湖羊STAT5a基因第10内含子多态性及其与泌乳性状的关联分析

【目的】探究绵羊信号传感器和转录激活器5A(signal transducer and activator of transcription 5A,STAT5a)基因第10内含子多态位点及其与泌乳性状的相关性,为湖羊分子标记选育提供参考依据。【方法】采集71只湖羊母羊血液,通过PCR扩增和Sanger测序法检测湖羊STAT5a基因第10内含子单核苷酸多态性(SNP)位点,并利用SAS 9.4软件分析STAT5a基因SNP位点多态性与7~56 d湖羊产奶量、乳脂率、乳蛋白率、体细胞数等性状的相关性。【结果】湖羊STAT5a基因第10内含子检测出1个SNP位点:g.41838147 A>G,在该位点发现AA、AG和GG 3种基因型。卡方适合性检验表明,g.41838147 A>G突变位点偏离Hardy-Weinberg平衡状态(P<0.05)。多态信息含量(PIC)计算显示,g.41838147 A>G位点为中度多态(0.25G位点的GG基因型个体7~56 d总产奶量极显著或显著高于AA、AG基因型(P<0.01;P<0.05),平均乳糖率显著高于AA基因型(P<0.05);AG、GG基因型个体的平均体细胞数显著低于AA基因型(P<0.05)。【结论】STAT5a基因第10内含子存在1个多态性位点,与湖羊总产奶量、平均乳糖率和平均体细胞数均有显著关联性。

调控SUV39H1/2对水牛乳腺细胞增殖及STAT5a表达的影响

为了解SUV39H1/2基因对水牛STAT5a基因表达的调控作用,首先克隆不同长度水牛STAT5a启动子区,采用双荧光素酶方法检测启动子活性.利用SUV39H1/2-shRNA慢病毒感染水牛乳腺上皮细胞,检测细胞增殖及相关基因表达变化,并分析DNA甲基化水平.结果显示:克隆获得的2190 bp,355 bp,417 bp STAT5a启动子片段均具有活性,2190 bp片段活性显著高于其他两个片段(p<0.05),2190 bp启动子区存在sp1,p300,p53,NF-kB等转录结合位点.下调SUV39H1/2基因表达后,乳腺上皮细胞周期阻滞在S期,G0/G1期细胞比例无显著差异,G2期比例显著减少(p<0.05).qRT-PCR结果显示,抑制SUV39H1/2基因表达使乳腺上皮细胞分化及乳蛋白合成相关基因STAT5a,mTOR,且乳脂合成相关基因srebp1,fabp3表达水平均显著降低(p<0.05);STAT5a启动子区甲基化程度为31.5%,高于对照组15.5%.结果表明:抑制SUV39H1/2基因表达能够促进水牛乳腺上皮细胞增殖;SUV39H1/2基因可能通过调控STAT5a启动子甲基化水平,进而调控乳腺上皮细胞增殖分化、乳汁和乳蛋白合成相关基因表达.

弥漫大B细胞淋巴瘤中STAT5A的表达及意义

目的探讨信号转导与转录激活因子5A(signal transducer and activator of transcription 5A,STAT5A)在弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)中的表达及临床意义。方法采用免疫组化法检测106例DLBCL中STAT5及磷酸化STAT5A^(Tyr694)(pSTAT5A^(Y694))的表达,分析STAT5核表达水平及pSTAT5A^(Y694)表达水平与DLBCL临床病理特征及预后的相关性。结果STAT5核表达与骨髓浸润(P=0.004)、治疗反应(P=0.001)相关,其在有骨髓浸润、疾病进展/稳定患者中的表达高于无骨髓浸润、部分缓解(partial response,PR)/完全缓解(complete response,CR)患者。pSTAT5A^(Y694)表达水平与Ki-67增殖指数(P=0.022)、治疗反应(P=0.003)相关,其在Ki-67增殖指数≥75%、疾病进展/稳定患者中的表达高于Ki-67增殖指数<75%、PR/CR患者。STAT5核表达以及pSTAT5A^(Y694)表达水平与其它临床病理特征均无关(P均>0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示:STAT5核阳性DLBCL患者的总生存期(overall survival,OS)低于阴性患者(P=0.0117);且pSTAT5A^(Y694)阳性患者的OS低于阴性患者(P=0.0102)。单因素和多因素Cox回归分析显示:STAT5核表达水平(P=0.243)、pSTAT5A^(Y694)表达水平(P=0.093)是影响OS的相关因素,但不是预后的独立影响因素。结论STAT5核表达以及pSTAT5A^(Y694)表达与DLBCL患者的治疗反应相关。STAT5核阳性、pSTAT5A^(Y694)阳性DLBCL患者的OS比阴性患者缩短;STAT5核表达水平、pSTAT5A^(Y694)表达水平是影响OS的相关因素,但不是预后的独立影响因素。

