STAT3激活参与α1-肾上腺素受体引起的心肌肥厚

Janus激酶／信号传导因子和转录激活因子3（Janus Kinase／Signal Transducers and Activators of Transcription，Jak／STAT3）Jak／STAT是一条与细胞因子密切相关的细胞内信号转导通路，直接将细胞膜受体与细胞核基因表达联系起来，在介导对外界刺激的快速反应应答中具有重要作用。

IL-6通过激活JAK2/STAT3信号通路增强小鼠肺泡巨噬细胞的吞噬功能

目的 探讨白细胞介素6(IL-6)对MH-S小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响及其相关机制。方法 脂多糖(LPS)经气道滴入激发构建小鼠急性肺损伤(ALI)模型,ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-6的含量。体外培养MH-S细胞,在信号转导子与转录激活子3 (STAT3)抑制剂Stattic(5μmol/L)存在与否的情况下,再加入IL-6(10 ng/mL~500 ng/mL)刺激6 h,加入荧光微球孵育2 h后,采用流式细胞术检测MH-S细胞吞噬荧光微球情况;Western blot法检测磷酸化的Janus激酶2(p-JAK2)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、肌动蛋白相关蛋白2(Arp2)、纤维型肌动蛋白(F-actin)的表达水平。结果 鼻腔滴入LPS后,小鼠BALF中IL-6含量显著升高。随着IL-6刺激剂量的增加,MH-S细胞吞噬荧光微球的作用增强,Arp2、 F-actin蛋白的表达水平升高。100 ng/mL IL-6刺激MH-S细胞后,p-JAK2和p-STAT3蛋白的表达水平升高。阻断MH-S细胞STAT3信号后,IL-6促进细胞吞噬的效应完全消失,IL-6诱导的Arp2、 F-actin蛋白表达增加被抑制。结论 IL-6通过激活JAK2/STAT3信号通路促进MH-S细胞Arp2、 F-actin蛋白的表达增强吞噬功能。

基于STAT3信号通路研究柠檬苦素对胃癌模型小鼠免疫因子表达的影响

目的 分析柠檬苦素对胃癌小鼠模型免疫因子表达的影响并探索其作用机制。方法 选取50只SPF级小鼠,随机分为5组各10只,构建MFC胃癌荷瘤模型,建模成功后随机分为模型组、阳性对照组及柠檬苦素低、中、高剂量组并给予对应药物灌胃,1次/d,连续14 d。计算脾指数、胸腺指数及抑瘤率;流式细胞术检测CD4^(+)、CD8^(+) T细胞及其比值;酶联免疫吸附试验检测血清免疫因子白细胞介素(IL)-2、IL-10、干扰素(IFN)-γ的表达水平;免疫组化法检测胃癌组织磷酸化信号转导与转录激活因子(p-STAT3)、基质金属蛋白酶(MMP)-9阳性表达率;Western印迹法检测胃癌细胞STAT3磷酸化水平。结果 与模型组相比,阳性对照组脾指数、胸腺指数显著降低(P<0.05),柠檬苦素低、中、高剂量组脾指数、胸腺指数显著升高(P<0.05);与模型组相比,阳性对照组、柠檬苦素低、中、高剂量组抑瘤率均显著增加(P<0.05)。柠檬苦素低、中、高剂量组CD4^(+)、CD8^(+) T淋巴细胞百分数和CD4^(+)/CD8^(+)比值较模型组显著上升(P<0.05)。与模型组相比,阳性对照组IL-2、IL-10水平显著下降,IFN-γ显著上升(P<0.05);而柠檬苦素低、中、高剂量组IL-2、IFN-γ水平显著增加,IL-10显著降低(P<0.05)。与模型组相比,阳性对照组及柠檬苦素低、中、高剂量组p-STAT3、MMP-9的阳性表达率均显著下降(P<0.05)。与模型组相比,阳性对照组及柠檬苦素低、中、高剂量组第705位点酪氨酸的磷酸化STAT3蛋白(pTyr^(705)-STAT3)水平均显著降低(P<0.05)。结论 柠檬苦素能抑制胃癌小鼠模型肿瘤组织的发展,这与其提高小鼠免疫水平与抑制STAT3通路激活密切相关。

