下调STC2基因表达对前列腺癌细胞增殖及凋亡的影响研究

目的探讨抑制斯钙素-2(stanniocalcin-2,STC2)基因表达对前列腺癌细胞增殖及凋亡的影响。方法通过Lipofectamine TM2000脂质体介导法将siRNA阴性对照组和STC2-siRNA组转染人前列腺癌PC-3细胞,未转染的细胞作为空白对照组,48 h后收集细胞,Western bloting检测各组细胞中STC2的蛋白表达;CCK8及流式细胞仪分别检测细胞的增殖及凋亡情况;Western bloting检测增殖相关蛋白ki67、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)家族Bcl-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)及PI3K/AKT信号通路磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶(pAKT)的蛋白表达。结果 STC2-siRNA转染PC-3细胞后STC2的蛋白表达显著低于空白对照组(P<0.05);阴性对照组细胞OD值及细胞凋亡率与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05),而STC2-siRNA组细胞OD值显著低于空白对照组,凋亡率显著高于空白对照组(P<0.05);阴性对照组ki67、Bcl-2、Bax、PI3K和p-AKT蛋白表达与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05),STC2-siRNA组ki67、Bcl-2、PI3K和p-AKT蛋白表达均显著低于空白对照组,Bax蛋白表达显著高于空白对照组(P<0.05)。结论 STC2基因表达的抑制可降低前列腺癌细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,其机制与调节ki67、Bcl-2、Bax及PI3K/AKT信号通路表达有关。

STC2基因在乳腺癌中的表达及抑制其表达对癌细胞生物学特性的影响研究

目的:探讨斯钙素-2(STC2)基因在乳腺癌中的表达及抑制其表达对癌细胞增殖、周期及凋亡的影响。方法:RT-PCR及Western blot分别检测乳腺癌组织中STC2基因的mRNA及蛋白表达,并分析其与病理特征的关系;将STC2-siRNA转染人乳腺癌MCF-7细胞,另设空白对照组(Control)和阴性对照组(NC-siRNA),转染48 h后,Western blot检测各组细胞中STC2、ki67、细胞周期素(cyclin D1)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase3)、Notch1、Hes1蛋白表达;CCK8检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。结果:STC2基因在乳腺癌中的mRNA及蛋白表达均显著高于癌旁组织(P<0.05);STC2基因表达与乳腺癌患者年龄、组织学分级及是否发生转移无关(P>0.05),与病理分期、肿瘤大小相关(P<0.05);NC-siRNA组STC2的蛋白表达与Control组差异无统计学意义(P>0.05),STC2-siRNA组STC2的蛋白表达显著低于Control组(P<0.05);STC2-siRNA组细胞存活率、S期和G2/M细胞及ki67、cyclin D1、Notch1、Hes1蛋白表达显著低于Control组,细胞凋亡率、G0/G1期细胞及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于Control组(P<0.05)。结论:STC2基因在乳腺癌中高表达,其表达与病理分期和肿瘤大小相关,抑制其表达可降低癌细胞的增殖,阻滞细胞于G1期,并诱导细胞凋亡,其机制与下调ki67、cyclin D1和上调Cleaved caspase3表达及下调Notch1信号通路有关。

骨肉瘤差异表达基因的生物信息学分析及关键基因筛选

目的筛选成骨型骨肉瘤与正常成骨细胞的差异表达基因, 寻找成骨型骨肉瘤发生、发展的关键基因。方法从Gene Expression Omnibus(GEO)数据库获得正常成骨细胞和骨肉瘤组织的基因表达数据集GSE33382, 采用R语言的limma包筛选正常成骨细胞和成骨型骨肉瘤的差异表达基因, 对差异表达基因进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。采用String数据库构建蛋白交互网络, 应用Cytoscape软件的分子复合物检测(MCODE)插件筛选互作网络中的网络模块, 应用Cytoscape软件中的BiNGO模块对MCODE筛选得到的前3个主要模块所包含的差异表达基因进行基因本体(GO)富集分析。采用MCC算法筛选蛋白互作网络中前10个关键基因。从GEO数据库获得骨肉瘤的基因表达和生存数据集GSE39055, 采用Kaplan-Meier法进行生存分析。选取2005年1月至2015年12月福建医科大学附属第一医院收治的48例成骨型骨肉瘤患者的资料进行验证, 采用免疫组化法测定骨肉瘤组织中STC2蛋白的表达, 结合患者的临床资料进行生存分析。结果从GSE33382数据集中共鉴定出差异表达基因874个, 其中下调基因402个, 上调基因472个。KEGG富集分析显示, 差异表达基因主要与p53信号通路、谷胱甘肽代谢、细胞外基质受体相互作用、细胞黏附分子、抗叶酸盐耐受、细胞衰老等通路有关。互作网络中最重要的前10个关键基因为GAS6、IL6、RCN1、MXRA8、STC2、EVA1A、PNPLA2、CYR61、SPARCL1和FSTL3, 其中只有STC2的表达与骨肉瘤患者的生存率有关(P<0.05)。验证结果显示, 48例成骨型骨肉瘤组织中STC2蛋白表达与肿瘤大小、Enneking分期有关(均P<0.05)。25例STC2高表达, 中位生存时间为21.4个月;23例STC2低表达, 中位生存时间为65.4个月, STC2高表达组患者的生存率低于低表达组(P<0.05)。结论生物信息学分析方法可有效筛查成骨型骨肉瘤和正常成骨细胞的差异表达基因, STC2是骨肉瘤预后判断的重要预测因子之一。