结晶紫法检测各组作用24h后的细胞增殖抑制率。流式细胞学检测不同浓度Stat3ASODN转染联合放疗后细胞周期的变化及不同浓度Stat3ASODN转染组、200nmol/LStat3ASODN转染组联合放疗前后对Stat3、p-Stat3、cyclin D1、p21和cdk4蛋白表达的影响。结果荧光显微镜下Stat3ASODN转染联合放疗组细胞形态改变显著,出现明显的病变。对细胞增殖抑制的作用差异显著,与单纯放疗和单纯ASODN转染组相比差异具有统计学意义(P<0.01)。流式细胞学检测显示:随着Stat3ASODN转染浓度的增加,Hep-2细胞G0/G1期比例上升,S期比例下降;Stat3、p-Stat3及cyclin D1、cdk4蛋白荧光指数呈一致性降低趋势,而p21蛋白荧光指数呈升高趋势,其中Stat3、p-Stat3、p21蛋白表达组间差别具有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示:Stat3与p-Stat3呈显著正相关(r=0.986,P<0.01)、与cdk4呈显著正相关(r=0.910,P<0.05),与p21呈负相关(r=-0.981,P<0.05);p-Stat3与cdk4呈正相关(r=0.949,P<0.05),与p21呈负相关(r=-0.917,P<0.05);p21与cdk4之间呈现一定的负相关性(r=-0.973,P<0.01);细胞抑制率的变化与Stat3、p-Stat3蛋白荧光指数的变化呈负相关(r=-0.989、r=-0.971,P<0.01)。结论 Stat3ASODN转染喉癌Hep-2细胞,通过下调Stat3蛋白的表达而对细胞周期蛋白进行调控,从而引起细胞周期分布的改变,达到增强放疗敏感性的作用。

STAT3反义寡核苷酸对人宫颈癌HeLa细胞定植和侵袭的影响

目的观察转染信号转导与转录激活因子3(STAT3)的反义寡核苷酸对人宫颈癌HeLa细胞定植和侵袭功能的影响。方法针对人STAT3的基因序列设计并合成反义寡核苷酸,用阳离子脂质体介导转染人宫颈癌He-La细胞。应用RT-PCR和Western blot法分别检测STAT3基因mRNA及蛋白表达水平,软琼脂集落培养检测细胞的定植功能,体外侵袭实验检测HeLa细胞的侵袭能力。结果转染STAT3反义寡核苷酸HeLa细胞(HeLaSTAT3-ASODN)STAT3基因的mRNA和蛋白表达水平均明显低于对照组(HeLaSTAT3-SODN)和正义组(HeLa),P<0.05;各组细胞在软琼脂中形成的克隆数和穿透Matrigel膜的细胞数分别为:HeLa组(74.31±7.62)、(44.85±6.26)个,HeLaSTAT3-SODN组(71.57±6.92)、(45.46±6.79)个,HeLaSTAT3-ASODN组(45.18±7.69)、(22.41±5.98)个。与HeLa组、HeLaSTAT3-SODN组比较,HeLaSTAT3-ASODN组克隆形成数和透膜细胞数明显减少(P<0.05)。结论 STAT3基因特异反义寡核苷酸可通过下调STAT3基因表达抑制细胞的定植和侵袭。

STAT3反义寡核苷酸纳米复合微粒对肝癌细胞的抑制作用

目的:研究利用聚酰胺胺型树枝状分子(polyamidoamine-dendrimer,PAMAM-D)递送STAT3反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,asODN)抑制人肝癌细胞(SMMC-7721)增殖的效应。方法:第7代的聚酰胺胺型树枝状分子室温下与STAT3反义寡核苷酸混合制备树形分子与反义寡核苷酸的复合物(PAMAM-asODN),应用透射电镜观察复合物的形态结构,激光粒径仪测定复合纳米微粒的粒径。MTT法检测复合纳米微粒对肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用,采用流式细胞术与TUNEL技术检测PAMAM-asODN诱导SMMC-7721细胞凋亡和细胞周期的变化,实时定量PCR分析PAMAM-asODN作用后肝癌细胞STAT3mRNA的表达水平。结果:成功制备的新型纳米复合微粒分散均匀、流动性好,其粒径约为85.45nm。MTT检测结果表明,纳米复合微粒以时间和浓度依赖的方式抑制人肝癌细胞增殖,其最高抑制率达(68.9±3.0)%。流式细胞与TUNEL技术检测表明,PAMAM-asODN可加强诱导肝癌细胞凋亡(P<0.01),使细胞周期阻滞于G2/M期。实时定量PCR的结果表明,PAMAM-asODN作用后肝癌细胞中STAT3mRNA表达较asODN作用组降低了(54±2.1)%。结论:聚酰胺胺型树枝状分子能高效递送STAT3asODN,可显著抑制肝癌细胞增殖和诱导细胞凋亡。