黄芩苷对慢性萎缩性胃炎小鼠JAK1、STAT3表达的影响

【目的】通过网络药理学和动物实验探讨黄芩苷对慢性萎缩性胃炎小鼠胃黏膜的修复机制。【方法】(1)应用网络药理学预测分析黄芩苷治疗慢性萎缩性胃炎的潜在关键靶点。(2)动物实验:将40只C57BL/6N小鼠随机分为正常组、模型组、维酶素组、黄芩苷组,每组10只。除正常组,其他3组小鼠采用N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)灌胃结合饥饱失常法构建慢性萎缩性胃炎模型。给药结束后,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察胃黏膜组织病理变化,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中胃泌素(GAS)和前列腺素E2(PGE2)水平变化,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法和蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测胃黏膜组织中Janus酪氨酸激酶1(JAK1)、信号转导和转录激活子3(STAT3)的mRNA与蛋白表达水平。【结果】网络药理学结果显示,黄芩苷与核心靶点JAK1、STAT3可自发结合。动物实验结果显示:与正常组比较,模型组小鼠胃黏膜组织发生萎缩,腺体排列紊乱,存在大量淋巴细胞,胃黏膜细胞凋亡指数显著升高(P<0.05),血清中GAS与PGE2水平显著降低(P<0.05),胃黏膜组织中JAK1、STAT3的mRNA与蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,维酶素组与黄芩苷组小鼠胃黏膜病变减轻,腺体排列相对整齐,结构较完整,胃黏膜细胞凋亡指数显著降低(P<0.05),血清中GAS与PGE2水平显著升高(P<0.05),胃黏膜组织中JAK1、STAT3的mRNA与蛋白表达水平显著降低(P<0.05);黄芩苷组上述各指标与维酶素组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。【结论】黄芩苷可有效修复慢性萎缩性胃炎小鼠胃黏膜病变,其机制可能与下调JAK1、STAT3的mRNA及蛋白表达有关。

麻杏石甘汤对咳嗽变异型哮喘大鼠IL-6/STAT3信号通路及TRPV1感受器的影响

【目的】探讨麻杏石甘汤对咳嗽变异型哮喘(CVA)大鼠的治疗作用及机制。【方法】将60只大鼠随机分为正常组,模型组,麻杏石甘汤低、高剂量组,麻杏石甘汤高剂量+信号转导和转录激活因子3(STAT3)激活剂Colivelin(Col)组,每组12只。除正常组外,其他各组大鼠采用腹腔注射卵清蛋白结合艾条熏蒸法构建CVA模型。对应治疗后,观察大鼠体征和咳嗽次数,肺功能仪检测气道阻力(RE),Diff-Quik染色计数嗜酸性粒细胞(EOS),苏木素-伊红(HE)染色法观察肺、支气管组织病理学特征,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测肺组织单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,Western Blot法检测肺组织白细胞介素6(IL-6)、STAT3、瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)蛋白表达水平。【结果】与正常组比较,模型组大鼠出现明显哮喘症状,肺组织可见炎性细胞浸润严重,支气管上皮细胞坏死、纤毛粘连、黏液多,RE,EOS数目,MCP-1、TNF-α含量,以及IL-6、STAT3、TRPV1蛋白表达水平均升高(P<0.05);与模型组比较,麻杏石甘汤低、高剂量组大鼠哮喘症状明显改善,肺及支气管损伤减轻,RE,EOS数目,MCP-1、TNF-α含量以及IL-6、STAT3、TRPV1蛋白表达水平呈剂量依赖性降低(P<0.05);与麻杏石甘汤高剂量组比较,麻杏石甘汤高剂量+Col组大鼠哮喘加重,肺及支气管损伤加重,RE,EOS数目,MCP-1、TNF-α含量以及IL-6、STAT3、TRPV1蛋白表达水平升高(P<0.05)。【结论】麻杏石甘汤可有效改善CVA大鼠症状,其机制与抑制IL-6/STAT3信号通路及TRPV1高表达有关。