中国荷斯坦牛STAT5A基因遗传多态性与泌乳性状的相关分析

【目的】研究STAT5A基因多态性与中国荷斯坦牛泌乳性状的相关性,为进一步加快育种进程提供参考依据。【方法】利用PCR-SSCP技术对279头中国荷斯坦牛的STAT5A基因的P1和P2两个位点进行群体遗传学检测;计算其基因频率和基因型频率,并对多态性与泌乳性状进行相关性分析。【结果】发现在STAT5AP1和STAT5AP2两个位点上分别存在3种多态以及7种单倍型组合。STAT5AP1位点的AA、GG和AG的基因型频率分别为0.2401、0.1470和0.6129,A和G的基因频率分别为0.5466和0.4534,不同基因型对第1胎产奶量、乳蛋白率和第2胎乳蛋白率存在显著影响;STAT5AP2位点的CC、TT和CT的基因型频率分别为0.7527、0.0036和0.2437,C和T的基因频率分别为0.8746和0.1254,不同基因型对第2胎乳蛋白率有显著影响;7种单倍型组合AACC、AGCC、AACT、AGCT、GGCT、GGCC和AATT的频率分别为0.1864、0.4624、0.0502、0.1505、0.0430、0.1039和0.0036,不同单倍型与第1和2胎产奶量以及乳蛋白率存在相关性。【结论】STAT5A基因不同基因型和单倍型组合与中国荷斯坦牛产奶量和乳蛋白率存在相关性,但与乳脂率不相关。

荷斯坦奶牛STAT5A基因的SNPs检测及其与产奶性状的关联分析

根据GenBank公布的牛STAT5A基因的2个SNPs(AJ237937和AF079568)的引物序列,采用PCR-SS-CP方法对758头中国荷斯坦奶牛进行了STAT5A基因多态性检测,并将其与5个产奶性状进行了关联分析。在SNP1的9501碱基处发现A→G突变;SNP2中发现2个连锁点突变,即12 440位T→C和12 550位的CCT插入/缺失;方差分析结果表明:SNP1对乳蛋白率有显著影响(P<0.05);SNP2对产奶量有极显著影响(P<0.01),对乳脂量、乳蛋白量有显著影响(P<0.05);单倍型组合对产奶量和乳蛋白量有极显著影响(P<0.01),对乳脂量有显著影响(P<0.05)。多重比较分析表明SNP2的AB基因型的产奶量、乳脂量和乳蛋白量的最小二乘均数极显著(P<0.01)或显著(P<0.05)高于基因型AA;而单倍型组合H1H2的产奶量、乳脂量和乳蛋白量的最小二乘均数显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于其它4种单倍型组合;H3H4对产奶量和乳蛋白量的效应极显著高于其它4种单倍型组合(P<0.01)。结果提示:STAT5A基因可以作为奶牛产奶性状的候选分子遗传标记。

崂山奶山羊LEP和STAT5a基因对泌乳和生长性状的影响

【目的】探讨JAK-STAT通路中瘦素(Leptin,LEP)和信号转导子和转录激活子5a(signal transducers and activators of transcription,STAT5a)基因在崂山奶山羊群体中的遗传变异、交互作用及与生产性状的关联性。【方法】以174只崂山奶山羊泌乳母羊为实验群体,其中89只来自种羊场,有完整的产奶量记录;85只来自育种户。利用DNA混池测序和候选基因直接测序技术检测LEP基因外显子2、外显子3和STAT5a基因外显子10、外显子16在该群体中的多态性,并采用最小二乘法分析了多态性位点与乳成分、校正产奶量、生长性状的关联效应。【结果】在所研究的群体中,LEP基因外显子2、3和STAT5a基因外显子10、16上均不存在多态性。LEP基因内含子2上存在一个A→G的单核苷酸替换,对于泌乳和生长性状而言,模型和场别效应均达到显著水平,该位点对育种场中校正产奶量和尻宽、育种户中体高有显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)影响;STAT5a基因内含子9上存在A→G的单核苷酸替换和T→C的单核苷酸替换,这两个突变为连锁突变,对泌乳性状没有显著影响(P>0.05),对整个群体体长和胸围有显著(P<0.05)影响,对育种户胸围有极显著(P<0.01)影响。【结论】在崂山奶山羊中发现候选基因LEP和STAT5a存在多态性,相互之间没有交互作用,L393位点对育种场中校正产奶量和尻宽、育种户中体高有显著效应,S163/S206位点对整个群体的体重、体长和胸围,对育种户胸围有显著效应。因此,LEP和STAT5a基因可以作为崂山奶山羊产奶量及部分生长性状的遗传标记。

