钙感受器STIM1在小鼠主动脉平滑肌收缩反应中的作用研究

目的探讨钙感受器STIM1在小鼠主动脉平滑肌收缩反应中的作用。方法采用Cre-lox重组技术制备平滑肌特异性STIM1敲除小鼠(sm-STIM1-KO);采用离体血管张力测定方法,测定sm-STIM1-KO小鼠主动脉对不同血管收缩剂反应,并给予不同的钙通道阻断剂,观察血管收缩变化。结果sm-STIM1-KO小鼠制备成功。sm-STIM1-KO小鼠钙库操纵的钙通道(SOCC)介导的血管收缩消失;与野生型相比,sm-STIM1-KO小鼠对Phe、5-HT和U46619总的收缩反应无明显变化,但在有钙和无钙的K-H溶液中,经硝苯地平孵育后,两组血管收缩均被抑制,且sm-STIM1-KO小鼠收缩明显低于野生型小鼠(P<0.01);在含硝苯地平的高钾溶液中,Phe引起的快相收缩没有变化,慢相收缩下降(P<0.01);sm-STIM1-KO小鼠肌浆网钙释放介导的血管收缩达峰速度和下降速度明显加快(P<0.05)。结论STIM1是SOCC介导的血管收缩的必须组成成分,且参与肌浆网钙释放介导的血管收缩反应。

沉默Orai1通过调控内质网应激抑制急性脑梗死大鼠海马神经元凋亡

目的:探讨下调Orai1对急性脑梗死大鼠神经功能的保护作用及可能机制。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham)、模型组(model)、Orai1干扰组(shRNA-Orai1)和阴性对照组(shRNA-NC),15只/组,采用改良Longa线栓法制作急性脑梗死大鼠模型。于造模后24 h,按照Zea-Longa评分标准评估各组大鼠神经功能,TTC法检测各组大鼠脑梗死面积,荧光探针法检测海马组织内Ca^(2+)浓度,TUNEL染色检测海马组织神经元凋亡,Western blot检测大鼠海马组织中凋亡相关蛋白、内质网应激相关蛋白及Orai1和STIM1蛋白表达水平。结果:与sham组相比,model组大鼠神经功能评分升高(P<0.01),脑梗死面积增多(P<0.01),海马组织中Ca^(2+)浓度升高(P<0.01),海马组织神经元凋亡率及凋亡蛋白Cleaved-Caspase-3和Bax表达水平升高(P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平降低(P<0.01),内质网应激相关蛋白CHOP、GRP78、IRE-1和Caspase-12蛋白表达水平升高(P<0.01),Orai1和STIM1蛋白表达水平升高(P<0.01);与model组和shRNA-NC组相比,shRNA-Orai1组大鼠神经功能评分降低(P<0.01),脑梗死面积减少(P<0.01),海马组织中Ca^(2+)浓度降低(P<0.05),海马组织神经元凋亡率及凋亡蛋白Cleaved-Caspase-3和Bax表达水平降低(P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平升高(P<0.01),内质网应激相关蛋白CHOP、GRP78、IRE-1和Caspase-12蛋白表达水平降低(P<0.01),Orai1和STIM1蛋白表达水平降低(P<0.01)。结论:下调Orai1基因表达可改善急性脑梗死大鼠神经功能,减少脑梗死面积和神经细胞凋亡,其机制可能与平衡海马内Ca^(2+)浓度、抑制内质网应激相关。

钙库操纵性钙通道在人循环纤维细胞中的表达及功能

目的:研究钙库操纵性钙通道(store-operated calcium channels,SOCC)相关功能蛋白ORAI1-3和STIM1-2在人循环纤维细胞(circulating fibrocytes)中的表达及SOCC对人循环纤维细胞分化的影响。方法:采集健康人外周静脉血,分离出单个核细胞,体外培养分化为循环纤维细胞。采用RT-PCR和real-time PCR检测循环纤维细胞中ORAI1-3及STIM1-2的mRNA表达情况,并检测SOCC抑制剂对循环纤维细胞分化的影响。结果:Realtime PCR检测结果显示ORAI1-3和STIM1-2 mRNA在循环纤维细胞中有较高的表达水平,并且SOCC抑制剂SKF-96365对循环纤维细胞分化具有明显的抑制作用。结论:SOCC表达于循环纤维细胞中,并且影响循环纤维细胞的分化。

SOCE调控骨骼肌机能及运动干预研究进展

钙池操纵性钙内流(store-operated Ca^(2+) entry,SOCE)是由基质相互作用分子(stromalinteraction molecules,STIM)、钙释放激活钙通道蛋白(calcium release-activated calcium channel modulator,Orai)介导的细胞外Ca^(2+)内流过程,在钙库亏空时激活,对骨骼肌生理功能维持具有重要作用。运动通过重塑肌浆网与横小管结构对SOCE进程产生影响,是提高骨骼肌抗疲劳能力的关键。本文将以骨骼肌SOCE进程为核心,梳理该进程的分子机制及其在骨骼肌机能维持与失常中的作用,探讨运动干预对骨骼肌SOCE进程的影响,为进一步探索骨骼肌收缩、舒张机制,提高运动能力提供新思路。