miR21-5p靶向转录激活蛋白STAT3减轻高氧性急性肺损伤

目的探讨miR21-5p调控转录激活蛋白STAT3在高氧性急性肺损伤(HALI)中的作用及机制。方法选择40只C57BL/6J小鼠随机分为常氧组、高氧组、高氧+miR21-5p组及高氧+空载体组,吸入90%以上浓度氧气建立HALI小鼠模型。常氧组饲养于正常空气中;高氧+miR21-5p组及高氧+空载体组分别经气管导管滴入miR21-5p AAV6或空载体,饲养3周后建立HALI小鼠模型。高氧暴露48 h后,取肺组织采用ELISA试剂盒检测炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)和氧化应激标志物(SOD、MDA、ROS)水平;计算肺水含量;行HE染色观察形态学变化并行病理学评分;Tunel法检测肺组织细胞凋亡率;RT-PCR检测miR21-5p表达水平;Western blot检测STAT3、p-STAT3、Bax及Bcl-2蛋白相对表达水平。结果与常氧组比较,高氧组肺损伤病理评分、肺水含量及肺组织细胞凋亡率升高(P<0.05),炎症因子TNF-α、IL-6及IL-1β水平升高(P<0.05),MDA和ROS水平升高(P<0.05),SOD水平降低(P<0.05),STAT3、p-STAT3及Bax蛋白表达升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达下降(P<0.05);与高氧组比较,高氧+miR21-5p组肺损伤病理评分、肺水含量及肺组织细胞凋亡率降低(P<0.05),炎症因子TNF-α、IL-6及IL-1β水平降低(P<0.05),MDA和ROS水平降低(P<0.05),SOD水平升高(P<0.05),STAT3、p-STAT3及Bax蛋白表达降低(P<0.05),高Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05)。高氧组HE染色可见肺泡结构紊乱、间隔增厚,大量炎症细胞浸润,透明膜形成及肺泡萎陷,高氧+miR21-5p组HE染色结果显示肺损伤程度明显减轻。结论miR21-5p靶向转录激活蛋白STAT3活性抑制炎症反应及凋亡并维持氧化还原平衡减轻HALI。

维生素D3通过增强肝组织维生素D受体活性阻断JAK/STAT3通路减轻高胆固醇血症小鼠幽门螺杆菌感染相关胃炎

目的 探讨维生素D3(VD3)能否通过降低血脂抑制Janus激酶/信号转导子与转录激活子3(JAK/STAT3)信号通路从而减轻幽门螺杆菌(Hp)感染。方法 建立高胆固醇小鼠模型和Hp感染小鼠模型,采用VD3灌胃8周。采用实时定量PCR检测小鼠肝组织维生素D受体(VDR)、胰岛素诱导基因2(Insig-2)及小鼠胃组织胃泌素的mRNA表达,Western blot法检测胃组织JAK、STAT3、环加氧酶2(COX2)蛋白的表达,生化分析法检测小鼠血清胆固醇水平,ELISA检测各组小鼠血清白细胞介素6(IL-6)及IL-8水平,HE染色小鼠肝组织及胃组织的病变情况。结果 高胆固醇组及高胆固醇联合Hp感染组小鼠在灌胃VD3后,小鼠肝组织VDR、Insig-2的水平明显上升,胃泌素水平表达降低;胃组织JAK、STAT3及COX2蛋白的表达降低,血清中胆固醇水平降低,IL-6水平无明显变化,IL-8水平降低;与对照组相比,高胆固醇联合Hp感染组肝细胞气球样变减少,胃组织炎症减轻,胆固醇组、Hp感染组胃组织炎症也减轻。结论 VD3通过增强肝组织VDR的活性,阻断JAK/STAT3信号通路,抑制炎症因子表达减轻胃炎的程度。

JAK2/STAT3信号通路在肝内胆管细胞癌中的表达及预后

目的 探讨Janus激酶2/信号转导子与转录激活子(JAK2/STAT)3信号通路在人胆管细胞癌(ICC)组织中的表达和临床特征意义。方法 采用免疫组织化学技术检测80例ICC组织及其相应的癌旁组织中JAK2和STAT3中的表达情况,并分析两者表达与ICC患者临床病理参数之间的关系。结果 ICC组织中JAK2与STAT3蛋白的阳性表达率均高于相应癌旁组织,两者表达呈明显正相关。JAK2与STAT3与肝硬化、胆管癌栓、血管侵犯、肿瘤分化、临床分期密切相关(均P<0.05);Kaplan-Meier分析表明高表达JAK2与STAT3的患者生存率及生存期更短,预后更差;Cox模型分析表明,JAK2与STAT3是影响ICC患者生存期的独立预后因素(均P<0.05)。结论 JAK2/STAT3信号通路在ICC组织中高表达,是反映ICC发生发展的重要生物学指标。