七氟烷预处理对心脏瓣膜置换术患者炎性反应及心肌组织GSK3β、STAT5A表达的影响

目的探讨七氟烷预处理对体外循环（cardiopulmonary bypass,CPB）下心脏瓣膜置换术患者心肌损伤的影响及潜在机制。方法我院择期行心脏瓣膜置换术患者24例,完全随机分为2组（n=12）：七氟烷预处理组和静脉麻醉对照组。麻醉维持：七氟烷预处理组于麻醉诱导插管后开始吸入1MAC七氟烷20 min,再洗脱10 min;静脉麻醉对照组术中不吸入七氟烷。于麻醉诱导后即刻（T0）、主动脉开放2 h（T1）、6 h（T2）、24 h（T3）、48 h（T4）采集桡动脉血并分离血浆,采用ELISA测定TNF-α、IL-6浓度,双向测流免疫法测定心肌肌钙蛋白Ⅰ（cardiac troponinⅠ,c TnⅠ）浓度及免疫抑制法测定磷酸肌酸同工酶（creatine phosphokinase isoenzyme,CK-MB）活性;于七氟烷洗脱后CPB前取右心耳组织,用Western blot检测糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase kinase 3β,GSK3β）、STAT5A磷酸化水平表达。结果与T0比较,2组T1～T3时的c TnⅠ、TNF-α、IL-6浓度及CK-MB活性均升高（P〈0.05）;与对照组比较,预处理组T1～T2时的TNF-α、T1～T3时的IL-6的浓度均降低（P〈0.05）,而c TnⅠ浓度、CK-MB活性2组差异无统计学意义（P〉0.05）;与对照组比较,预处理组患者的右心耳组织的GSK3β、STAT5A磷酸化水平明显增高（P=0.046 9、0.005 8）。结论七氟烷预处理减轻心脏瓣膜置换术患者的炎症反应并且可能通过增加心肌组织GSK3β、STAT5A磷酸化表达介导心肌保护效应。

水牛STAT5a和STAT5b基因启动子克隆及其活性分析

为了解转录激活与信号转导因子5(STAT5)在水牛乳腺发育及泌乳生理中的功能,对水牛STAT5a和STAT5b基因的5′调控区启动子序列进行了克隆,并比较其活性.根据GenBank已公布的牛STAT5a和STAT5b基因序列设计特异性引物,以广西本地水牛乳腺组织基因组DNA为模板,通过PCR法分别扩增不同长度STAT5a和STAT5b基因启动子片段并进行生物信息学分析.结果表明:克隆得到的水牛STAT5a基因启动子片段(P1和P2)大小是500bp,700bp,STAT5b基因启动子片段(P3,P4和P5)大小是500bp,800bp,1 500bp.在线分析结果显示,仅P2片段中存在高甲基化位点,且富含SP1,AP2等转录因子结合位点.将构建的不同长度启动子片段分别连入pGL3-Basic载体,分别转染水牛乳腺上皮细胞,检测荧光素酶表达水平.与未转染组相比,P1~P5质粒转染组的荧光素酶比值均显著提高(p<0.05);添加5mg/mL质量浓度催乳素(PRL)处理乳腺上皮细胞,P3质粒转染组的荧光素酶比值显著高于其他各组(p<0.05).以上结果表明,水牛STAT5a和STAT5b基因启动子活性均受到PRL调节,两者表达水平在水牛乳腺上皮细胞中不同,且STAT5b基因表达受PRL调控更为明显.