STAT3反义寡核苷酸纳米复合微粒的制备及特性研究

【目的】研究STAT3反义寡核苷酸纳米复合微粒的制备工艺，并对纳米复合微粒特性进行评价。【方法】将纳米技术与反义寡核苷酸技术相结合，制备STAT3反义寡核苷酸纳米复合微粒，并观察纳米微粒对限制性内切酶的抗性及其在不同pH值下的稳定性。【结果】将纳米技术与反义寡核苷酸技术相结合，制备STAT3反义寡核苷酸纳米复合微粒，并观察纳米微粒对限制性内切酶的抗性及其在不同pH值下的稳定性。【结果】在pH值为2～10的范围内，PAMAM—STAT3一asODN纳米微粒均未出现降解，且该纳米微粒具有较好的抗限制性内切酶的特性。【结论】新型STAT3反义寡核苷酸纳米微粒具有较好的抗限制性内切酶、耐酸碱的特性，为其在基因治疗中的应用提供了一定的依据。

STAT3反义寡核苷酸对HepG2肝癌细胞增殖抑制和凋亡诱导作用

目的:探讨STAT3反义寡核苷酸(ASODN)对HepG2细胞增殖的抑制作用和细胞凋亡的诱导作用。方法:HepG2细胞体外培养,人工合成并硫代修饰STAT3 ASODN,通过脂质体转染进入HepG2细胞,倒置显微镜下观察细胞形态学变化,MTT法检测细胞增殖抑制程度,原位末端标记法检测细胞凋亡指数,RT-PCR检测细胞中STAT3 mRNA的表达水平。结果:STAT3 ASODN各浓度组对HepG2细胞的增殖有明显的抑制作用,能明显诱导细胞凋亡。结论:STAT3 ASODN能够诱导HepG2细胞凋亡。

低氧条件下Stat3反义寡核苷酸对喉癌细胞Hep-2的化疗增敏作用

目的探讨低氧条件下信号转导子和转录激活子3（signaltransducerandactivatoroftranscription3，Stat3）反义寡核苷酸（antisenseoligonueleotide，AS．ON）联合化疗对Hep．2细胞凋亡及细胞周期的影响。方法以脂质体法将Stat3AS—ON转染Hep．2细胞，应用M1Tr法检测不同浓度的AS—ON转染后Hep-2细胞存活率的变化以及低氧对Hep-2细胞化疗敏感性的影响；应用流式细胞术检测低氧条件下Stat3AS—ON联合化疗对Hep-2细胞凋亡及细胞周期的影响。结果Hep-2细胞凋亡率在顺铂浓度为0～5μg/ml范围内随药物浓度上升而增加，以1μg/ml顺铂作用低氧组与常氧组Hep-2细胞凋亡率无差异（P〉0．05），3μg／ml、5μg／ml顺铂同等浓度下低氧组Hep．2细胞凋亡率低于常氧组（P〈0．01）。细胞存活率随转染Stat3AS．ON浓度的增加而下降，但不能完全抑制细胞增殖。低氧条件下Stat3AS—ON联合化疗组的细胞周期与对照组相比GgGl增加；低氧条件下Stat3AS—ON＋DDP组细胞凋亡率与空白对照组、Stat3S-ON＋DDP组、Star3AS-ON组、DDP组比较差异有统计学意义（P〈O．01）。结论Stat3AS—ON转染Hep．2细胞联合化疗在低氧条件下可诱导肿瘤细胞凋亡，增加化疗敏感性。靶向Stat3的干扰技术有望成为喉癌基因治疗的新策略，为临床辅助化疗探索一条新途径。

STAT3反义寡核苷酸对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨STAT3反义寡核苷酸的抗肿瘤机制,为乳腺癌的基因治疗提供新的实验依据。方法应用阳离子脂质体介导STAT3反义寡核苷酸转染乳腺癌MCF-7细胞,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化;采用MTT比色法检测细胞增殖状态;流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期;Westernblot检测STAT3总蛋白和p-STAT3蛋白的表达。结果STAT3反义核苷酸转染乳腺癌细胞后,能抑制MCF-7细胞的增殖,促进MCF-7细胞的凋亡,STAT3蛋白的表达和磷酸化水平下降,出现G1期阻滞。结论STAT3反义核苷酸能抑制MCF-7细胞的增殖,促进MCF-7细胞的凋亡,这将为乳腺癌的治疗提供新的方向。