白细胞介素9通过激活信号转导子和转录激活子3(STAT3)通路促进胰腺癌细胞的增殖和迁移

目的探讨白细胞介素9(IL-9)促进胰腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移的作用及机制。方法体外培养人胰腺癌PANC-1细胞,实验组予(5、10、20)ng/m L IL-9处理24 h,对照组不予处理。采用实时定量PCR检测PANC-1细胞白细胞介素9受体(IL-9R)的m RNA水平,CCK-8法检测肿瘤细胞的增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,TranswellTM实验检测细胞侵袭和迁移能力,Western blot法检测细胞中信号转导子与转录激活子3(STAT3)及磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白水平。STAT3抑制剂AG490预处理前后,进行IL-9处理,再采用以上方法检测细胞增殖情况以及细胞中STAT3和p-STAT3蛋白水平。结果 IL-9处理后,PANC-1细胞IL-9R m RNA水平增高、细胞增殖、侵袭和迁移能力增强,且这种促进作用随着IL-9剂量的升高而增强,但细胞凋亡率无明显改变。与对照组相比,IL-9处理后PANC-1细胞中的p-STAT3蛋白水平显著增加,但STAT3蛋白水平无明显改变。使用AG490预处理后,IL-9对PANC-1细胞增殖的促进作用减弱,且p-STAT3表达水平显著降低。结论 IL-9促进胰腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移与STAT3通路激活有关。

miR-590通过靶向STAT3增强NK细胞对膀胱癌的免疫功能

目的:在膀胱癌患者外周血自然杀伤(NK)细胞中探究微小RNA(miRNA)-590的表达及其对NK细胞免疫功能的调控机制。方法:收集31例膀胱癌患者(Tumor组)和相同例数健康体检者(Normal组)的外周血为研究对象,使用NK细胞分离试剂盒从两组患者外周血单个核细胞中分离原代NK细胞。qRT-PCR实验检测miR-590和信号转导和转录激活因子3(STAT3)在原代NK细胞中的表达;Pearson相关系数分析膀胱癌患者NK细胞中miR-590与STAT3 mRNA表达的相关性;采用生物信息学技术分析miR-590与STAT3的靶向结合位点,双荧光素酶基因报告实验进行检测;将miR-590的模拟物(miR-590 mimics)、miR-590的抑制剂(miR-590 inhibitor)及阴性对照miR-NC转染入人NK细胞系NK-92中,并应用白介素-2(IL-2)活化细胞。按处理方式的不同将NK-92细胞分为:Control组、IL-2组、IL-2+miR-NC组、IL-2+miR-590 mimics组和IL-2+miR-590 inhibitor组。ELISA检测各组细胞上清液中干扰素γ(IFN-γ)和肿瘤细胞坏死因子-α(TNF-α)的含量,细胞毒性实验检测各组NK-92细胞对膀胱癌细胞系T24细胞的杀伤效应;为探究STAT3在miR-590介导的NK细胞免疫功能中的作用,将NK-92细胞又分为IL-2+miR-590 mimic+pcDNA-NC组和IL-2+miR-590 mimic+pcDNA-STAT3组。再次使用ELISA和细胞毒性实验进行检测各组NK-92细胞对IFN-γ和TNF-α的分泌以及对T24细胞的杀伤作用。结果:与Normal组相比,miR-590在Tumor组中的表达明显降低(P<0.05),而STAT3表达升高(P<0.05),且两者在膀胱癌患者NK细胞中表达呈负相关(r=-0.641,P<0.05);生物信息学分析结果显示,STAT3的3’UTR区具有miR-590识别的序列区,双荧光素酶基因报告实验结果表明miR-590可靶向抑制STAT3的表达。与Control组相比,IL-2组、IL-2+miR-NC组、IL-2+miR-590 mimics组和IL-2+miR-590 inhibitor组中NK-92对IFN-γ、TNF-α分泌水平和对T24细胞杀伤效应均明显升高(P<0.05);与IL-2组相比,IL-2+miR-590 mimics中NK-92对IFN-γ、TNF-α分泌水平和对T24细胞杀伤效应明显升高(P<0.05),IL-2+miR-590 inhibitor组中明显降低(P<0.05),IL-2+miR-NC组无明显变化(P>0.05)。此外,与IL-2+miR-NC组相比,IL-2+miR-590 mimics组和IL-2+miR-590 mimics+pcDNA-NC组中NK-92分泌IFN-γ、TNF-α水平和对T24细胞的杀伤效应均明显升高(P<0.05),IL-2+miR-590 mimics+pcDNA-STAT3组无明显变化(P>0.05);与IL-2+miR-590 mimics组相比,IL-2+miR-590 mimics+pcDNA-STAT3组中NK-92分泌IFN-γ、TNF-α水平和对T24细胞的杀伤效应均明显降低(P<0.05),IL-2+miR-590 mimics+pcDNA-NC组无明显变化(P>0.05)。结论:miR-590在膀胱癌外周血NK细胞中表达降低,上调其表达可通过靶向抑制STAT3来增强了NK细胞对肿瘤细胞免疫毒性作用。