STAT5a和STAT5b蛋白在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:探讨信号转导和转录激活因子-5a(STAT5a)和信号转导和转录激活因子-5b(STAT5b)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及意义。方法:用免疫组化SP法检测40例手术切除的NSCLC和20例正常肺组织中STAT5a和STAT5b的表达。结果:STAT5a和STAT5b在NSCLC中的表达明显高于正常肺组织(P<0.01),STAT5a和STAT5b的表达与患者的年龄、肿瘤大小、组织分化程度及组织类型、淋巴结转移及TNM分期等病理因素无关。在NSCLC中,STAT5b与患者的性别有相关性(P<0.05),其中女性患者表达高于男性患者(P<0.05)。STAT5a与NSCLC中关系比STAT5b密切,在NSCLC的发生中,STAT5a和STAT5b蛋白表达没有相关性。结论:STAT5a和STAT5b蛋白可能促进NSCLC的形成,但与肿瘤的进展可能无关,STAT5b蛋白与性别有一定的相关性。在NSCLC的发生过程中,STAT5a与STAT5b蛋白可能是各自独立发挥作用的,无协同作用。STAT5a在NSCLC的发生中发挥的作用可能更大。

槟榔江水牛STAT5A基因多态性及MspI PCR-RFLP遗传标记的建立

[目的]信号转导及转录激活因子(STAT5A)基因主要参与哺乳动物乳腺组织中细胞因子的信号转导,对泌乳活动具有重要的调控作用。[方法]根据牛的STAT5A基因序列设计引物,本文采用直接测序和PCR-RFLP技术首次研究了槟榔江水牛STAT5A基因多态性。[结果]共检测到38个SNP位点,其中4个SNP位于外显子,34个SNP位于内含子,4个外显子SNP没有导致氨基酸的变化,属于同义突变。内含子15中的一个C/T变异产生了一个MspI酶切位点,因此我们建立了PCR-RFLP检测标记。本研究计算了24个SNP位点在槟榔江水牛群体中的等位基因频率及基因型频率,结果显示21个处于Hardy-Weinberg平衡状态,3个偏离Hardy-Weinberg平衡状态。[结论]本研究结果表明,槟榔江水牛STAT5A基因存在高度多态性,可能与槟榔江水牛的遗传背景有关。SNP的发现及PCR-RFLP标记的建立为进一步研究STA5A基因变异与槟榔江水牛经济性状的关系提供了重要基础资料。

贵州本地山羊STAT5A基因第10外显子SNP研究

利用黔北麻羊、贵州黑山羊和贵州白山羊构建DNA池,设计1对引物扩增其STAT5A基因第10外显子及部分内含子序列。PCR产物纯化后进行双向测序。DNAStar和BLAST分析确定多态性位点。利用生物信息学软件分析SNPs位点对STAT5A基因RNA二级结构、STAT5A蛋白二级及三级结构的影响。结果表明:在扩增的STAT5A基因中筛选到3个SNPs:C-32A、G+71A和G+158A,其中G+71A为错义突变,导致编码的丙氨酸(Ala)变为苏氨酸(Thr);C-32A和G+158A均在内含子区,不参与氨基酸编码。SNPs位点对STAT5A基因RNA二级结构和STAT5A蛋白结构均有一定影响。

转录因子Stat5a对乳腺癌细胞增殖的影响及其表观遗传学机制探讨

目的探讨转录因子Stat5a对人类乳腺癌细胞(MCF-7)增殖的影响及表观遗传学机制。方法利用腺病毒介导的基因转移技术,使MCF-7大量表达转录因子Stat5a,应用活细胞计数(MTS)法检测细胞增殖情况,并以染色质免疫共沉淀(ChIP)方法,检测p53基因启动子区域组蛋白甲基化程度。最后以实时定量PCR进一步确认p53基因表达水平。结果携带Stat5a cDNA的腺病毒感染后,MCF-7的数量呈剂量依赖式地增加。当病毒感染增殖活性(MOI)分别为10、20及30时,MCF-7的细胞密度较对照组细胞分别增加7.603 1%、18.123 7%及24.898 7%。染色质免疫共沉淀分析表明,Stat5a明显导致p53基因启动子区域组蛋白甲基化(H3K27Me3)增加,p53基因表达水平下降。结论 Stat5a导致MCF-7抑癌基因p53启动子组蛋白甲基化,使启动子活性降低,导致细胞的异常增殖。

