湖羊STAT5a基因第10内含子多态性及其与泌乳性状的关联分析

【目的】探究绵羊信号传感器和转录激活器5A(signal transducer and activator of transcription 5A,STAT5a)基因第10内含子多态位点及其与泌乳性状的相关性,为湖羊分子标记选育提供参考依据。【方法】采集71只湖羊母羊血液,通过PCR扩增和Sanger测序法检测湖羊STAT5a基因第10内含子单核苷酸多态性(SNP)位点,并利用SAS 9.4软件分析STAT5a基因SNP位点多态性与7~56 d湖羊产奶量、乳脂率、乳蛋白率、体细胞数等性状的相关性。【结果】湖羊STAT5a基因第10内含子检测出1个SNP位点:g.41838147 A>G,在该位点发现AA、AG和GG 3种基因型。卡方适合性检验表明,g.41838147 A>G突变位点偏离Hardy-Weinberg平衡状态(P<0.05)。多态信息含量(PIC)计算显示,g.41838147 A>G位点为中度多态(0.25G位点的GG基因型个体7~56 d总产奶量极显著或显著高于AA、AG基因型(P<0.01;P<0.05),平均乳糖率显著高于AA基因型(P<0.05);AG、GG基因型个体的平均体细胞数显著低于AA基因型(P<0.05)。【结论】STAT5a基因第10内含子存在1个多态性位点,与湖羊总产奶量、平均乳糖率和平均体细胞数均有显著关联性。

牛泌乳性状候选基因STAT 5A研究进展

泌乳性状是牛属动物的重要经济性状,也是其经济价值的体现,牛的泌乳性状不仅受环境等因素影响,还受基因调控。STAT5A基因作为泌乳性状候选基因,在乳腺发育、乳蛋白合成等方面发挥重要作用。该文对牛STAT5A基因的染色体定位、组织表达以及核苷酸多态性与泌乳性状的影响等方面相关研究进行阐述,旨在为牛属等哺乳动物的选种选育提供理论依据,为中国种质资源开发与利用提供技术支撑。

STAT5A基因rs319502多态性与缺血性脑卒中痰瘀证凝血功能及炎性反应显著关联

目的:探讨STAT5A基因rs3198502多态性位点与缺血性脑卒中痰瘀证及其血脂代谢、凝血功能、炎性反应的关联。方法:共纳入缺血性脑卒中痰瘀证患者及对照各550例,采用MassARRAY SNP技术对rs319502位点进行基因分型。以PLINK、SPSS软件进行统计分析。结果:STAT5A基因的rs319502位点与缺血性脑卒中痰瘀证发生风险的关联无统计学意义(P> 0. 050)。rs3198502位点与缺血性脑卒中痰瘀证患者的D-D[隐性模型:β(95%CI)=1. 85(0. 29-3. 42),Padj=0. 021]、INR[隐性模型:β(95%CI)=2. 40(0. 20-4. 61),Padj=0. 033]、PLT[显性模型:β(95%CI)=14. 51(1. 79-27. 23),Padj=0. 026]水平的相关性具有统计学意义。rs3198502与缺血性脑卒中痰瘀证患者的C反应蛋白水平的相关性具有统计学意义[加性模型:β(95%CI)=-7. 75(-14. 47--1. 03),Padj=0. 025;显性模型:β(95%CI)=-9. 33(-18. 42--0. 24),Padj=0. 046]。结论:STAT5A基因3198502位点可能影响缺血性脑卒中痰淤证的凝血功能、炎性反应。

STAT5A基因有效siRNA序列的筛选及其对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的筛选针对STAT5A基因有效的siRNA,研究抑制STAT5A基因的表达对人肝癌HepG2细胞增殖、周期及凋亡的影响,探讨STAT5A基因在肝癌发生发展中的作用。方法设计并化学合成针对STAT5A基因三个靶点的siRNA,采用脂质体法转染人肝癌细胞HepG2,分别用半定量RT-PCR、Western blot技术检测转染后HepG2细胞STAT5A mRNA和蛋白表达的变化,从中筛选出一段干扰效率最显著的siRNA;用该siRNA转染HepG2细胞,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果三段STAT5A基因的siRNA均对HepG2细胞中STAT5A mRNA和蛋白表达产生了不同程度的抑制作用,其中以siRNA-3697的干扰效率最高,STAT5A mRNA和蛋白的表达抑制率分别为72.03%和66.27%(P<0.05);转染后1～4 d细胞生长速度减慢、增殖显著抑制(P<0.05);转染后48 h细胞凋亡率为37.33%(P<0.05)。结论成功筛选出针对STAT5A基因有效的siRNA;该siRNA可特异地阻断HepG2细胞STAT5A基因的表达,抑制细胞生长,诱导细胞凋亡。