IFN-γ通过激活STAT3促进甲状腺上皮细胞分泌CXC趋化因子配体10(CXCL10)

目的探讨γ干扰素(IFN-γ)对甲状腺细胞分泌趋化因子的作用及机制。方法 HE染色检测桥本甲状腺炎组织中淋巴细胞浸润情况,免疫组织化学染色检测IFN-γ的表达。用500 U/mL IFN-γ处理Nthy-ori 3-1甲状腺细胞后,利用Western blot法检测信号转导子及转录激活子3(STAT3)及磷酸化的STAT3的水平。用STAT3抑制剂Stattic处理后,ELISA测定CXC趋化因子配体10(CXCL10)的变化,TranswellTM法检测淋巴细胞的迁移能力。结果与正常甲状腺组织比较,桥本甲状腺炎组织中淋巴细胞浸润较多,IFN-γ表达水平较高。与对照组比较,IFN-γ处理增加甲状腺细胞p-STAT3水平,增加CXCL10分泌和淋巴细胞迁移,而Stattic处理后CXCL10分泌减少,淋巴细胞迁移减少。结论 IFN-γ激活STAT3促进甲状腺上皮细胞分泌趋化因子,增加淋巴细胞的迁移。

CPU0213激活JAK2/STAT3通路减轻大鼠心肌缺血再灌注及氧化应激损伤

目的研究内皮素受体拮抗剂CPU0213在心肌缺血再灌注(I/R)损伤和氧化应激损伤中发挥的作用及其机制。方法为考察CPU0213在I/R中的作用,将SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注损伤(I/R)组、I/R后CPU0213处理组、I/R后经CPU0213和Janus激酶2(JAK2)特异性抑制剂AG490处理组;为考察CPU0213在氧化应激损伤中的作用,将分离鉴定后培养的心肌细胞分为对照组、H2O2氧化应激组(H2O2组)、氧化应激损伤经CPU0213处理组、氧化应激损伤后经CPU0213和AG490处理组。构建大鼠心肌I/R模型,按实验要求给予大鼠和分离的心肌细胞不同处理后,取大鼠心脏采用氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察心肌梗死面积,测定乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)活性,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,CCK-8法测定细胞生长活力,Western blot法检测Bcl2、JAK2、磷酸化JAK2(p-JAK2)、胱天蛋白酶3(caspase-3)及caspase-9,信号转导子与转录激活子3(STAT3)和磷酸化STAT3(p-STAT3)的表达。结果I/R后经CPU0213处理可降低心肌梗死面积、LDH、CK活性以及细胞凋亡率,并提高JAK2和STAT3磷酸化水平;与I/R联合CPU0213相比,I/R联合CPU0213和AG490组caspase-3、caspase-9表达量上升,Bcl2表达量明显下降,细胞活力明显下降。氧化应激损伤经CPU0213处理后降低LDH、CK活性和细胞凋亡率,提高JAK2和STAT3磷酸化水平;氧化应激损伤经CPU0213和AG490处理后caspase-3、caspase-9表达量上升,Bcl2表达量明显下降,细胞活力明显下降。结论CPU0213激活JAK2/STAT3通路能够抵抗I/R及氧化应激损伤心肌细胞的凋亡。

STAT3抑制剂Stattic激活ERK通路诱导THP-1细胞IL-8的产生及细胞凋亡

目的观察信号转导子与转录激活子3(STAT3)抑制剂Stattic对THP-1细胞产生白细胞介素8(IL-8)和细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法采用(0、1、5、10、15、20)μmol/L Stattic处理THP-1细胞0、1、3、6、12、24h,实时荧光定量PCR检测细胞IL-8、IL-6、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA水平,ELISA检测细胞培养上清液IL-8蛋白水平,流式细胞术检测THP-1细胞的凋亡,Western blot法检测细胞STAT3、细胞外信号调节激酶(ERK)的蛋白磷酸化水平;采用(0、1、5、10)μmol/L的ERK通路选择性抑制剂U0126预处理THP-1细胞,反转录PCR检测U0126对Stattic诱导THP-1细胞表达IL-8 mRNA水平的影响。结果(10~20)μmol/LStattic显著上调IL-8在THP-1细胞中的mRNA和蛋白表达,仅(15、20)μmol/LStattic能诱导THP-1细胞凋亡;Stattic处理THP-1细胞1、3、6、12、24 h,均显著上调IL-8的mRNA水平,以3 h时最为明显,在6 h以后呈时间依赖性上调IL-8的蛋白水平并诱导THP-1细胞凋亡;Stattic呈浓度和时间依赖性抑制STAT3磷酸化,时间依赖性地诱导ERK磷酸化,在(1、5、10、15、20)μmol/L时均显著诱导ERK磷酸化。另外,U0126显著抑制Stattic诱导的IL-8 mRNA表达。结论STAT3抑制剂Stattic通过激活ERK信号通路诱导THP-1细胞凋亡和IL-8产生。