STAT5A基因rs319502多态性与缺血性脑卒中痰瘀证凝血功能及炎性反应显著关联

目的:探讨STAT5A基因rs3198502多态性位点与缺血性脑卒中痰瘀证及其血脂代谢、凝血功能、炎性反应的关联。方法:共纳入缺血性脑卒中痰瘀证患者及对照各550例,采用MassARRAY SNP技术对rs319502位点进行基因分型。以PLINK、SPSS软件进行统计分析。结果:STAT5A基因的rs319502位点与缺血性脑卒中痰瘀证发生风险的关联无统计学意义(P> 0. 050)。rs3198502位点与缺血性脑卒中痰瘀证患者的D-D[隐性模型:β(95%CI)=1. 85(0. 29-3. 42),Padj=0. 021]、INR[隐性模型:β(95%CI)=2. 40(0. 20-4. 61),Padj=0. 033]、PLT[显性模型:β(95%CI)=14. 51(1. 79-27. 23),Padj=0. 026]水平的相关性具有统计学意义。rs3198502与缺血性脑卒中痰瘀证患者的C反应蛋白水平的相关性具有统计学意义[加性模型:β(95%CI)=-7. 75(-14. 47--1. 03),Padj=0. 025;显性模型:β(95%CI)=-9. 33(-18. 42--0. 24),Padj=0. 046]。结论:STAT5A基因3198502位点可能影响缺血性脑卒中痰淤证的凝血功能、炎性反应。

STAT5A基因有效siRNA序列的筛选及其对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的筛选针对STAT5A基因有效的siRNA,研究抑制STAT5A基因的表达对人肝癌HepG2细胞增殖、周期及凋亡的影响,探讨STAT5A基因在肝癌发生发展中的作用。方法设计并化学合成针对STAT5A基因三个靶点的siRNA,采用脂质体法转染人肝癌细胞HepG2,分别用半定量RT-PCR、Western blot技术检测转染后HepG2细胞STAT5A mRNA和蛋白表达的变化,从中筛选出一段干扰效率最显著的siRNA;用该siRNA转染HepG2细胞,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果三段STAT5A基因的siRNA均对HepG2细胞中STAT5A mRNA和蛋白表达产生了不同程度的抑制作用,其中以siRNA-3697的干扰效率最高,STAT5A mRNA和蛋白的表达抑制率分别为72.03%和66.27%(P<0.05);转染后1～4 d细胞生长速度减慢、增殖显著抑制(P<0.05);转染后48 h细胞凋亡率为37.33%(P<0.05)。结论成功筛选出针对STAT5A基因有效的siRNA;该siRNA可特异地阻断HepG2细胞STAT5A基因的表达,抑制细胞生长,诱导细胞凋亡。

抑制STAT5A基因的表达对人肝癌HepG2细胞增殖的影响及其机制研究

目的:研究抑制STAT5A基因的表达对人肝癌HepG2细胞增殖的影响,并对其影响肝癌细胞增殖的机制进行探讨,为STAT5A基因在肝细胞癌中的功能研究提供实验依据。方法:构建针对STAT5A基因的shRNA真核表达载体,脂质体法转染人肝癌细胞HepG2,采用半定量RT-PCR的方法检测细胞中STAT5A mRNA的变化;蛋白质印迹技术检测转染前后细胞中STAT5A蛋白、细胞周期蛋白Cyclin D1蛋白表达的变化;采用MTT法检测细胞增殖的情况。结果:酶切及测序结果显示shRNA表达载体均构建成功,转染HepG2细胞48h后,与对照组相比,RT-PCR结果显示实验组细胞中STAT5A mRNA的抑制率为72.03%(P<0.05),蛋白质印迹法显示STAT5A蛋白的抑制率为66.27%(P<0.05),细胞周期蛋白Cyclin D1蛋白表达下降47.16%(P<0.05),同时MTT法显示细胞生长速度减慢、增殖抑制明显。结论:抑制STAT5A基因的表达可有效抑制HepG2细胞的增殖,其机制可能是通过下调Cyclin D1的表达实现的。