Stat3反义寡核苷酸对人喉癌Hep-2细胞BALB/c裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的:研究Stat3反义寡核苷酸(AS3)对荷人喉癌Hep-2裸鼠的抑瘤作用,探求AS3对喉癌的治疗价值。方法:取对数生长期的人喉癌Hep-2细胞接种于BALB/c小鼠皮下,建立荷人喉癌Hep-2小鼠模型。随机分为空白组、对照组和不同浓度的AS3(1组、2组、3组、4组),然后腹腔内给药,1次/d,连续4周,每周2次测量体重,并记录肿瘤长径、短径,4周后各组小鼠称体重,剥离皮下移植瘤,称瘤重、计算抑瘤率。结果:AS3对人喉癌Hep-2裸鼠皮下移植瘤具有明显抑制肿瘤生长的作用,各剂量间有量效关系。各组抑瘤率明显高于对照组(P<0.01)。结论:AS3可抑制人喉癌Hep-2细胞BALB/c裸鼠皮下移植瘤的生长,可能对人喉癌的治疗有一定作用。

Survivin反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞株IL-6/STAT3信号通路的影响和意义

目的通过分析人卵巢癌细胞株转染Survivin反义寡核苷酸(ASODN)后IL-6/STAT3信号通路及其下游相关癌基因的表达以及其侵袭能力的改变,探讨Survivin ASODN在抑制人卵巢癌细胞转移中的可能作用、机制和临床价值。方法脂质体(LipofectamineTM2000)介导Survivin ASODN转染人卵巢癌SKOV3细胞株(实验组),同时设空脂质体对照,Transwell小室检测细胞株侵袭能力的改变,荧光定量PCR检测两组细胞株中白细胞介素6(IL-6)、信号转导与活化因子3(STAT3)、Survivin、血管内皮生长因子(VEGF)基因的表达,Western blot检测IL-6、STAT3、磷酸化的信号转导与活化因子3(p-STAT3)、Survivin、VEGF-A蛋白的表达。结果实验组细胞株中IL-6、STAT3、Survivin、VEGF基因表达均较对照组明显下调(P<0.05);实验组细胞株中IL-6、STAT 3、p-STAT 3、Survivin、VEGF-A蛋白表达均较对照组明显下调(P<0.05)。实验组细胞株侵袭能力较对照组明显下降(P<0.01)。结论 ASODN靶向抑制Survivin可有效降低人卵巢癌细胞侵袭转移能力,抑制IL-6/STAT3信号通路及其下游相关致癌基因的表达活性。Survivin ASODN可能在防治卵巢癌复发和转移治疗中有临床价值。

STAT3反义寡核苷酸对肺腺癌裸鼠移植瘤辐射增敏的研究

目的探讨STAT3反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对肺腺癌裸鼠移植瘤辐射增敏的影响,为提高恶性肿瘤的辐射敏感性提供新的思路和方法。方法建立裸鼠体内肺腺癌移植瘤动物模型,待瘤体直径>0.5 cm后,瘤内多点注射STAT3 ASODN,给药剂量:15 mg/kg,1次/d,连续2周,给药后2 h联合γ射线局部照射总剂量20 Gy,每次2 Gy,每周5次,连续2周,照射剂量率0.75 Gy/min,定期测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线;测量肿瘤质量,计算抑瘤率;记录存活情况,估算生存率,绘制生存曲线,计算总生存期;免疫组化检测肿瘤组织细胞内STAT3蛋白表达变化情况;Western Blot检测肿瘤组织内P-STAT3、Bcl-xL、CyclinD1蛋白表达情况。结果反义(antisense,AS)+照射(irradiation,IR)组肿瘤体积治疗第8天开始明显小于其余各组肿瘤体积(P<0.05);AS+IR组的抑瘤率为68.4%,高于IR组与AS组的之和;AS+IR组的平均总生存期为(28.38±0.96)d,明显高于IR组及无义(nonsense,NS)+IR组(P<0.005);STAT3蛋白及其下游Bcl-xL、CyclinD1蛋白表达变化明显下降,STAT3蛋白磷酸化水平也降低。结论 STAT3反义寡核酸能够增强肺腺癌裸鼠移植瘤的辐射敏感性,具有良好的放疗增敏剂临床应用开发前景。