西替利嗪抑制哮喘小鼠肺组织JAK2-STAT3通路激活及肥大细胞活化

目的通过构建哮喘小鼠模型,探究西替利嗪对哮喘小鼠肺组织Janus激酶2/信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)通路及肥大细胞活化的影响。方法将60只无特定病原体(SPF)级BALB/c小鼠分为对照组、模型组、西替利嗪低剂量组(2 mg/kg)、西替利嗪高剂量组(5 mg/kg)、西替利嗪联合AG490组(5 mg/kg西替利嗪联合0.4 mg/kg STAT3抑制剂AG490),每组10只。通过OVA致敏并激发构建哮喘模型,各处理组每天连续灌胃相应量西替利嗪,西替利嗪联合AG490组还需每周1次腹腔注射0.4 mg/kg AG490;对照组灌胃等剂量生理盐水直至造模结束。ELISA检测小鼠血清中组胺水平;计数肺泡灌洗液(BALF)中总细胞数;HE染色观察肺组织病变情况、甲苯胺蓝染色观察小鼠肺组织肥大细胞脱颗粒情况,免疫组织化学染色法检测肺组织类胰蛋白酶表达,Western blot法检测JAK2、磷酸化的JAK2(p-JAK2)、STAT3、磷酸化的STAT3(p-STAT3)蛋白表达。结果与对照组相比,模型组小鼠血清中组胺水平、BALF细胞总数、嗜酸性粒细胞计数、肺组织病理损伤程度、类胰蛋白酶水平和p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3表达显著增加;相较于模型组,西替利嗪低剂量组、高剂量组、西替利嗪联合AG490组小鼠血清中组胺水平、BALF细胞总数、嗜酸性粒细胞计数、肺组织病理损伤程度、类胰蛋白酶、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3表达显著降低;相较于高剂量组,西替利嗪联合AG490组血清中组胺水平BALF细胞总数、嗜酸性粒细胞计数、肺组织病理损伤程度、类胰蛋白酶、p-STAT3/STAT3表达显著降低,而p-JAK2/JAK2表达无明显变化。结论西替利嗪能够抑制哮喘小鼠肺组织JAK2/STAT3通路激活及肥大细胞活化。

小胶质细胞Stat3基因条件性敲除小鼠的构建及鉴定

目的·基于Cre-Loxp系统构建小胶质细胞Stat3基因条件性敲除小鼠并验证其敲除效率。方法·将Cx3cr1^(creERT2)与Stat3^(fl/fl)基因型小鼠多代交配繁育,直到获得足够数量的Stat3^(fl/fl);Cx3cr1^(creERT2)基因型小鼠,即条件敲除小鼠(conditional knockout,CKO);同窝Stat3^(fl/fl)基因型小鼠,即对照小鼠(wild type,WT)。利用小鼠组织提取DNA后通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR),结合特异性引物分别扩增的结果来判断小鼠基因型。在CKO及WT小鼠6周龄时通过腹腔注射他莫昔芬诱导小胶质细胞中Stat3基因的敲除;2周后,随机选取CKO小鼠(n=4)及WT小鼠(n=4),利用磁珠分选法(magnetic activated cell sorting,MACS)分选出小胶质细胞后通过实时荧光定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)技术从基因水平检测基因敲除效率;通过脑组织切片免疫荧光染色标记小胶质细胞和STAT3蛋白观察小胶质细胞中STAT3的表达情况;利用流式细胞术分别检测STAT3在小胶质细胞及脾巨噬细胞中的变化。通过尼氏染色检测神经元细胞的情况;通过脑组织切片荧光染色标记小胶质细胞,观察皮层和海马区域小胶质细胞的情况;通过流式细胞术检测小胶质细胞表型。结果·成功繁育出CKO小鼠和WT小鼠。MACS后脑细胞中小胶质细胞的占比从10%提升到85%。RT-PCR结果显示,相对于WT小鼠,CKO小鼠小胶质细胞中Stat3的mRNA相对表达量为0.3317±0.0414,mRNA水平下调(P=0.001)。脑组织免疫荧光染色结果显示,CKO小鼠小胶质细胞中STAT3蛋白的荧光强度较WT小鼠弱。脑组织流式细胞术显示:WT小鼠小胶质细胞中STAT3的阳性细胞占比为(85.30±5.69)%;CKO小鼠小胶质细胞中STAT3的阳性细胞占比为(39.70±3.88)%,STAT3表达率下降(P=0.001)。脾组织流式细胞术显示,CKO小鼠与WT小鼠脾巨噬细胞中STAT3的阳性细胞占比的差异无统计学意义(P>0.05)。尼氏染色显示,CKO小鼠与WT小鼠神经元细胞无显著差异。脑组织切片荧光染色结果显示,CKO小鼠与WT小鼠的小胶质细胞在形态上无明显差异。小胶质细胞流式细胞术显示CKO小鼠与WT小鼠小胶质细胞表型无显著差别。结论·成功构建小胶质细胞Stat3基因条件性敲除小鼠,为后续相关研究提供动物模型。