河流型与沼泽型水牛STAT5A基因序列多态性分析

信号转导与转录激活因子家族(STATs)是一组介导靶细胞内多种肽类激素和细胞因子活性的转录因子。因此,STAT5A基因近年被确定为一个与普通奶牛泌乳性状相关的候选基因,但目前在水牛中该基因的研究报道还比较少。本研究采用PCR产物直接测序技术对60头河流型水牛和300头沼泽型水牛样品的STAT5A基因外显子7,8,9,13和16序列及内含子8序列、内含子16部分序列进行了群体变异检测,并对检测结果进行了群体遗传和比较基因组学分析。在水牛STAT5A基因中共检测到12个SNP位点,其中在外显子中检测到4个SNP位点,内含子中检测到8个SNP位点。在外显子8和外显子13中各检测到2个SNP位点,在外显子8中为c.924C>T和c.975C>T替换,在外显子13中为c.1485A>G和c.1551C>T替换。它们均为同义替换,只存在于河流型水牛中。在内含子8中检测到7个SNP位点,在内含子16中检测到1个SNP位点。在内含子中检测到的SNP位点全部存在于河流型水牛中,在沼泽型水牛中只存在其中的2个SNP位点(c.989+144G>T,c.989+177A>G)。本文结果揭示河流型与沼泽型水牛STAT5A基因SNP位点群体遗传组成不同,在河流型水牛中检测到的SNP位点大多在沼泽型水牛中已纯合。比较基因组学分析显示,水牛与普通牛、牦牛和绵羊的STAT5A基因序列差异较大,水牛具有不同的SNP位点分布模式,但水牛与普通牛和牦牛在氨基酸序列水平上差异较小。

MAPK信号通路及STAT3、STAT5A/B在银屑病皮损中表达增高

目的检测寻常型银屑病患者皮损中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt)、蛋白S6激酶1(p70S6k)、核因子-кB(NF-кB)、信号传导及转录激活因子3(STAT3)、信号传导及转录激活因子5(STAT5A/B)、钙反应元件结合蛋白(CREB)的蛋白表达情况,探讨这些因子在银屑病中的作用。方法收集27例寻常型银屑病患者皮损(银屑病组)及19例健康者皮肤组织(对照组),应用高灵敏MILLIPLEX MAP试剂及Luminex仪检测并定量9种因子的蛋白表达,比较两组之间的表达水平。结果 p38、ERK1/2、JNK、STAT3、STAT5A/B在银屑病组的表达量高于对照组,差异均有统计学意义(均P <0.05);STAT5A/B与p38、ERK1/2、JNK、STAT3呈正相关(均P <0.05)。结论 JNK、p38、ERK1/2、STAT3、STAT5A/B在寻常型银屑病中表达增高,且STAT5A/B与p38、ERK1/2、JNK、STAT3有正相关性,表明STAT5A/B与MAPK因子互相作用,可能共同参与银屑病发病机制。

hsa_circ_0005221通过miR-339-5p/STAT5A通路促进前列腺癌进展

目的:研究hsa_circ_0005221通过miR-339-5p/STAT5A通路调控前列腺癌的进展的分子机制。方法:核质分离检测hsa_circ_0005221和miR-339-5p在细胞中的表达定位;Pulldown检测hsa_circ_0005221结合的miRNA;软件预测结合荧光素酶报告基因确定与hsa_circ_0005221结合的RNA是miR-339-5p;定量PCR检测hsa_circ_0005221在前列腺上皮细胞和前列腺癌细胞的表达量;在前列腺癌细胞分别转染hsa_circ_0005221过表达质粒和siRNA测DU145和LNCaP增殖、侵袭和迁移能力及上皮间质转化(EMT)和凋亡水平;在敲低hsa_circ_0005221基础上,转染miR-339-5P mimics和inhibitor测DU145和LNCaP增殖、侵袭和迁移能力及EMT标志性蛋白、STAT5A和凋亡水平。结果:hsa_circ_0005221在前列腺癌细胞的表达水平明显高于前列腺上皮细胞。核质分离实验表明hsa_circ_0005221、miR-339-5P均主要在胞质中表达。在DU145和LNCaP敲低hsa_circ_0005221,其增殖、侵袭、迁移及EMT能力明显下降;凋亡水平增加。过表达hsa_circ_0005221则结果相反。在软件预测排名前5的miRNA中,Pulldown实验结果显示与hsa_circ_0005221结合的有miR-339-5P、miR-17、miR-520H;敲低或过表达hsa_circ_0005221,miR-339-5P变化最明显。荧光素酶报告基因结果显示hsa_circ_0005221与miR-339-5P结合。在DU145和LNCaP敲低hsa_circ_0005221基础上转染miR-339-5P mimics,其增殖、侵袭和迁移能力明显下降,凋亡水平增加,E-cad水平增加,N-cad水平下降,STAT5A表达水平增加。敲低hsa_circ_0005221基础上上转染miR-339-5P mimics则结果相反。结论:hsa_circ_0005221通过miR-339-5p/STAT5A通路促进前列腺癌的进展。

