山羊STEAP1基因和EIF2B4基因多态性与繁殖性能的关联分析

为探究候选基因STEAP1和EIF2B4与山羊繁殖性能的关联性,本实验利用MassARRAY■技术对STEAP1和EIF2B4基因的4个候选多态性位点(SNPs)进行分型,探究其在云上黑山羊(n=544)、济宁青山羊(n=133)和辽宁绒山羊(n=91)3个群体中的遗传学特征,并分析其与山羊繁殖性能(包括产羔数、初生窝重和断奶窝重)的关联性。结果表明,STEAP1 g.45853158 C>T和EIF2B4 g.72016288 T>G在不同品种山羊(济宁青山羊和辽宁绒山羊)中的基因型分布存在极显著差异;而STEAP1 g.45857345 C>T和g.45857371T>A基因型分布在山羊不同群体中差异不显著;在云上黑山羊高产群体和低产群体中,所有候选位点的基因型频率和基因频率均无显著差异;所有基因候选位点均与产羔数、初生窝重和断奶窝重无显著关联;STEAP1基因的位点g.45853158 C>T在不同繁殖性能群体中差异显著,生物信息学分析表明,突变造成STEAP1编码蛋白二级空间结构发生变化,可作为云上黑山羊繁殖性能的分子标记,但不适合进行窝选;STEAP1基因的另外2个SNPs位点g.45857371 T>A和g.45857345 C>T在不同繁殖性能群体中无显著差异,不适合作为云上黑山羊繁殖性能选育的分子标记。

STEAP1基因的体外转录

目的:建立STEAP1基因的体外转录模型,为进一步研究其功能奠定基础。方法:应用RT-PCR的方法从前列腺癌组织中钓取STEAP1全长cDNA,TA克隆后测序,亚克隆入pSP64载体,构建体外转录用载体STEAP1-pSP64。同时,通过PCR构建具有SP6RNA聚合酶结合位点的STEAP1体外转录盒。应用体外转录试剂盒,对比STEAP1-pSP64与STEAP1体外转录盒转录效率。结果:(1)成功从人前列腺癌组织中钓取了STEAP1全长cDNA,测序发现无一碱基错配。(2)成功构建了STEAP1-pSP64载体和STEAP1体外转录盒,两者转录效率的比较表明STEAP1-pSP64载体转录RNA的量明显高于STEAP1体外转录盒。结论:成功构建了两种STEAP1体外转录模型,并证明STEAP1-pSP64载体的转录效率高于STEAP1体外转录盒。本研究为进一步研究STEAP1的功能奠定了基础。