三叶青总黄酮通过STAT3信号通路诱导膀胱癌细胞凋亡

目的 探讨体外使用三叶青总黄酮(TFTH)对膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及其对信号转导与转录激活因子(STAT)3信号通路的作用机制。方法 对人膀胱癌BIU-87细胞进行体外培养,将不同浓度TFTH加入培养基对BIU-87细胞进行培养,通过细胞对数试剂盒(CCK)-8试验分别检测不同浓度TFTH(0、20、50、100μg/ml)组作用24、48 h后对细胞增殖的影响;流式细胞技术分析不同浓度TFTH作用24、48 h后对细胞凋亡率的影响;Western印迹检测不同浓度TFTH对Janus蛋白酪氨酸激酶(JAK)2、STAT3、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2相关X基因(Bax)、血管内皮生长因子(VEGF)和转化生长因子(TGF)-β1蛋白表达的影响。结果 CCK-8检测结果显示,不同浓度TFTH处理BIU-87细胞24或48 h后,对癌细胞增殖均有抑制作用(P<0.01);细胞凋亡检测结果显示,不同浓度TFTH处理BIU-87细胞24或48 h后,均有诱导癌细胞凋亡作用(P<0.01),且TFTH对细胞增殖或凋亡呈剂量时间依赖性;Western印迹结果显示,不同浓度TFTH处理后的BIU-87细胞,其JAK2、STAT3、VEGF和TGF-β1蛋白表达均明显降低,Bax蛋白表达明显升高,且呈剂量依赖性(P<0.05)。结论 TFTH可通过体外抑制膀胱癌BIU-87细胞JAK2/STAT3信号通路表达,使JAK2、STAT3、TGF-β1、VEGF蛋白表达减少,Bax蛋白表达增加,从而抑制膀胱癌BIU-87细胞增殖和诱导细胞凋亡。

ZFP36L1通过激活STAT3信号通路抑制上皮间质转化减弱人乳腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移

目的探讨锌指蛋白36样分子1(ZFP36L1)在乳腺癌发生发展中的作用和机制。方法免疫组织化学方法检测乳腺癌组织ZFP36L1的表达和定位,分析ZFP36L1的表达与乳腺癌临床病理参数及预后的关系;MCF-7人乳腺癌细胞转染ZFP36L1过表达和空白质粒,通过5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)和新型四唑氮盐(MTS)实验检测细胞增殖能力和细胞活性,Transwell^(TM)检测细胞的侵袭和迁移能力,Western blot法检测β联蛋白(β-catenin)、波形蛋白(vimentin)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、信号转导子与转录激活子3(STAT3)和磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白水平。结果与高表达ZFP36L1的乳腺癌患者相比,低表达ZFP36L1患者肿瘤体积大,TNM分期高,淋巴结及远处转移率高;过表达ZFP36L1的MCF-7乳腺癌细胞的活性减低,增殖、侵袭和迁移能力降低,E-cadherin表达升高,β-catenin、vimentin表达降低;STAT3及p-STAT3表达升高。结论ZFP36L1作为一种抑癌基因,通过上皮间质转化(EMT)和STAT3信号通路抑制了乳腺癌增殖、侵袭和迁移。