转录因子STAT5A、STAT5B在T淋巴母细胞淋巴瘤中的表达及临床意义

目的探索信号转导和转录激活因子STAT5A及STAT5B蛋白在T淋巴母细胞淋巴瘤(T-cell lymphoblastic lymphoma,T-LBL)组织中的表达情况,分析其与患者疾病发生、发展及生存预后的相关性。方法应用免疫组织化学染色检测确诊的104例T-LBL组织和40例反应性增生淋巴结组织(对照)中的STAT5A及STAT5B蛋白的表达。结果STAT5A和STAT5B在T-LBL组织中的阳性率显著高于对照组组织。STAT5A在T-LBL中的表达与患者的性别具有相关性,STAT5B蛋白在T-LBL中的表达与患者年龄呈负相关,与患者有无B症状(B症状:不明原因的高热、体重减轻、盗汗)有相关性。STAT5A与STAT5B共表达与患者Ann Arbor分期呈正相关。结论STAT5A及STAT5B蛋白与T-LBL各临床病理参数及生存预后密切相关,可作为诊断及治疗T-LBL的潜在新靶标。

过表达D5 Stat5a促进前列腺癌细胞增殖及IGFBP-7基因启动子组蛋白甲基化

目的探讨D5 Stat5a对人类前列腺癌细胞增殖的影响及其对胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP-7)表达的影响。方法常规培养人前列腺癌细胞(DU145及PC3),并随机分为四组:对照组及三个实验组。对照组以不含外源基因的腺病毒感染,三个实验组细胞则以携带D5 Stat5a cDNA的腺病毒感染,其病毒感染增殖活性(MOI)依次为10、20及30。四组细胞均在培养液中加入催乳素(50 ng/m L)以启动细胞信号转导。运用MTS方法检测细胞增殖;实时定量PCR检测抑癌基因IGFBP-7及EZH2 mRNA水平;染色质免疫共沉淀技术(ChIP)检测IGFBP-7基因启动子区域组蛋白甲基化程度;蛋白质印迹法检测IGFBP-7蛋白表达。结果携带D5 Stat5a cDNA的腺病毒感染能够呈剂量依赖式地促进前列腺癌细胞(DU145及PC3)增殖。如PC3细胞,对照组细胞的相对活细胞数为(1.362±0.018),三个实验组相对活细胞数分别为(1.453±0.022)(P>0.05)、(1.649±0.020)(P<0.05)及(1.829±0.027)(P<0.05)。实时定量PCR及蛋白印迹证明D5 Stat5a过表达明显下调IGFBP-7的表达。DU145及PC3对照组细胞IGFBP-7 mRNA相对值分别为(0.796±0.023)及(0.871±0.046),而感染携带D5 Stat5a cDNA的腺病毒(MOI 30)后,其IGFBP-7 mRNA相对值则分别下降到(0.148±0.019)(P<0.01)及(0.078±0.021)(P<0.01)。染色质免疫共沉淀分析(ChIP-Assay)证实,D5 Stat5a导致IGFBP-7基因启动子区域组蛋白甲基化(H3K27Me3)水平显著上升。DU145细胞对照组与实验组,其沉淀DNA比例分别为(0.0176±0.0030)%及(0.0650±0.0099)%,两者差异有高度统计学意义(P<0.01)。此外,实时定量PCR检测表明,D5 Stat5a引起组蛋白甲基转移酶EZH2 mRNA大幅上升。DU145细胞对照组及D5 Stat5a感染组相对mRNA水平分别为(0.0033±0.0004)及(0.0160±0.0035),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论转录因子D5 Stat5a能够显著促进人类前列腺癌细胞的增殖,其主要的表观遗传学机制在于D5 Stat5a增加EZH2基因表达,导致抑癌基因IGFBP-7启动子区域组蛋白甲基化,使启动子活性降低,IGFBP-7表达下降,是导致前列腺癌细胞的异常增殖分子机制之一。