基于IL-6/JAK2/STAT3信号轴研究阳和平喘颗粒调控哮喘大鼠气道重塑作用机制

目的:研究阳和平喘颗粒对哮喘大鼠气道重塑及白细胞介素-6(IL-6)/Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和转录活化因子3(STAT3)信号轴在其中的作用机制。方法:选取健康雄性SD大鼠42只,随机数字法分为正常对照组7只与造模组35只,造模组采用卵清蛋白(OVA)联合氢氧化铝腹腔注射2周的方式进行致敏,正常对照组采用等量的生理盐水;2周后将造模组随机分为模型组、阳和平喘高、中、低剂量组和地塞米松组,每组7只;后4周采用OVA雾化+灌胃的方式进行激发和治疗,阳和平喘高中低组每日分别予以15.48、7.74、3.87 g/kg阳和平喘颗粒灌胃,地塞米松组予以0.0625 mg/kg地塞米松进行灌胃,其余组灌胃等量生理盐水。HE、PAS、Masson染色观察大鼠肺组织病理学变化;ELISA检测大鼠血清中IL-6、IL-23、IL-17A水平;Western blot检测肺组织中JAK-2、P-JAK2、STAT3、P-STAT3蛋白表达量;qRT-PCR检测大鼠肺组织中IL-6、JAK2、STAT3的mRNA水平。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠肺组织有大量炎性细胞浸润,杯状细胞增生、上皮下胶原纤维沉积、气道上皮增厚较为明显;血清中IL-6、IL-23、IL-17A水平显著升高(P<0.01),肺组织JAK-2、P-JAK2、STAT3、P-STAT3的蛋白表达量和IL-6、JAK2、STAT3的mRNA表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组炎性细胞浸润、杯状细胞增生、上皮下胶原纤维沉积、气道上皮增厚程度明显减轻,血清中IL-6、IL-23、IL-17A水平显著降低(P<0.01),肺组织JAK-2、P-JAK2、STAT3、P-STAT3的蛋白表达量和IL-6、JAK2、STAT3的mRNA水平显著降低(P<0.01)。结论:阳和平喘颗粒可明显缓解哮喘大鼠气道重塑,其机制可能是通过抑制IL-6/JAK2/STAT3信号轴发挥作用。

百里酚调控STAT3-铁死亡负调节轴抑制SW480细胞的增殖及作用机制研究

目的:基于STAT3-FNR轴探究百里酚对人结直肠癌SW480细胞增殖的影响及作用机制。方法:MTT法检测百里酚对SW480细胞的增殖抑制率;结晶紫染色检测百里酚对SW480细胞克隆形成能力的影响;Calcein AM活细胞荧光探针检测细胞活力;透射电镜检测SW480细胞的线粒体形态;JC-1线粒体膜电位荧光探针检测SW480细胞的线粒体膜电位;试剂盒检测百里酚对SW480细胞ROS、MDA、Fe(Ⅱ)及GSH水平的影响;qRT-PCR检测百里酚对SW480细胞STAT3-FNR轴相关mRNA表达的影响;Western Blot检测百里酚对SW480细胞STAT3-FNR轴相关蛋白表达的影响。结果:百里酚呈时间和浓度依赖性地抑制SW480细胞增殖和克隆形成能力(P<0.05或P<0.01),同时伴随着细胞活力的降低;百里酚处理的细胞呈现出线粒体形状不规则化、线粒体减小、线粒体膜密度和膜电位改变等多种铁死亡早期形态;百里酚呈浓度依赖性地升高SW480细胞中铁死亡重要指标ROS、MDA及Fe(Ⅱ)水平,降低GSH水平和STAT3、GPX4、FTH1、SLC7A11 mRNA及蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论:百里酚能通过调控STAT3-FNR轴抑制SW480细胞的增殖,并诱导铁死亡。

高迁移率族蛋白B1通过激活JAK2/STAT3轴加重神经性疼痛

目的 探讨高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)加重神经性疼痛的作用机制。方法 在脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)激活的BV-2细胞中干扰HMGB1表达,检测细胞凋亡、炎症因子分泌,以及JAK2和STAT3蛋白的磷酸化水平。检测LPS激活的BV-2细胞中JAK2和STAT3蛋白的磷酸化水平,并引入JAK2抑制剂探究JAK2/STAT3轴阻断对细胞的影响。建立HMGB1敲低的脊神经结扎(spinal nerve ligation, SNL)大鼠模型,检测脊髓组织中通路蛋白表达和炎症因子分泌,评估SNL大鼠的机械痛敏阈值和热痛敏阈值。结果 LPS处理的BV-2细胞中HMGB1表达上调,干扰HMGB1表达显著抑制细胞凋亡和炎症反应。LPS处理激活JAK2/STAT3轴,且JAK2/STAT3轴激活是由HMGB1表达上调介导的。在SNL大鼠模型中,脊髓组织中HMGB1和通路蛋白表达增加,炎症反应加重,机械痛敏阈值和热痛敏阈值均降低。通过敲低HMGB1表达,观察到HMGB1和通路蛋白的表达下调,炎症减轻,神经性疼痛缓解。结论 HMGB1通过激活JAK2/STAT3轴加重神经性疼痛。