STAT3基因反义寡核苷酸对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨信号转导与激活因子3(signal transduction and activators of transcription 3,STAT3)反义寡核苷酸在体外对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的作用。方法:人宫颈癌HeLa细胞分为空白对照组、正义组和反义组。针对人STAT3的基因序列设计并合成反义寡核苷酸,应用阳离子脂质体Lipofectamine 2000介导转染人宫颈癌HeLa细胞。应用RT-PCR和Western blot法分别检测STAT3基因的mRNA及蛋白表达水平,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期及细胞早期凋亡。结果:与正义组和对照组比较,反义组细胞的STAT3基因mRNA表达和蛋白表达均明显下降,细胞增殖能力下降,细胞早期凋亡率增加,差异均有统计学意义(P<0.05～P<0.01)。结论:STAT3反义寡核苷酸可阻断JAK/STAT3信号转导通路,抑制人宫颈癌细胞生长,促进细胞凋亡,可能成为宫颈癌治疗的新方法。

STAT1反义寡核苷酸对肺纤维化大鼠肺泡巨噬细胞分泌TNF-α、IL-8和NO的影响

目的:探讨STAT1(signaltransducerandactivatoroftranscription1)反义寡核苷酸(ASON)对博莱霉素(BLM)致肺纤维化1周大鼠肺泡巨噬细胞(AM)分泌TNF-α、IL-8和NO的影响。方法:取Wistar大鼠5只,向气管内灌注BLM复制肺纤维化模型后7d处死动物,通过支气管肺泡灌洗获取AM,并分为STAT1ASON组、STAT1正义寡核苷酸(SON)组、地塞米松(dexamethasone,DEX)组和空白对照组。分别用ASON、SON和DEX干预AM(空白对照组只加培养基),然后检测AM分泌TNF-α、IL-8和NO的能力。结果:用STAT1ASON处理AM后的培养上清中,TNF-α、IL-8和NO的含量减少,与空白对照组、SON组及DEX组相比较差异显著(P<0.05);DEX组AM的培养上清中,TNF-α、IL-8和NO的含量明显低于空白对照组和SON组(P<0.05);而空白对照组和SON组培养上清中,TNF-α、IL-8和NO的含量却无统计学意义(P>0.05)。结论:STAT1ASON和DEX能使AM分泌TNF-α、IL-8和NO的能力下降,且STAT1ASON的作用强于DEX。STAT1可作为肺纤维化治疗的靶目标。

ClC-3反义寡核苷酸对ConA诱导的T淋巴细胞增殖的影响

目的 研究ClC 3蛋白在T淋巴细胞增殖过程中的作用。方法 采用脂质体转染技术 ,将寡核苷酸导入细胞 ,免疫印迹 (WesternBlot)方法分析ClC 3蛋白表达 ;[3H] TdR参入法观察ClC 3反义寡核苷酸对细胞增殖的作用。结果 ①ClC 3反义寡核苷酸浓度依赖性地抑制ConA诱导的ClC 3蛋白的表达 ;②ClC 3反义寡核苷酸浓度依赖性地抑制ConA诱导的T淋巴细胞增殖。结论 ClC

COX-2抑制剂联合survivin反义寡核苷酸抗胰腺癌BxPC-3细胞的效应

目的:探讨COX-2抑制剂和survivin反义寡核苷酸联合应用对胰腺癌BxPC-3细胞的抗肿瘤效应及其可能机制.方法:应用胰腺癌BxPC-3细胞进行研究,将BxPC-3细胞分为4组:A组(对照组),B组(Celecoxib 80μmol/L)组,C组(300 nmol/L survivin ASODN),D组(80μmol/L celecoxib+300 nmol/L survivin ASODN).采用MTT检测细胞增殖.流式细胞仪检测细胞凋亡率,caspase-3试剂盒检测caspase-3活性,并用RT-PCR检测Bcl-2、survivin和Mcl-1的mRNA国的变化.结果:将80μmol/L celecoxib和300 nmol/L survivin反义寡核苷酸单独或联合作用于胰腺癌BxPC-3细胞24h和48h,D组细胞的存活率明显低于B,C组(24h:41.0%±0.4% vs 71.0%±2.2%,63.3%±4.5%;48h:34.2%±1.1% vs 61.6%±1.7%,55.0%±3%;P<0.01).作用24h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率显示,D组细胞的凋亡率明显高于B,C组(30.33%±3.49% vs 11.93%±1.17%,22.07%±0.93%;P<0.01).caspase-3活性在B,C,D组明显高于对照组(0.04867±0.0021,0.02967±0.0021,0.08767±0.0042 vs 0.007±0.0001;P<0.01),D组细胞的caspase-3活性明显高于B,C组(0.08767±0.0042 vs 0.04867±0.0021,0.02967±0.0021;P<0.01).用100μmol/L塞来昔布作用于胰腺癌BxPC-3细胞24h后,survivin/β-actin和Mcl-1/β-actin的mRNA的比值明显低于对照组(0.68±0.05 vs 1.05±0.06,P<0.01),而Bcl-2/β-actin的mRNA的比值无明显变化(0.99±0.02 vs 1.07±0.06,P>0.05).结论:联合应用COX-2抑制剂塞来昔布和survivin反义寡核苷酸可明显诱导胰腺癌细胞的凋亡,抑制细胞增殖,并能够明显提高caspase-3活性.COX-2抑制剂塞来昔布诱导细胞凋亡可能通过survivin和Mcl-1途径,而非Bcl-2途径.