瘦素对牦牛乳腺上皮细胞中SOCS3和STAT3蛋白表达的影响及催乳素的作用

[目的]本文旨在了解瘦素(LEP)对牦牛乳腺上皮细胞(YMEC)中细胞信号转导抑制因子3(SOCS3)和信号传导及转录激活蛋白3(STAT3)蛋白表达的作用特点及催乳素(PRL)对LEP功能发挥可能产生的影响。[方法]以牦牛乳腺上皮细胞为载体,以添加和不添加催乳素(500 ng·mL^(-1))为前提,用不同剂量瘦素(0、50、100、200、400、800 ng·mL^(-1))作用YMEC 48 h以及添加JAK2/JAK3信号通路阻滞剂AG490作用48 h,采用Western blot技术检测SOCS3和STAT3蛋白的相对表达水平及STAT3蛋白磷酸化水平。[结果]无催乳素时,除50 ng·mL^(-1)瘦素外,其余各剂量均抑制SOCS3蛋白的表达,而各浓度LEP均抑制STAT3蛋白的表达,STAT3蛋白磷酸化水平高于蛋白表达水平。有催乳素时,SOCS3蛋白除了在100 ng·mL^(-1)LEP下被抑制之外,其余各剂量均有促进作用;800 ng·mL^(-1)LEP对STAT3蛋白表达有显著抑制作用,STAT3磷酸化水平除100 ng·mL^(-1)组外,均有所升高。添加AG490之后,SOCS3与STAT3都主要是通过JAK2激活诱导。[结论]高浓度瘦素会抑制SOCS3及STAT3蛋白的表达,瘦素主要通过JAK2/STAT3通路发挥生理功能,而SOCS3是JAK2/STAT3通路的负反馈调节因子;PRL能够缓解高浓度LEP导致的瘦素抵抗作用,并且能促进SOCS3和STAT3蛋白的表达。

STAT3纳米抗体的制备与功能鉴定

【目的】获得抗信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)蛋白的特异性纳米抗体,通过验证该纳米抗体在免疫组织化学和Western blotting检测中的应用及对黑色素瘤细胞B16生长的作用,对其功能进行鉴定。【方法】通过噬菌体展示淘筛技术从羊驼B16纳米抗体文库中筛选抗STAT3纳米抗体,获得阳性克隆并测序;根据序列信息设计和构建pColdⅠ原核表达质粒,并通过大肠杆菌进行纳米抗体表达;通过镍柱、分子筛和超滤管进行纯化和浓缩;利用免疫组织化学和Western blotting验证纳米抗体是否结合脑组织中STAT3蛋白;采用CCK8法分析该纳米抗体对B16细胞增殖的影响,并用Western blotting检测其对其分子路径相关基因表达的影响。【结果】经过噬菌体展示淘筛及阳性克隆测序后,成功获得1株特异性结合STAT3蛋白的纳米抗体单克隆菌株,命名为STAT3-VHH-10B;将构建的该纳米抗体的pColdⅠ原核表达载体进行诱导表达和纯化,SDS-PAGE结果显示,成功得到大小约为15 ku的抗STAT3纳米抗体;免疫组织化学和Western blotting结果显示,纯化制备的纳米抗体可成功检测到大脑组织中STAT3的表达;细胞增殖检测结果显示,该纳米抗体对B16细胞增殖具有明显的抑制作用,并下调细胞增殖路径的主要基因CycD 1、Bcl2、cMyc编码蛋白的表达。【结论】本研究成功筛选到1株抗STAT3蛋白的特异性纳米抗体,且该纳米抗体可用于免疫组织化学和Western blotting法检测组织中STAT3的表达,此外,通过与抗原结合后,抑制主要基因CycD 1、Bcl 2、cMyc的表达,从而抑制B16细胞增殖。本研究结果将为STAT3及其纳米抗体的功能研究提供新工具。

STAT3在子宫内膜癌中的表达及其临床病理意义

目的检测信号转导与转录激活因子3(STAT3)在子宫内膜癌组织中的表达,探讨其与常见临床病理参数的关系。方法选择45例子宫内膜癌患者,癌组织为观察组,癌旁内膜组织为对照组进行研究。采用免疫组织化学染色法检测STAT3的表达,分析其表达水平与各项临床病理参数的关系。结果子宫内膜癌组织中STAT3的阳性表达率明显高于癌旁内膜组织,差异具有统计学意义(P<0.001)。组织学分级为G_(2-3)级、肌层侵袭>1/2的内膜癌组织中STAT3的阳性表达率高于组织学分级为G_(1)、肌层侵袭≤1/2的癌组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论子宫内膜癌组织中STAT3的表达显著升高,其高表达与子宫内膜癌组织学分级和肌层侵袭有关,对子宫内膜癌的靶向治疗和预后评估具有一定的意义。