IL-6／STAT3信号通路在脓毒症早期大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴中的表达及意义

目的探讨大鼠脓毒症早期出现的HPA轴过度激活与IL-6／STAT3信号通路的内在联系。方法24只健康雄性Wistar大鼠，随机分为正常对照组（Control组）、假手术组（Sham组）、模型组（CLP组）三组。采用盲肠结扎穿孔（CLP）法建立脓毒症模型，术后6h处死，分离出下丘脑、垂体、肾上腺组织。RT—PCR检测下丘脑组织CRH、IL-6、STAT3、SOCS3mRNA水平，垂体组织阿片促黑色素原（POMC）、IL-6、STAT3、SOCS3mRNA水平，肾上腺组织IL-6、STAT3、SOCS3mRNA水平。结果CLP组较Control组、Sham组下丘脑组织中CRH、IL-6、STAT3、SOCs3mRNA表达水平明显增加（P〈0．01），垂体组织中POMC、IL-6、STAT3、SOCS3mRNA表达水平明显增加（P〈0．01），肾上腺组织中IL-6、STAT3、SOCS3mRNA表达水平明显增加（P〈0．01）。Control组与Sham组各指标比较差异无统计学意义。结论脓毒症早期出现的HPA轴过度激活与IL-6／STAT3信号通路有着密切联系。针对IL-6／STAT3信号通路这-靶点进行干预，有望改善脓毒症状态下HPA轴的过度激活，为脓毒症的治疗提供新的思路。

阿托伐他汀钙经STAT1-caspase-3信号轴抑制膝骨关节炎大鼠关节软骨退变的研究

目的:探讨阿托伐他汀钙在膝骨关节炎(KOA)大鼠体内通过调节信号转导和转录激活因子1(STAT1)、半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达,从而对关节软骨退变的影响。方法:将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、阿托伐他汀钙治疗组,采用Hulth法建立KOA大鼠模型,实验8周后采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血清中TNF-α及IL-1β的表达水平,膝关节X线影像学检查,关节软骨HE染色行病理学观察,检测软骨组织内p-STAT1和cleaved caspase-3蛋白表达水平。结果:模型组大鼠血清中TNF-α及IL-1β含量明显高于正常组(P<0.01),而阿托伐他汀钙治疗组低于模型组(P<0.01)。阿托伐他汀钙治疗组X线表现与模型组相比,膝关节关节间隙、关节软骨破坏和骨赘形成等均有改善。阿托伐他汀钙能明显减轻膝关节病理变化,与模型组相比,阿托伐他汀钙治疗组关节软骨Mankin's评分显著降低(P<0.01)。模型组大鼠关节软骨p-STAT1和cleaved caspase-3蛋白表达水平明显高于正常组(P<0.01),而阿托伐他汀钙治疗组低于模型组(P<0.01),且相关分析表明,pSTAT1和cleaved caspase-3之间呈直线正相关(r=0.986,P<0.01)。结论:阿托伐他汀钙经STAT1-caspase-3信号轴抑制膝关节炎症反应,从而改善KOA关节软骨的退变。