靶向HER-2 mRNA反义寡核苷酸对SK-BR-3乳腺癌细胞Caspase-3蛋白表达的影响

目的 检测HER 2特异性的反义寡核苷酸HA82 4对SK BR 3乳腺癌细胞Caspase 3蛋白表达的影响。 方法 选用HER 2高表达的SK BR 3乳腺癌细胞株作为试验的细胞株。HA82 4合成如前所述 ,HA4为已报道的阳性序列 ,Scramble设定为随机对照序列。上述药物分别以浓度为 2 0 0nmol·L-1孵育SK BR 3细胞 8h和 36h ,之后采用逆转录PCR法与免疫细胞化学技术检测SK BR 3细胞HER 2mR NA及Caspase 3蛋白表达水平。 结果 与Scramble对照序列相比 ,HA82 4、HA4能抑制HER 2mRNA的表达 ,HA82 4作用更强 ;与Scramble相比 ,HA82 4、HA4对Caspase 3蛋白表达水平则无影响。结论 HA82 4、HA4这两种靶向HER 2mRNA反义药物对SK BR 3乳腺癌细胞株增殖的抑制作用可能与激活Caspase 3蛋白无关。

COX-2反义寡核苷酸对胰腺癌PC-3细胞株COX-2 mRNA和蛋白表达的影响

目的 探讨环氧合酶 (COX) 2反义寡核苷酸 (ODNs)对胰腺癌PC 3细胞株COX 2mRNA和蛋白表达的影响 ,并进一步阐明COX 2反义ODNs基因治疗胰腺癌的可行性。方法 设计和合成COX 2反义ODNs,体外转染胰腺癌PC 3细胞 ,然后通过荧光显微镜、RT PCR及Westernblotting证实转染效果。结果 转染COX 2反义ODNs后 ,PC 3细胞COX 2mRNA和蛋白表达均下降 ,且体现出一定的剂量和时间依赖性关系。结论 COX 2反义ODNs转染胰腺癌PC 3细胞株后 ,可下调细胞中COX 2mRNA和蛋白表达 ,COX 2反义ODNs有可能达到胰腺癌基因治疗的效果。

ATP7B基因反义寡核苷酸对卵巢癌SKOV3ipl细胞顺铂敏感性的影响

目的探讨ATP7B基因反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODNs)片段对卵巢癌SKOV3ip1细胞顺铂敏感性的影响。方法人工合成包含ATP7B mRNA翻译起始位点的ASODNs片段及作为对照的正义寡核苷酸(sense ol-igodeoxynucleotide,SODNs)片段。脂质体lipofectamine2000(LF)将ASODNs及SODNs转染卵巢癌SKOV3ip1细胞后,用RT-PCR法、流式细胞测定法、Western blot及MTT法检测SKOV3ip1细胞转染后,ATP7B基因mRNA、蛋白表达及半数抑制浓度(IC50)的变化。结果SKOV3ipl细胞以及转染ASODNs后,ATP7B与β-actin mRNA的光密度比值分别为0.831±0.06和0.203±0.07(P<0.01)。流式细胞法检测细胞内ATP7B蛋白的荧光强度由转染前的79.42±4.04下降到50.87±5.47(P<0.05)。Western blot检测SKOV3ipl细胞以及转染ASODNs后,ATP7B与actin蛋白的光密度比值分别为2.60±0.44和1.01±0.06(P<0.01)。MTT检测IC50由转染前的(126.63±12.06)μmol/L下降为(80.90±20.09)μmol/L(P<0.01)。而转染SODNs及LF的SKOV3ip1细胞中,上述指标无统计学差异(P>0.05)。结论ATP7B基因反义寡核苷酸能显著抑制卵巢癌SKOV3ip1细胞ATP7B mRNA和蛋白表达,并能增加SKOV3ip1细胞对顺铂的敏感性。