抑制STAT5A基因的表达对人肝癌HepG2细胞增殖的影响及其机制研究

目的:研究抑制STAT5A基因的表达对人肝癌HepG2细胞增殖的影响,并对其影响肝癌细胞增殖的机制进行探讨,为STAT5A基因在肝细胞癌中的功能研究提供实验依据。方法:构建针对STAT5A基因的shRNA真核表达载体,脂质体法转染人肝癌细胞HepG2,采用半定量RT-PCR的方法检测细胞中STAT5A mRNA的变化;蛋白质印迹技术检测转染前后细胞中STAT5A蛋白、细胞周期蛋白Cyclin D1蛋白表达的变化;采用MTT法检测细胞增殖的情况。结果:酶切及测序结果显示shRNA表达载体均构建成功,转染HepG2细胞48h后,与对照组相比,RT-PCR结果显示实验组细胞中STAT5A mRNA的抑制率为72.03%(P<0.05),蛋白质印迹法显示STAT5A蛋白的抑制率为66.27%(P<0.05),细胞周期蛋白Cyclin D1蛋白表达下降47.16%(P<0.05),同时MTT法显示细胞生长速度减慢、增殖抑制明显。结论:抑制STAT5A基因的表达可有效抑制HepG2细胞的增殖,其机制可能是通过下调Cyclin D1的表达实现的。

河流型与沼泽型水牛STAT5A基因序列多态性分析

信号转导与转录激活因子家族(STATs)是一组介导靶细胞内多种肽类激素和细胞因子活性的转录因子。因此,STAT5A基因近年被确定为一个与普通奶牛泌乳性状相关的候选基因,但目前在水牛中该基因的研究报道还比较少。本研究采用PCR产物直接测序技术对60头河流型水牛和300头沼泽型水牛样品的STAT5A基因外显子7,8,9,13和16序列及内含子8序列、内含子16部分序列进行了群体变异检测,并对检测结果进行了群体遗传和比较基因组学分析。在水牛STAT5A基因中共检测到12个SNP位点,其中在外显子中检测到4个SNP位点,内含子中检测到8个SNP位点。在外显子8和外显子13中各检测到2个SNP位点,在外显子8中为c.924C>T和c.975C>T替换,在外显子13中为c.1485A>G和c.1551C>T替换。它们均为同义替换,只存在于河流型水牛中。在内含子8中检测到7个SNP位点,在内含子16中检测到1个SNP位点。在内含子中检测到的SNP位点全部存在于河流型水牛中,在沼泽型水牛中只存在其中的2个SNP位点(c.989+144G>T,c.989+177A>G)。本文结果揭示河流型与沼泽型水牛STAT5A基因SNP位点群体遗传组成不同,在河流型水牛中检测到的SNP位点大多在沼泽型水牛中已纯合。比较基因组学分析显示,水牛与普通牛、牦牛和绵羊的STAT5A基因序列差异较大,水牛具有不同的SNP位点分布模式,但水牛与普通牛和牦牛在氨基酸序列水平上差异较小。

转录因子STAT5A启动子荧光素酶报告基因质粒的构建及鉴定

目的:利用分子克隆的方法构建转录因子STAT5A启动子荧光素酶报告基因质粒并鉴定其效应。方法:以乳腺癌MCF7细胞基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增STAT5A基因的启动子序列,并将其克隆至荧光素酶报告基因质粒pGL3-Enhancer中,经过菌液扩增、酶切、测序等方法获得目的质粒,并通过双荧光报告基因实验进一步验证其功能。结果:构建的STAT5A启动子荧光素酶报告基因质粒pGL3-STAT5A-pro-luc-E序列正确,且具有转录活性。在双荧光报告基因实验中发现重组载体pGL3-STAT5A-pro-luc-E荧光素酶的相对活性约为阴性对照pGL3-Enhancer的8倍(P<0.01),而pGL3-STAT5A-pro-N-luc-E荧光素酶的相对活性约是阴性对照pGL3-Enhancer的6倍(P<0.01)。结论:本项目成功构建了转录因子STAT5A启动子荧光素酶报告基因质粒,为进一步研究STAT信号转导及转录激活蛋白信号通路提供了重要的研究工具。

绵羊STAT5a基因intron10和exon12遗传特征分析

【目的】研究绵羊STAT5a基因第10内含子和第12外显子的遗传多态性和群体遗传特征。【方法以2个多羔绵羊品种湖羊(140只)和多浪羊(144只)及单羔羊藏绵羊(217只)为研究对象,应用PCR-SSCP方法分析其STAT5a基因第10内含子和第12外显子的遗传多态性和群体遗传特征。【结果】绵羊STAT5a基因第10内含子发现13 210A>G突变,检测到3种基因型(AA、AG和GG)和2个等位基因(A和G);第12外显子上发现14 827A>G突变,该突变属于同义突变,检测到3种基因型(MM、MN和NN)和2个等位基因(M和N)。在绵羊STAT5a基因第10内含子和第12外显子中,杂合子AG和MN分别为优势基因型,基因型频率在多羔绵羊和单羔绵羊品种间差异极显著(P<0.01)。3个绵羊品种的多态信息含量均处于中度多态,藏绵羊的卡方值处于Hardy-Weinberg平衡状态,而湖羊和多浪羊偏离了Hardy-Weinberg平衡状态。【结论】绵羊STAT5a基因具有多态性,且基因型频率在不同产羔数品种间差异极显著(P<0.01)。