基于mTOR/STAT3信号轴探讨桑色素诱导非小细胞肺癌A549细胞自噬的机制

目的基于mTOR/STAT3信号轴探讨桑色素诱导非小细胞肺癌A549细胞自噬的机制。方法将A549细胞分为空白组及30、60、90、120、150μg·m L^(-1)桑色素组,培养24、48、72 h后采用CCK-8法检测细胞增殖活性,计算细胞抑制率。将A549细胞分为空白组及30、90、150μg·m L^(-1)桑色素组,培养细胞14 d后通过克隆形成实验检测细胞增殖情况;培养细胞24 h后,采用Beyo ClickTMEd U-488检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;吖啶橙染色检测细胞自噬情况;透射电镜观察细胞自噬体形成情况;Western Blot法检测细胞中凋亡、自噬及m TOR/STAT3信号轴相关蛋白的表达水平。将A549细胞分为空白组、空白+氯喹(10μg·m L^(-1))组、桑色素(30、150μg·m L^(-1))组、桑色素(30、150μg·m L^(-1))+氯喹(10μg·m L^(-1))组,干预48 h后采用CCK-8法检测细胞活性,计算细胞存活率。结果与空白组比较,干预24 h后60、90、120、150μg·m L^(-1)桑色素组的A549细胞抑制率显著升高(P<0.05,P<0.001);干预48、72 h后桑色素30、60、90、120、150μg·m L^(-1)组的A549细胞抑制率显著升高(P<0.001);30、90、150μg·m L^(-1)桑色素组的A549细胞集落数及绿色荧光的增殖阳性细胞数均显著减少(P<0.01,P<0.001),细胞凋亡率均显著升高(P<0.01,P<0.001),cleaved-PARP蛋白表达水平显著升高(P<0.001);90、150μg·m L^(-1)桑色素组A549细胞的p-P38/P38MAPK蛋白表达水平显著升高(P<0.01,P<0.001);30、90、150μg·m L^(-1)桑色素组A549细胞中出现不同程度的橙黄色荧光,以90、150μg·m L^(-1)桑色素组的橙黄色荧光显著;150μg·m L^(-1)桑色素组A549细胞胞浆中分别出现了自噬体和自噬溶酶体;150μg·m L^(-1)桑色素组A549细胞的LC3-Ⅱ蛋白表达明显上调(P<0.05),90、150μg·m L^(-1)桑色素组A549细胞的Atg16L1-Ⅱ蛋白表达显著上调(P<0.001),p-m TOR/m TOR及p-STAT3/STAT3蛋白表达显著下调(P<0.001)。与桑色素(150μg·m L^(-1))组比较,桑色素(150μg·m L^(-1))+氯喹(10μg·m L^(-1))组的A549细胞存活率明显升高(P<0.05)。结论桑色素能够抑制肺癌A549细胞的增殖,促进其凋亡,并诱导自噬,其作用机制可能与m TOR/STAT3信号轴有关。

三叶青调节Th17/Treg平衡抗类风湿性关节炎的作用及机制研究

目的:探讨三叶青治疗类风湿性关节炎的可能机制。方法:采用大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂制备类风湿性关节炎模型大鼠,灌胃给予不同剂量三叶青提取物连续3周。检测大鼠关节肿胀度、关节炎指数、关节热度、抓力;ELISA检测血浆中白介素(IL)-6、IL-17、IL-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及类风湿因子(RF)水平;全自动血液流变仪检测血液流变学指标;流式细胞术测定全血中辅助性T细胞17(Th17)与调节性T细胞(Treg)比例;HE染色观察踝关节组织形态学;Western blot法检测关节滑膜组织中IL-6、RORγt、Foxp3、STAT3及p-STAT3蛋白表达。结果:三叶青能有效降低类风湿性关节炎模型大鼠关节肿胀度、关节炎指数及关节热度,升高抓力;降低Th17/Treg比例及血浆IL-6、IL-17、TNF-α、RF水平,升高IL-10水平;下调关节滑膜组织中IL-6、STAT3、p-STAT3、RORγt蛋白表达,上调Foxp3蛋白表达,改善踝关节组织形态学改变。结论:三叶青具有明显的抗类风湿性关节炎作用,其机制可能与调控IL-6/STAT3/IL-17轴调节Th17/Treg平衡有关。

黄葵敛肠汤通过调节IL-6/STAT3通路和IL-23/IL-17炎性轴改善DSS诱导的UC模型小鼠的炎症作用

目的:探讨黄葵敛肠汤治疗硫酸葡聚糖钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的疗效及可能的分子机制。方法:用DSS诱导小鼠溃疡性结肠炎,予以黄葵敛肠汤和美沙拉嗪治疗。通过疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分和组织学评分评估肠道损伤,通过酶联免疫吸附法检测结肠组织中白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-23和IL-17含量,通过定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qPCR)测定结肠中IL-6、IL-23、IL-17、糖蛋白130(glycoprotein 130,gp130)、维甲酸受体相关孤儿核受体(retinoic acid receptor-related orphan nuclear receptorγ,RORγt)及信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)含量。通过蛋白印迹测量结肠中STAT3和p-STAT3的表达。结果:高剂量的黄葵敛肠汤和美沙拉嗪能明显增加小鼠体质量,显著降低DAI评分,改善肠道炎症,显著降低组织学评分,明显减少IL-6、IL-23、IL-17、gp130、RORγt和STAT3等IL-6/STAT3信号通路和IL-23/IL-17炎性轴相关炎性因子。Western blot发现,黄葵敛肠汤可抑制DSS诱导的溃疡性结肠炎组织中p-STAT3表达。结论:黄葵敛肠汤能减轻溃疡性结肠炎的炎症,特别是高剂量的黄葵敛肠汤能显著改善肠道炎症,具有和美沙拉嗪相当的疗效。黄葵敛肠汤可能通过抑制IL-6/STAT3信号通路和IL-23/IL-17炎性轴起抗炎作用。

miRNA 146b在多种疾病中的作用及其机制研究进展

miRNA146b（简称miR-146b，其人类同源性miRNA也被称为hs-miR-146b-5p）同miRNA146a均是miRNA146家族中的一员。鼠miR-146b由位于19号染色体19qC3位置的MIRNA146B基因编码，而鼠miR-146a由位于11号染色体的11qA5位置的MIRNA146A基因编码.