新疆褐牛乳房炎抗性相关基因的表达及生物信息学分析

文章旨在分析新疆褐牛乳房炎抗性相关基因的分子生物学功能,为分子标记辅助育种工作在新疆褐牛乳房炎抗性性状中的研究奠定理论基础。试验采用DAVID 6.8软件对课题组前期研究及相关文献报道的乳房炎抗性相关基因(共20个基因)进行功能GO富集及KEGG信号通路分析。采用String 10.0数据库进行蛋白相互作用网络分析,结合生物信息学分析和相关文献的研究结果,挑选出JAK 2和STAT5A基因,通过使用实时荧光定量PCR技术检测JAK2、STAT5A基因在不同乳房健康程度的新疆褐牛血液中的相对表达量。GO富集分析得到,20个基因主要涉及细胞膜、免疫应答和调节防御反应等生物过程;KEGG富集分析发现,这些基因主要参与JAK-STAT信号通路、趋化因子信号通路、ErbB信号通路等;PPI分析发现,20个基因中有8个基因之间存在直接或间接联系;实时荧光定量试验发现,JAK2、STAT5A基因在健康新疆褐牛血液的表达量极显著或显著高于患乳房炎新疆褐牛(P<0.01;P<0.05)。通过生物信息分析和实时荧光定量试验,进一步从分子水平探讨了不同乳房健康程度的新疆褐牛与JAK2、STAT5A基因表达之间的内在联系。

STAT5A基因表达对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡影响的观察

目的:研究抑制STAT5A基因的表达对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响,为其作为肝癌基因治疗的新分子靶点提供实验依据,并对RNAi实验方法的优化进行探讨。方法:构建2个针对STAT5A基因不同位点的RNA干扰(RNAi)真核表达载体,为减少脱靶效应和细胞毒性,采用两载体共转染的方法转染人肝癌细胞HepG2,分别采用半定量RT-PCR、蛋白质印迹法检测转染前后细胞中STAT5A mRNA和蛋白表达的变化;采用MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:酶切及测序结果显示,STAT5A基因两位点的shRNA表达载体均构建成功;两载体共转染HepG2细胞48h后,与对照组相比,RT-PCR结果显示实验组细胞中STAT5A mRNA的抑制率约为66%,P<0.05;蛋白质印迹法检测结果显示,STAT5A蛋白的抑制率约为58%,P<0.05;同时MTT法显示实验组较对照组在转染后24～96h内细胞生长速度减慢、增殖抑制明显(P<0.05),流式细胞仪检测实验组细胞凋亡率为(34.68±0.78)%,明显高于阴性对照组(5.12±1.09)%和空白组(4.75±1.65)%,P<0.05。结论:成功构建了针对STAT5A基因的RNA干扰真核表达载体,两载体共转染可有效抑制STAT5A基因的表达,并能抑制细胞生长、诱导细胞凋亡。

牦牛STAT5A基因组织表达及其突变对乳品质性状的影响

信号转导与转录激活因子5A(signal transduction and activator of transcription 5A,STAT5A)作为调控乳蛋白表达的乳腺特异性转录因子,其基因突变影响乳品质性状。本研究应用实时荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)检测甘南牦牛STAT5A基因在12个组织中的相对表达量,应用聚合酶链式反应-单链构象多态性(polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism,PCR-SSCP)检测牦牛STAT5A基因多态性,分析基因突变对乳品质性状的影响。结果表明,STAT5A基因在甘南牦牛12个组织中均有表达,在乳腺、心脏、脾脏和肺脏高度表达且显著高于其他组织(p<0.05),在肝脏、皮下脂肪、肾脏、瘤胃、背最长肌和小肠中度表达。本研究在牦牛STAT5A基因exon 5-intron 5、exon 8-intron 8及intron9-exon 10区发现c.606G>A、c.1191+4C>T、c.1194+81T>C和c.1282-38C>T的SNPs表现为中度或低度多态。STAT5A基因突变影响部分胎次甘南牦牛乳品质性状,其中exon 5-intron 5区第3胎基因型B1B1个体及intron 9-exon 10区第2胎A3B3个体乳脂率和总固体物质百分含量均显著高于其他个体(p<0.05),第4胎intron 9-exon 10区基因型A3A3个体乳脂率也显著高于其他个体(p<0.05)。本结果为牦牛乳品质性状的分子遗传研究提供了基础数据。